腫瘤特異性CD8+ T 細(xì)胞在三陰性乳腺癌免疫治療中的價(jià)值研究

王月鵬

TNBC 是乳腺癌的一種分型,占比約為10%～17%,主要臨床特點(diǎn)為孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)以及人表皮生長因子受體-2(HER-2)表達(dá)為陰性［1］。根據(jù)臨床資料顯示,發(fā)病患者年齡較小,病情進(jìn)展快速,且轉(zhuǎn)移率高。目前針對(duì)TNBC 患者免疫治療是重要研究方向,臨床試驗(yàn)效果具有突出優(yōu)勢(shì)。腫瘤特異性T細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞行為中起到促進(jìn)生長和清除的作用,是免疫治療中的重要觀察指標(biāo)［2］。腫瘤細(xì)胞在治療期間通過突變和間質(zhì)細(xì)胞作用,可躲避清除,造成癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。CD8+T 細(xì)胞在其中具有滅殺腫瘤細(xì)胞的重要作用,為了研究免疫治療中CD8+T 細(xì)胞的臨床價(jià)值,本文于本院2019 年1 月～2020 年1 月的患者癌組織中,隨機(jī)選取88 例進(jìn)行分析,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019 年1 月～2020 年1 月本院收治的88 例患者的癌組織為樣本,隨機(jī)分為對(duì)照組與觀察組,各44 例。并于兩組患者中各隨機(jī)抽取22 例取癌旁組織(共44 例)作對(duì)照。對(duì)照組中,女44 例,年齡(50.48±3.62)歲；根據(jù)WHO 分級(jí),Ⅰ～Ⅱ級(jí)22 例,Ⅲ級(jí)22 例。觀察組中,女44 例,年齡(51.62±3.50)歲；根據(jù)WHO 分級(jí),Ⅰ～Ⅱ級(jí)21 例,Ⅲ級(jí)23 例。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)照組患者均經(jīng)過組織學(xué)及免疫組化檢查,確診為非TNBC 患者；②觀察組確診為TNBC 患者［3］；③對(duì)本研究知情；④兩組患者預(yù)估生存期均>1 年,配合度高,全程參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已經(jīng)出現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的患者；②患有合并其他部位腫瘤的患者；③中途退出,不配合本研究的患者。

1.3方法 癌旁組織取患者腫瘤邊緣5 cm 外的正常組織。使用免疫組化染色處理,制作切片,進(jìn)行抗原修復(fù)。經(jīng)過孵育染色后,在顯微鏡下觀察。由2 名高年資病理科醫(yī)師進(jìn)行評(píng)估,得出統(tǒng)一結(jié)論。

1.4觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) ①對(duì)比兩組及癌旁組織中CD8+T 細(xì)胞表達(dá)結(jié)果。根據(jù)免疫組化評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［4］,通過顯微鏡觀察染色陽性腫瘤間質(zhì)細(xì)胞占比,統(tǒng)計(jì)視野內(nèi)陽性占比。通過計(jì)數(shù)法進(jìn)行免疫組織化學(xué)的評(píng)價(jià),按照計(jì)分制,0 分：0～5%；1 分：6%～25%；2 分：26%～50%；3 分：51%～75%；4 分：76%～100%。根據(jù)染色情況進(jìn)行計(jì)分,和背景顏色一致,0 分；呈現(xiàn)淡黃色,1 分；呈現(xiàn)棕黃色,2 分；呈現(xiàn)棕褐色,3 分。兩次分?jǐn)?shù)相乘后為最終評(píng)分,≥2 分,為陽性；<2 分,為陰性。②對(duì)比兩組WHO 分級(jí)和CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平的關(guān)系。③對(duì)比兩組復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移預(yù)后效果和CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平的關(guān)系。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組及癌旁組織中CD8+T 細(xì)胞表達(dá)結(jié)果對(duì)比觀察組與對(duì)照組CD8+T 細(xì)胞表達(dá)陽性率對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組與對(duì)照組CD8+T 細(xì)胞表達(dá)陽性率均高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組及癌旁組織中CD8+ T 細(xì)胞表達(dá)結(jié)果對(duì)比［n(%)］

2.2兩組WHO 分級(jí)和CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平的關(guān)系對(duì)比 觀察組中,WHOⅠ～Ⅱ級(jí)患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率明顯高于WHOⅢ級(jí)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組中,WHOⅠ～Ⅱ級(jí)患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率與WHOⅢ級(jí)患者對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組WHO 分級(jí)和CD8+ T 細(xì)胞表達(dá)水平的關(guān)系對(duì)比［n(%)］

2.3兩組復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移預(yù)后效果和CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平的關(guān)系對(duì)比 觀察組中,無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率明顯高于存在復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組中,無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率與存在復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 兩組復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移預(yù)后效果和CD8+ T 細(xì)胞表達(dá)水平的關(guān)系對(duì)比［n(%)］

3 討論

腫瘤發(fā)病和進(jìn)展都和人體免疫系統(tǒng)關(guān)系密切,腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移也受到免疫效益影響。其中腫瘤特異性淋巴細(xì)胞起到關(guān)鍵作用,和抗腫瘤治療關(guān)系密切［5］。其中CD8+T 細(xì)胞具有腫瘤抗原特異性,能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞起到殺傷作用。腫瘤特異性CD8+T 細(xì)胞在淋巴細(xì)胞浸潤中占據(jù)60%,在免疫治療和腫瘤疫苗研發(fā)中廣泛應(yīng)用［6］。目前已經(jīng)有研究證實(shí),CD8+T 細(xì)胞可以在微環(huán)境中對(duì)腫瘤細(xì)胞靶向殺傷,從而發(fā)揮出抗腫瘤的作用［7］。也有研究指出,CD8+T 細(xì)胞數(shù)量和乳腺癌患者的生存期存在正相關(guān)關(guān)系［8］。

TNBC 患者接受免疫治療通過維持人體免疫循環(huán)系統(tǒng),恢復(fù)正常的免疫功能,從而達(dá)到抗腫瘤作用,從而達(dá)到清除或控制腫瘤的效果。目前以PD-1/PD-L1為靶點(diǎn)進(jìn)行免疫治療較為常見,通過和B7 球蛋白配體結(jié)合,降低T 細(xì)胞活性,激活T 淋巴細(xì)胞以及B 淋巴細(xì)胞等。有研究指出,在TNBC 細(xì)胞中可見PD-1/PD-L1 表達(dá)。在腫瘤細(xì)胞微環(huán)境中,T 細(xì)胞表達(dá)PD-1分子結(jié)合腫瘤細(xì)胞表達(dá)的PD-L1,從而激活PD-1 通路,抑制T 細(xì)胞殺滅腫瘤細(xì)胞,造成腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。給予PD-1/PD-L1 抑制劑進(jìn)行免疫治療,阻斷PD-1 和PD-L1 結(jié)合,從而提高人體抗腫瘤機(jī)制,達(dá)到治療作用。過繼性免疫療法是將具備特異免疫的淋巴細(xì)胞輸入給患者,提高患者抗腫瘤免疫力。巨噬細(xì)胞、殺傷細(xì)胞以及CD8+T 細(xì)胞則是常見的效應(yīng)細(xì)胞,具有特異性免疫力［9］。最常用的就是CD8+T 細(xì)胞,通過體外篩選,選出具備靶向識(shí)別作用的CD8+T 細(xì)胞,或者直接對(duì)CD8+T 細(xì)胞受體序列進(jìn)行改變,實(shí)現(xiàn)靶向識(shí)別,能夠嵌合抗原受體。但由于經(jīng)過篩選后的CD8+T 細(xì)胞進(jìn)入人體后,并不能定居于實(shí)體瘤,抗腫瘤效果不佳［10］。但目前已經(jīng)有大量研究證明,CD8+T 細(xì)胞和患者預(yù)后關(guān)系密切,隨著CD8+T 細(xì)胞數(shù)量增加,患者預(yù)后效果越好。因此本研究選擇TNBC 患者和非TNBC 患者體內(nèi)CD8+T 細(xì)胞的表達(dá)情況展開研究,發(fā)現(xiàn)觀察組與對(duì)照組CD8+T 細(xì)胞表達(dá)陽性率均高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。證實(shí)乳腺癌患者CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平顯著高于健康人群,但在不同分型中,CD8+T細(xì)胞表達(dá)并無明顯差異。

CD8+T 細(xì)胞表達(dá)和TNBC 患者預(yù)后有密切關(guān)聯(lián),有研究指出,在TNBC 患者中CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平越高,對(duì)應(yīng)著患者無復(fù)發(fā)生存期越長,且臨床分期更好［11］。本研究證實(shí),觀察組中,WHOⅠ～Ⅱ級(jí)患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率明顯高于WHOⅢ級(jí)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組中,WHOⅠ～Ⅱ級(jí)患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率與WHOⅢ級(jí)患者對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。可見在TNBC 患者中,隨著CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平降低,患者病理分期惡化的可能性更高。在WHO 分級(jí)低,患者生存期長時(shí),惡性程度低,CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平更高,患者具有更好的預(yù)后效果［12］。CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平和預(yù)后效果具有一致性,本研究證實(shí),觀察組中,無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率明顯高于存在復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組中,無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的癌組織中CD8+T 細(xì)胞陽性率與存在復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。證實(shí)CD8+T細(xì)胞表達(dá)水平和TNBC 患者惡性程度以及預(yù)后效果有密切關(guān)系,CD8+T 細(xì)胞浸潤越多,表示TNBC 患者的預(yù)后越好,而在非TNBC 患者中并未表現(xiàn)出這一關(guān)聯(lián)性。

綜上所述,在TNBC 患者中CD8+T 細(xì)胞表達(dá)較高,陽性表達(dá)越高患者WHO 分級(jí)越低,復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率越低,CD8+T 細(xì)胞表達(dá)水平和TNBC 患者病理特征、惡性程度關(guān)系密切,在非TNBC 患者中并無這一關(guān)系。臨床上對(duì)CD8+T 細(xì)胞表達(dá)進(jìn)行監(jiān)控,能夠在一定程度上預(yù)測(cè)TNBC 患者的預(yù)后和病情進(jìn)展。