八桂止痛膏治療帶狀皰疹后遺神經痛的網絡藥理學研究進展

成 潔，廖承成

(云南中醫藥大學第一臨床醫學院，云南 昆明 650500)

帶狀皰疹后遺神經痛(postherpetic neuralgia，PHN)是帶狀皰疹最常見的并發癥，其發病率占帶狀皰疹患者的5%～30%[1]。目前臨床上常用的治療方法包括使用鈣離子通道調節劑、三環類抗抑郁藥、阿片類鎮痛藥、利多卡因等[2]。一線藥物如抗抑郁藥和抗驚厥藥臨床療效肯定，但由于其存在不良反應，并不適用于所有的PHN患者，尤其是老年患者[3]。中醫治療PHN副作用小，療效及預后良好[4-5]。八桂止痛膏是劉復興教授治療各種皮膚疼痛癥如帶狀皰疹、PHN等的自擬方[6]，臨床應用療效較好[7]。本文通過采用網絡藥理學方法[8]，篩選八桂止痛膏中治療PHN帶狀皰疹后遺神經痛的有效成分，預測其作用靶點和作用機制，為臨床用藥提供依據。

1 八桂止痛膏的中醫認識

八桂止痛膏由桂枝、透骨草、三棱、莪術、八角楓、昆明山海棠、大黃組成。方中桂枝為君藥，性溫，味辛、甘，《長沙藥解》言桂枝“入肝家而行血分，走經絡而達營郁……舒筋脈之急攣，利關節之壅阻，入肝膽而散遏抑，極止痛楚，通經絡而開痹澀……”，說明桂枝能溫通經脈、通利關節、止痛。大黃與透骨草同為臣藥，大黃味苦，氣大寒，《本草新編》云：“散堅聚，止疼痛，敗癰疽熱毒，消腫脹，俱各如神。”透骨草性溫，味辛、甘，《滇南本草》言：“子，治痰火筋骨疼痛，泡酒用之良，其根、梗，洗風寒濕痹，筋骨疼痛，暖筋透骨，熬水洗之”，故透骨草能加強桂枝作用。三棱、莪術同為佐藥，三棱性平，味苦，莪術性溫，味微苦、辛。《醫學衷中參西錄》中對三棱、莪術解：“其行氣之力，又能治心腹疼痛，脅下脹疼，一切血凝氣滯之證。” 八角楓、昆明山海棠同為使藥，昆明山海棠味辛、苦，性微溫，具祛風除濕、解毒殺蟲、舒筋接骨等功效；八角楓散瘀止痛、舒筋活絡、祛風除濕。全方共奏通絡止痛、行氣活血之功。

2 八桂止痛膏活性成分及靶點

2.1 八桂止痛膏的活性成分及PHN相關靶點收集 將八桂止痛膏中的桂枝、透骨草、三棱、莪術、大黃輸入到TCMSP數據庫，以分子量小于<500，油水分配系數為1～4，藥物相似物≥0.18為標準[9]，篩選出八桂止痛膏中經皮吸收的主要活性成分及靶點；在BATMAN-TCM數據庫補充檢索八角楓、昆明山海棠的活性成分和靶點，將檢索條件設置為“score cutoff≥20，P-value cutoff<0.05”。篩選結束后整合上述信息，并統一在UniProt數據庫將靶點名稱轉換為對應的基因名稱。結果共收集八桂止痛膏藥物活性成分41種，其中桂枝5種、透骨草5種、三棱3種、莪術5種、大黃17種、八角楓1種、昆明山海棠5種，去重后得到活性成分共34種。篩選八桂止痛膏中化學成分的靶點，利用Excel合并去重后得到241個靶點。以“postherpetic neuralgia”為關鍵詞，分別在Drugbank、GeneCards、OMIM和TTD數據庫中檢索與PHN相關的靶點，利用Excel合并去重后，得到PHN相關靶點147個。

2.2 八桂止痛膏-PHN相關網絡的構建與分析 將中藥、活性成分及靶點利用Excel制作文件，將數據輸入Cytoscape 3.9.1 軟件中，構建“中藥-活性成分-靶點”網絡圖。該網絡圖共包含282個節點，525條相互作用關系，Degree排序居前10位的化合物(具體度值)為槲皮素(138)、山奈酚(54)、八角楓堿(43)、刺芒柄花素(32)、大黃素(30)、蘆薈大黃素(22)、香豆素343(19)、天竺葵素(14)、大黃素甲醚(12)、花旗松素(11)。將八桂止痛膏的241個中藥活性成分預測靶點與147個PHN相關靶點基因導入Veeny 2.1.0在線工具，得到交集靶點26個，同時繪制韋恩圖。將得到的交集靶點上傳STRING數據庫，最后得到八桂止痛膏活性成分靶點和PHN靶點的蛋白質互作(protein-protein interaction，PPI)網絡圖。導出該網絡的tsv文件，并將其導入Cytoscape 3.9.1 軟件中進行可視化分析，結果顯示圖中共有26個節點，節點形狀越大，顏色越鮮明，表示度值越大，度值越大則表明其在網絡中越關鍵，Degree排名前5位的靶點分別為TNF、PTGS2、NR3C1、ESR1、EGFR。

2.3 GO及KEGG富集分析結果 應用Metascape數據庫對八桂止痛膏與PHN交集的26個靶點進行GO及KEGG富集分析，通過微生信在線作圖平臺對結果進行可視化網絡處理。26個交集靶點進行GO富集分析獲得條目433個，其中細胞組分28個，生物過程368個，分子功能37個。GO富集分析結果提示，Biological process分析主要包括調節管徑、細胞對有機化合物的反應、對異種生物刺激的反應、調節離子運輸、調節激素水平、G蛋白偶聯5-羥色胺受體信號通路、對雌二醇的反應等；Cellular component分析主要包括膜筏、突觸膜、樹突、神經元細胞體等；Molecular function分析主要包括G蛋白偶聯受體活性、腎上腺素能受體活性、血紅素結合、細胞因子活性、類固醇結合、鈉離子跨膜轉運蛋白活性等。KEGG富集分析獲得通路48條，主要涉及鈣信號通路、神經活性配體-受體相互作用、唾液分泌、心肌細胞的腎上腺素信號傳導、cGMP-PKG信號通路、血管平滑肌收縮、化學致癌-受體激活、類固醇激素生物合成、T細胞受體信號通路等。

3 網絡藥理學結果分析

PHN發病機制尚未完全明確，可能與炎癥、神經炎癥、外周及中樞機制、細胞免疫、大腦情緒調控及相關蛋白共同參與有關[10-11]。從“中藥-活性成分-靶點”網絡圖中可以知道，槲皮素、山奈酚、八角楓堿等可能是八桂止痛膏治療PHN的有效成分。槲皮素具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用[12-13]，而調節炎癥是槲皮素最核心、最顯著的作用[14]。槲皮素是選擇性COX-2抑制劑，能促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，又能抑制其T、B細胞的增殖，抑制T細胞分泌TNF-α、IL-6、TNF-γ，有良好的抗炎活性，且能調節免疫反應[15]。山奈酚是一種黃酮類化合物，其作用主要有抗炎、抗氧化、抗缺血損傷、抗抑郁、抗癡呆等[16]。山奈酚及其衍生物可顯著降低TNF-α、IL-6等炎癥相關因子的表達。八角楓堿具有鎮痛、抗炎、肌肉松弛等作用[17-18]。

PPI網絡圖提示TNF-α、前列素內環氧化物合成酶 2(PTGS2)、糖皮質激素受體基因(NR3C1)等可能是關鍵靶點基因。TNF-α具有參與免疫應答、介導炎癥反應等多重作用，當血清中TNF-α水平異常升高時，細胞免疫受抑制，導致皰疹病毒活化、擴散，引發疼痛[19]。細胞受刺激時，PTGS2通過影響花生四烯酸代謝產生前列腺素，引發疼痛和炎癥反應。NR3C1參與炎癥反應、細胞增殖和組織分化。有研究表明，NR3C1與抑郁癥、慢性疼痛等有關[20]。

GO富集分析發現，八桂止痛膏主要參與細胞對有機化合物的反應、離子運輸、激素水平調節、對雌二醇的反應等多個生物過程。KEGG富集分析結果表明，八桂止痛膏主要影響鈣信號通路、神經活性配體-受體相互作用、心肌細胞的腎上腺素信號傳導、血管平滑肌收縮等。有研究表明，對于軀體感覺神經系統病變或疾病引起的神經性疼痛如三叉神經痛、PHN等，主要治療方法包括服用作用于鈣通道、鈉通道和下行調節抑制途徑的藥物，表明鈣通道在PHN中起關鍵作用[21]。Qiu等[22]通過生物學信息分析發現，PHN主要參與神經活性受體-配體相互作用、JAK-STAT信號和鈣通道活性等通路。此外，T細胞受體信號通路也值得關注。機體感染水痘-帶狀皰疹病毒后，輔助性T細胞活化和增殖作用明顯，炎性因子分泌量增加，會抑制機體抗病毒應答機制，減弱細胞免疫反應，降低CD8+、CD3+、CD4+等T細胞亞群水平[23]。Sutherland等[24]通過對PHN患者手術切除的神經節中獲得的福爾馬林固定石蠟包埋切片進行分析，最后得出結論：帶狀皰疹后數年和PHN期間，T細胞在人神經節中持續存在。PHN臨床治療關鍵是維持正常T細胞亞群水平[25]，這為臨床診治提供了參考方向。從富集結果來看，有一些通路可能是會被忽略的，如炎癥性腸病涉及通路等，但有研究發現，這些疾病之間存在一定的內在聯系[26-27]，可為臨床研究PHN與哪些疾病之間存在聯系提供參考。對KEGG富集的48條通路研究時發現，IL-17信號通路、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路參與其中。IL-17是T細胞誘導的炎癥反應的早期啟動因子，可以通過促進釋放前炎性細胞因子來放大炎癥反應，IL-17與受體結合后，可通過MAPK和核轉錄因子κB(NF-κB)途徑發揮其生物作用，這也為探究MAPK、NF-κB信號通路與PHN之間的聯系提供了思路。

4 八桂止痛膏的臨床應用

八桂止痛膏有抗炎、抗病毒、止痛等功效，可主治各種皮膚痛癥及病毒性皮膚病、皮膚包塊等，如帶狀皰疹及PHN、皮膚軟組織挫傷、外傷腫脹及類風濕性關節炎等。但在使用時應注重其加減變化，寒痛甚者可加草烏、川烏、威靈仙等，熱痛甚者可加冰片、生梔子、生大黃等，皮損肥厚者可加烏梅、蜈蚣等[6]。

5 小結與展望

八桂止痛膏中含有多種有效活性成分，可通過多靶點、多通路治療PHN，且大量文獻分析發現大多數靶點和PHN治療相關，為本課題前期實驗結果[28]和后續臨床開發提供了參考。在臨床應用中，可結合八桂止痛膏的中藥配伍特點及網絡藥理學治療靶點，探索其更廣泛的適應證，從而減輕疼痛，提高患者生活質量。