肺腺癌中SPG20基因甲基化檢測及臨床意義

趙寶山，孫光蕊，邢志君，張志民，張 旭，梁宗英

（承德醫學院附屬醫院胸外科，承德 067000）

肺腺癌是全世界范圍內最常見的惡性腫瘤，且發病年齡的年輕化趨勢愈加明顯[1]。肺腺癌具有放化療不敏感、血行轉移早的特點，致使患者的總體預后不佳[2-3]。因此，提高肺腺癌的早期診斷率、發現評估預后的新指標和新靶點是肺腺癌治療的重中之重[4-5]。痙攣性截癱20（SPG20）是發現于肌肉截癱中的基因，其編碼的蛋白在細胞分裂周期的異常作用與腫瘤的發生具有相關性[6]；研究[7-9]表明，SPG20甲基化與結直腸癌、肝癌和胃癌之間存在密切關系，并作為早期事件。目前對于SPG20基因在肺腺癌組織內甲基化修飾的研究未見報道。本研究通過檢測肺腺癌組織內SPG20甲基化水平，探討其甲基化與肺腺癌發生和發展的相關性。

1 資料與方法

1.1 標本來源

選取2018年2月至2019年8月承德醫學院附屬醫院胸外科進行手術治療的70例原發肺腺癌患者。其中男性27例，女性43例；≥60歲者38例，<60歲者32例；吸煙患者22例，不吸煙患者48例；按照IASLC第八版制定的標準進行TNM分期[3]：Ⅰ期23例，Ⅱ期32例，Ⅲ期15例；組織學分級：高分化4例，中分化58例，低分化8例；有淋巴結轉移11例，無淋巴結轉移59例。實驗組：70例肺腺癌組織；對照組：70例正常肺組織（距癌組織＞6 cm，經術后病理鑒定）。

1.2 主要試劑和儀器

甲基化修飾試劑盒（德國QIAGEN公司）；焦磷酸測序試劑（CST公司）；DNA提取試劑盒（北京全式金生物技術股份有限公司）；Wizard Cleanup DNA純化回收系統（美國Sigma公司）、2×SYBR qPCR Master Mix（美國Promega公司）、PCR擴增儀（美國MJ Research公司）、Real-time PCR儀（MX3000P）（美國Startagene公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 DNA提取 取肺腺癌組織及癌旁組織標本100 mg，按照基因組DNA提取試劑盒說明和步驟分別提取DNA，并采用紫外分光光度計檢測提取的DNA含量和純度。提取后-20℃保存DNA。

1.3.2 亞硫酸氫鈉處理 取純化的DNA樣品20μL，以DNA重亞硫酸鹽轉化試劑盒對組織和血清樣本DNA進行亞硫酸鹽修飾。……