雞蛋花多糖提取工藝優化及生物活性研究

孫寧云，姚 欣，張英慧，楊安平，劉 輝,,

（1.佛山科學技術學院食品科學與工程學院，廣東佛山528225；2.佛山科學技術學院醫學院， 廣東佛山528000）

雞蛋花為夾竹桃科（Apocynaceae）雞蛋花屬植物雞蛋花（Plumeria rubraLinn.cv. Acutifolia）的干燥花，別名緬梔子、蛋黃花等。原產于墨西哥，在我國主要分布于廣東、廣西、海南等省區[1]。雞蛋花是嶺南地區常用藥材，具有清熱、利濕、解暑之功效。民間常采其泡茶、煲湯，用于消暑。雞蛋花是“王老吉涼茶”、“五花茶”等廣式涼茶的主要配方材料之一[2]。由于雞蛋花的特殊香氣，其提取物可用作高級化妝品、香皂和食品添加劑。化學成分研究表明雞蛋花主要含有三萜[3]、環烯醚萜[4-5]、黃酮[6]、糖類、脂肪族類等化合物[7-8]。現代藥理研究表明雞蛋花提取物具有抗氧化[6]、抗菌[9]、抗腫瘤[10]、降血糖[11]等活性。多糖是廣泛存在于植物、動物和微生物中一種分子結構復雜且龐大的糖類物質，具有抗氧化[12]、免疫調節[13]、抗腫瘤[14]、抗菌[15]、抗炎[16]、抗病毒[17]、降血糖及降血脂[18-19]等廣泛的生物活性。

不同雞蛋花屬的不同部位、不同溶劑提取物具有不同的藥理活性，如P. acuminate（leaves）甲醇提取物具有抗氧化和清除自由基的活性[20]，DAWOOD等[21]從白雞蛋花（Plumeria albaL.）葉中提取了粗多糖，并證明其具有較強的抗氧化能力。引入我國藥食同源的是黃雞蛋花(Plumeria rubraLinn.cv. Acutifolia）。廣式涼茶具有祛暑敗火氣，清熱解毒、生津止渴的功效。何蓉蓉等[22]以王老吉涼茶為藥物，通過葡萄糖耐受實驗來觀察應激和血糖代謝的關系，測定小鼠體內氧化水平和抗氧化能力的變化。結果表明：王老吉涼茶不僅能降低血漿中丙二醛（MDA）的含量，同時能夠顯著提高體內的抗氧化能力指數（ORAC）水平，可明顯緩解機體內的氧化應激狀態，改善糖代謝不足。

目前，對雞蛋花的研究主要集中在環烯醚萜類和揮發油方面，而關于雞蛋花多糖的研究鮮有報道。因此，本文首次對雞蛋花多糖提取工藝及抗氧化、抗菌、抗腫瘤活性進行研究，為雞蛋花在食品、醫藥方面的進一步開發利用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

雞蛋花干燥花 采于中國科學院南海生物醫學藥科技產業中心；葡萄糖、苯酚、過硫酸鉀、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2‘-聯氮-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）、二甲基亞砜 上海麥克林生化科技有限公司；CCK-8細胞毒性檢測試劑盒 亞科因（武漢）生物技術有限公司；LB培養基 青島海博生物技術有限公司；DMEM培養基和胎牛血清Biological Industries；胰酶、PBS 美國Gibco公司；青霉素、鏈霉素 上海撫生有限公司；菌種（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌） 廣東省微生物菌種保藏中心；細胞（A375細胞、B16細胞、MCF-7細胞、DLD-1細胞） 中國科學院上海細胞中心；其它化學試劑均為分析純。

060ST超聲波清洗器 深圳市華策科技有限公司；TG16-WS低溫高速離心機 美國Beckman公司；UV-2700 紫外分光光度計 島津企業管理（中國）有限公司；EPOCH 酶標儀 美國Bio Tek公司；LRH-150 智能生化培養箱 鄭州生元儀器有限公司；BB 5060 二氧化碳培養箱 致微（廈門）儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 雞蛋花多糖（PRLAP）提取工藝 取雞蛋花干燥花粉末→石油醚脫脂→超聲輔助水提→提取液濃縮→離心→ Sevage法除蛋白質→體積分數95%乙醇沉淀→洗滌沉淀→冷凍干燥→雞蛋花多糖（PRLAP）。

將曬干的雞蛋花干燥花粉碎，過60目篩，得雞蛋花粉末，取500 g雞蛋花粉末放入10 L的三口瓶中，加入10倍體積的石油醚進行脫脂、脫色至石油醚顏色接近無色，過濾，將雞蛋花濾渣放置烘箱中烘干，常溫下冷卻后，混勻轉移到保鮮袋中備用。稱取上述處理后的雞蛋花粉末1 g放置于50 mL三角瓶中。在一定超聲功率、液料比、提取時間和提取溫度下進行PRLAP的提取，待提取液冷卻到室溫，在10000 r/min條件下離心1 min，用Sevage法除蛋白質：取PRLAP溶液4 mL，氯仿-正丁醇（預先配制成體積比為4:1混合液）溶液1 mL，置于具塞試管中，充分振搖30 min后，10000 r/min離心1 min，然后將水相與氯仿相分開，將水相再加入相當于其體積1/4的氯仿-正丁醇溶液，重復上述過程，直至蛋白質除掉。將除蛋白后的提取液用95%的乙醇4 ℃醇沉12 h，之后在10000 r/min條件下離心1 min，棄去上清液，將得到的醇沉物溶解于水中，最后冷凍干燥得雞蛋花多糖。

1.2.2 單因素實驗設計 稱取1 g雞蛋花粉末3份，固定料液比1:40（g/mL）、提取時間30 min，提取溫度40 ℃，分別測定超聲功率在216、240、264、288、312 W時PRLAP得率。

稱取1 g雞蛋花粉末3份，固定超聲功率288 W、提取時間30 min、提取溫度40 ℃，分別測定料液比在1:20、1:30、1:40、1:50、1:60（g/mL）時PRLAP得率。

稱取1 g雞蛋花粉末3份，固定超聲功率288 W、料液比1:50（g/mL）、提取溫度40 ℃，分別測定提取時間在10、20、30、40、50 min時PRLAP得率。

稱取1 g雞蛋花粉末3份，固定超聲功率288 W、料液比1:50（g/mL）、提取時間40 min，分別測定提取溫度在35、40、45、50、55 ℃時PRLAP得率。

1.2.3 正交試驗優化 雞蛋花多糖提取工藝根據單因素實驗結果選擇超聲功率、料液比、提取時間、提取溫度為自變量，多糖得率為因變量，進行四因素三水平正交試驗，試驗因素設置見表1。

表1 L9（34）正交試驗因素水平及編碼Table 1 The factors and levels of L9(34)orthogonal experiment

1.2.4 PRLAP的測定

1.2.4.1 葡萄糖標準曲線的繪制 稱取真空干燥的葡萄糖標準品10 mg定容到100 mL容量瓶中，配成0.1 mg/mL的葡萄糖標準溶液。分別精密移取葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8 mL于大試管中，補加蒸餾水至1 mL，分別加入1 mL 5%苯酚，搖勻，再分別加入5 mL濃硫酸，于37 ℃水浴靜置30 min，在488 nm測吸光值。以葡萄糖濃度C為橫坐標（mg/mL），吸光值A為縱坐標，繪制葡萄糖標準曲線回歸方程為：A=0.0094C+0.0928，R2=0.993。

1.2.4.2 PRLAP含量測定 采用苯酚－硫酸法[23]進行PRLAP含量的測定。準確吸取樣品溶液1 mL于試管中，分別加5%苯酚溶液1 mL，振蕩搖勻，再分別加入濃硫酸5 mL，振蕩搖勻，于37 ℃水浴放置30 min，488 nm測定吸光值。根據測得的吸光值帶入標準曲線回歸方程，計算PRLAP濃度。根據公式（1）計算PRLAP得率。

式中：c表示根據吸光度值計算出的雞蛋花多糖質量濃度，g/mL；V表示提取液總體積，mL；n表示稀釋倍數；m表示雞蛋花取樣量，g。

1.2.5 PRLAP體外抗氧化活性研究

1.2.5.1 DPPH自由基清除率測定 根據WANG等[24]的方法稍作修改。取不同濃度（0.01562、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1 mg/mL）的PRLAP溶液以及相同濃度下的陽性對照VC對DPPH自由基清除率進行測定。步驟如下：實驗組于96孔板中依次加入上述濃度下的PRLAP或VC50 μL、0.1 mmol/L的DPPH溶液150 μL；實驗對照組依次加入上述濃度下的PRLAP或VC50 μL、蒸餾水150 μL；空白對照組依次加入蒸餾水50 μL、0.1 mmol/L的DPPH溶液150 μL。室溫避光處理30 min，517 nm處測其吸光度，根據公式（2）計算PRLAP和VC的清除率：

式中: A1：不同濃度的PRLAP或VC加DPPH測得的吸光值；A2：不同濃度的PRLAP或VC加水測得的吸光值；A0：只加水和DPPH所測得的吸光度值。

1.2.5.2 ABTS自由基清除率測定 根據TANG等[25]的方法稍作修改。取不同濃度（0.01562、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1 mg/mL）的PRLAP溶液以及相同濃度下的陽性對照VC對ABTS自由基清除率進行測定。步驟如下：實驗組于96孔板中依次加入上述濃度下的PRLAP或VC50 μL、7 mmol/L ABTS和4.95 mmol/L K2S2O8混合液150 μL；實驗對照組依次加入上述濃度下的PRLAP或VC50 μL、蒸餾水150 μL；空白對照組依次加入蒸餾水50 μL、7 mmol/L ABTS和4.95 mmol/L K2S2O8混合液150 μL。室溫避光處理30 min，734 nm處測其吸光值，根據公式（3）計算PRLAP和VC的清除率：

式中：A1表示不同濃度的PRLAP或VC加ABTS和K2S2O8混合液測得的吸光值；A2表示不同濃度的PRLAP或VC加水測得的吸光值；A0表示只加水和ABTS和K2S2O8混合液所測得的吸光度值。

1.2.5.3 OH自由基清除率測定 根據王迦琦等[26]的方法稍作修改。取不同濃度（0.01562、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1 mg/mL）的PRLAP溶液以及相同濃度下的陽性對照VC對OH自由基清除率進行測定。步驟如下：實驗組于96孔板中依次加入預先配制9 mmol/L的FeSO4、上述濃度下的PRLAP或VC、9 mmol/L水楊酸以及8.8 mmol/L 30% H2O2各50 μL；實驗對照組依次加入9 mmol/L的FeSO4、上述濃度下的PRLAP或VC、蒸餾水以及8.8 mmol/L 30% H2O2各50 μL；空白對照組依次加入9 mmol/L的FeSO4、蒸餾水、9 mmol/L水楊酸以及8.8 mmol/L 30% H2O2各50 μL。搖床混勻，室溫靜置30 min后，510 nm處測其吸光度值，根據公式（4）計算PRLAP和VC的清除率：

式中：A1表示不同濃度的PRLAP或VC加入FeSO4、水楊酸、H2O2測得的吸光值；A2表示不同濃度的PRLAP或VC加入FeSO4、蒸餾水、H2O2測得的吸光值；A0表示蒸餾水加入FeSO4、水楊酸、H2O2測得的吸光度值。

1.2.6 PRLAP抑菌活性測定 采用微量肉湯稀釋法測PRLAP對供試菌的MIC。具體步驟如下：將大腸桿菌（Eco）、金黃色葡萄球菌（Sau）、銅綠假單胞菌（Pae）、肺炎克雷伯菌（Kpn）、鮑曼不動桿菌（Ab）在牛肉膏蛋白胨培養基接種后，于37 ℃培養24 h，制備105CFU/mL菌懸液和50 mg/mL PRLAP溶液。在96孔板中進行樣品稀釋和接種，2～11孔每孔加入營養肉湯100 μL，第12孔中加入營養肉湯200 μL；第1孔中加入50 mg/mL PRLAP溶液200 μL，倍比稀釋至第10孔；1～11孔均加入100 μL菌液；37 ℃培養箱孵育16～18 h。此外需設置色素對照，96孔板中第1孔中加入50 mg/mL PRLAP溶液200 μL，2～11孔每孔加入營養肉湯100 μL，第12孔加入營養肉湯200 μL，最后1～11孔均加入100 μL菌液，用酶標儀在600 nm測吸收值，將試驗組1～10孔吸光值與色素對照組1～10孔吸光值做差，然后將差值與試驗組第11孔（陽性對照組）和第12孔（陰性對照組）結果作比較，差值接近試驗組第12孔與色素對照第12孔之差的最小濃度為MIC。

1.2.7 PRLAP對腫瘤細胞活力的影響 采用CCK-8法測定PRLAP對腫瘤細胞活力抑制率。首先用DMEM基礎培養基將PRLAP配制成0、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μg/mL 7個給藥濃度。在37 ℃飽和濕度、5% CO2條件下培養A375、DLD-1、B16和MCF-7細胞。取對數生長期的細胞，分裝到96孔板中，調整細胞濃度使每孔約5000個細胞，在CO2培養箱中培養24 h。取不同濃度（0、3.125、6.25、12.5、25、50、100 μg/mL）的PRLAP溶液，依次從低濃度到高濃度加入96孔板中，每孔100 μL，在37 ℃培養箱中培養48 h。吸出孔內溶液，然后向每孔內加入100 μL含10% CCK-8試劑的基礎培養基，在37 ℃培養箱內培養1～2 h，用酶標儀在450 nm處檢測吸收值，根據公式（5）計算細胞活力。

式中：A0表示空白對照吸光值；An表示加入樣品溶液吸光值。

1.3 數據處理

實驗結果均為三次平行實驗，數據表示為Mean（平均值）±SD（標準差）。并采用Microsoft Office Excel 2019、SPSS 23.0及GraphPad Prism 8軟件進行實驗數據的處理、分析及繪圖。

2 結果與分析

2.1 單因素實驗結果

2.1.1 超聲功率對PRLAP得率的影響 從圖1可以看出，超聲功率在216～288 W范圍內多糖得率隨功率升高而增大，到288 W時達到最大值為5.24%±0.12%，這是由于超聲波的空化作用使細胞易于破碎，有利于多糖析出。當功率超過288 W時多糖得率下降，這可能是因為超聲功率過大，對細胞的破壞作用增大，使多糖的糖苷鍵斷裂，引起多糖解聚從而使得得率降低[27-28]。因此，選取264、288、312 W進行正交試驗。

圖1 超聲功率對PRLAP得率的影響Fig.1 Effect of ultrasonic power onthe yield of PRLAP

2.1.2 料液比對PRLAP得率的影響 由圖2可知，多糖得率隨料液比得增大而提高，到1:50（g/mL）時達到最大值為9.25%±0.08%，之后得率開始下降。原因可能是溶劑與原料的比例越大，植物細胞內部與外部溶劑的濃度差異越大，多糖的擴散速度也越快，更多的多糖分子可溶于水中，從而提高得率。但如果繼續增加溶劑與原料的比例，水溶性多糖的濃度也會降低，導致溶劑揮發量增加，能量消耗增加，得率下降[29]。因此，選取1:40、1:50、1:60（g/mL）進行正交試驗。

圖2 料液比對PRLAP得率的影響Fig.2 Effect of ratio of raw materia to water on the yield of PRLAP

2.1.3 提取時間對PRLAP得率的影響 從圖3可以看出，多糖得率在10～30 min范圍內隨時間的增加而提高，隨著時間的延長，雞蛋花細胞破碎使多糖釋放，到30 min時達到最大值為9.78%±0.14%，但超聲波作用時間過長，空化作用力會使得提取物中部分多糖糖鏈受到破壞，導致得率下降[30]。因此選擇20、30、40 min進行正交試驗。

圖3 提取時間對PRLAP得率得影響Fig.3 Effect of extraction time on yield of PRLAP

2.1.4 提取溫度對PRLAP得率的影響 從圖4可以看出，雞蛋花多糖得率在40 ℃時達到最高值為13.34%±0.18%，隨著溫度的升高，多糖溶解度增加，因此多糖得率提高。當提取溫度超過40 ℃時，多糖得率降低；可能是因為較高溫度會導致空化氣泡數目減少，空化效應減弱從而導致多糖得率降低[31]。因此，選擇35、40、45 ℃進行正交試驗。

圖4 提取溫度對PRLAP得率的影響Fig.4 Effect of extract temperature on yield of PRLAP

2.2 正交試驗結果分析

按1.2.3給出的水平來設計L9（34）正交試驗，得雞蛋花多糖最佳提取工藝參數，并考察各因素對雞蛋花多糖得率影響的主次順序。正交試驗結果見表2，方差分析見表3。

表2 正交試驗結果Table 2 Orthogonal experiment results

表3 PRLAP正交試驗方差分析Table 3 Variance analysis of orthogonal experiment of PRLAP

如表2所示，通過直觀分析得出影響雞蛋花多糖得率主次因素依次是提取溫度（D）＞提取時間（C）＞料液比（B）＞超聲功率（A），最佳提取工藝組合為A1B2C3D1，即超聲功率為264 W、料液比為1:50（g/mL）、提取時間為40 min、提取溫度為35 ℃。由表3方差分析可得，超聲功率、料液比、提取時間、提取溫度達到極顯著水平（P＜0.01），說明主效應存在，四種因素會對雞蛋花多糖得率產生差異關系。

為了評價最佳提取工藝的穩定性，稱取雞蛋花干燥花粉末3 g進行重復實驗，多糖提取率分別為13.95%、13.98%和14.11%，平均值為14.01%±0.22%。相對偏差（RSD）為1.6%，表明該工藝重復性良好，適合雞蛋花多糖的提取。

2.3 PRLAP體外抗氧化活性測定

2.3.1 DPPH自由基清除能力 由圖5可知，PRLAP對DPPH的清除作用呈濃度依賴型，在0.016～0.500 mg/mL范圍內隨著濃度的升高清除作用顯著增強，質量濃度大于0.500 mg/mL后，清除作用增強緩慢，濃度到1 mg/mL時清除率可達到94.44%±0.17%，此濃度下VC對DPPH自由基的清除率為94.95%±0.63%，這時PRLAP對DPPH的清除率與VC相當，說明PRLAP具有較強的清除DPPH自由基的作用。PRLAP清除DPPH自由基的IC50為0.1934 mg/mL。DAWOOD等[21]研究表明白雞蛋花葉多糖濃度在3 mg/mL時，對DPPH自由基清除率為84.18%。由此可知，PRLAP清除DPPH自由基的作用遠強于白雞蛋花葉多糖。PRLAP可作為抗氧化劑進一步開發利用。

圖5 PRLAP和VC對DPPH自由基清除率的影響Fig.5 Effect of PRLAP and Vc on DPPH free radical scavenging rated

2.3.2 ABTS自由基清除能力 由圖6可知，PRLAP在0.016～0.500 mg/mL范圍內隨著濃度的升高對ABTS自由基清除率顯著增強，質量濃度大于0.500 mg/mL后，清除作用趨于平緩，多糖濃度為1 mg/mL時其對ABTS自由基的清除作用與VC接近，說明PRLAP對ABTS自由基的清除能力較強。PRLAP清除ABTS自由基的IC50為0.2315 mg/mL。由此可知，PRLAP對ABTS自由基和DPPH自由基都具有較強的清除能力，這與文獻報道的金針菇多糖[24]具有相似的抗氧化活性。

圖6 PRLAP和VC對ABTS自由基清除率的影響Fig.6 Effect of PRLAP and Vc on ABTS free radical scavenging rated

2.3.3 OH自由基清除能力 由圖7可知，PRLAP對OH自由基具有一定的清除能力，隨著PRLAP濃度升高，清除率增強。當濃度為1 mg/mL時OH自由基清除率可達到35.38%±3.20%，其清除效果與文獻報道的綠球藻多糖[32]和滑子菇多糖[33]相當。PRLAP清除OH自由基的IC50為2.469 mg/mL。雖然PRLAP對OH自由基清除效果弱于VC，但具有一定的清除作用。上述可知，PRLAP對ABTS自由基和DPPH自由基具有較強的清除作用，而對OH自由基清除效果較弱，這是因為多糖含有較多羥基，可提供質子與ABTS自由基和DPPH自由基反應，達到抗氧化作用[34]。而OH自由基通常是以氧化其它物質（親電加成反應）而達到清除作用[35]，因此PRLAP對OH自由基的清除作用弱于ABTS自由基和DPPH自由基。

圖7 PRLAP和VC對OH自由基清除率的影響Fig.7 Effect of PRLAP and Vc on OH free radical scavenging rated

2.4 PRLAP體外抗菌活性評價

由表4可知，五種菌種的MIC順序為銅綠假單胞菌=肺炎克雷伯菌=鮑曼不動桿菌＞大腸桿菌＞金黃色葡萄球菌，金黃色葡萄球菌的MIC最低為0.195 mg/mL，大腸桿菌的MIC相對較低為0.391 mg/mL，PRLAP對銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌的MIC相同均為1.562 mg/mL。結果表明PRLAP對以上五種菌種都有一定的抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌的抑制效果最好。該結果與THIN等[36]提取的Plumeria acutifoliaPoir.莖皮水提物抑菌活性具有一致性，其對金黃色葡萄球菌抑菌效果最好，抑菌圈為12 mm。

表4 PRLAP的MICTable 4 Minimum inhibitory concentration of PRLAP

2.5 PRLAP體外抗腫瘤活性評價

從圖8可以看出，在3.125～100 μg/mL濃度范圍內，A375、B16、MCF-7細胞活力與多糖溶液濃度呈劑量依賴性，隨多糖濃度的增大而減小且與對照組相比具有顯著性差異（P＜0.05），說明PRLAP對這三種腫瘤細胞增殖具有一定的抑制作用，其中對MCF-7細胞活力抑制效果與DAWOOD等[37]研究結果近似，在6.25～100 μg/mL濃度范圍內短穗魚尾葵果實和叢櫚果實多糖對MCF-7細胞活力都有較好的抑制作用。而DLD-1細胞活力與空白對照相比變化不大，PRLAP對DLD-1細胞增殖抑制效果不明顯，說明在此濃度范圍內DLD-1對PRLAP不敏感。經計算A375、B16、MCF-7細胞的IC50值分別為101.3、285.6、423.1 μg/mL。

圖8 PRLAP對腫瘤細胞活力的影響Fig.8 Effect of PRLAP on cell viability

3 結論

本研究通過單因素實驗和L9（34）正交試驗優化了PRLAP提取工藝，分析得出超聲功率、料液比、提取時間、提取溫度對雞蛋花多糖得率的影響，并確定了最佳提取工藝：超聲功率264 W、料液比1:50（g/mL）、提取時間40 min、提取溫度35 ℃，在此條件下多糖得率為14.01%±0.22%，說明此工藝提取參數可靠，提取效率高，適合PRLAP的提取。此外，PRLAP具有良好的體外抗氧化、抗菌、抗腫瘤活性。抗氧化實驗結果表明，PRLAP對DPPH、ABTS自由基具有較強的體外抗氧化活性，當濃度為1 mg/mL時，PRLAP對這兩種自由基的清除率可達90%以上，接近VC的效果，與DPPH和ABTS清除率相比PRLAP對OH自由基的清除能力稍弱，但也具有一定的抑制作用，由此可見，PRLAP可作為一種潛在的天然抗氧化劑應用在食品、醫藥等領域。此外，通過大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、肺炎克雷伯菌的MIC測定結果可知，雞蛋花多糖對上述供試菌均有一定的抑制作用，MIC分別為0.391、0.195、1.562、1.562、1.562 mg/mL，其中對金黃色葡萄球菌的抑制效果最好，其MIC最小。本研究選取了A375、B16、DLD-1、MCF-7細胞來檢測PRLAP對腫瘤細胞增殖的抑制作用，結果表明除DLD-1細胞外，此多糖對A375、B16、MCF-7細胞活力均有一定的抑制效果，細胞活力隨PRLAP濃度的增大而減小，但其作用機制還有待深入研究。

本研究主要集中在雞蛋花多糖提取工藝、體外活性方面。此后還需要對PRLAP進行分離純化和結構鑒定，并進一步研究PRLAP與其活性之間的關系。此外，為了更好地確定PRLAP對人體健康的影響，必須進行體內實驗和臨床研究，使其在食品、醫藥和醫學領域得到更廣泛的應用。