加味烏梅散水提物解熱、鎮痛和抗炎作用的研究

尹 皚

(眉山職業技術學院 ， 四川 眉山 620000)

加味烏梅散水提物是由2015版獸藥典中烏梅散加減而來，主要由烏梅、黃連、姜黃、訶子、黨參、白術和茯苓組成，并通過煎煮后噴霧干燥而成。加味烏梅散方中烏梅具有斂肺、澀腸、生津、安蛔之功效，黃連清熱燥濕、瀉火解毒，共為君藥，具有解熱、抗炎、抗菌等藥理作用；以苦寒之姜黃、訶子為臣，破血行氣，通經止痛，澀腸止瀉；黨參、白術、茯苓健脾益氣、利水滲濕為佐[1]。全方配伍，共奏清熱解毒、澀腸止瀉、健脾益氣之功。為了探討加味烏梅散更多的藥理作用，本試驗通過傳統的試驗方法研究烏梅散水提物的解熱、鎮痛和抗炎作用，以期為加味烏梅散的臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級KM小鼠150只，體重(20±2)g，雌雄各半；SD大鼠60只，體重(160±10) g，雌雄各半，均購自成都達碩實驗動物有限公司，許可證號:SCXK(川) 2014—028。專人飼養管理，自由飲食。常規飼養7 d后，根據需要選擇健康小鼠、大鼠開展試驗。

1.2 試驗藥物 加味烏梅散水提物，由實驗室自制：將中藥烏梅150 g、黨參150 g、黃連100 g、姜黃100 g、訶子120 g、白術80 g、茯苓80 g粉碎后過10目篩，提取3 次，第1 次加20 倍量水浸泡1 h 后煎煮2 h，第2 次加15倍量水煎煮1.5 h，第3次加10倍量水煎煮1 h，紗布、藥棉過濾后合并濾液，在80 ℃下真空減壓濃縮至相對密度為1.2 g/mL，得到提取濃縮液。濃縮液4 000 g離心30 min，過濾，濾液噴霧干燥即得(每1 g相當于原生藥材10 g)；拜阿司匹靈腸溶片，購自拜耳醫藥保健有限公司(規格:100 mg/片)。

1.3 主要儀器與試劑 電子天平(型號為JA1003N)，購自上海菁華儀器有限公司；數字溫度計(型號為MC-6830L)，購自日本歐姆龍公司；智能熱板儀(型號為ZH-YLS-6BS)，購自安徽正華生物儀器設備有限公司；酶標儀(型號為Multiskan FC)，購自賽默飛世爾儀器有限公司；臺式離心機(型號為JIDI-4D-WS)，購自廣州吉迪儀器有限公司。二甲苯、醋酸、伊文思藍等生化試劑，均購自成都科飛試劑公司；安琪高活性干酵母，購自安琪酵母股份有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 加味烏梅散水提物對干酵母致大鼠發熱影響試驗 選擇健康SD 大鼠(雌雄各半)60 只，隨機分為6個組，每組10 只。分別為對照組、模型組、阿司匹林組及加味烏梅散水提物低、中、高劑量組，同時記錄基礎溫度。對照組與模型組分別按照純化水1 mL/(100 g·bw)灌胃，阿司匹林組按照100 mg/(kg·bw)灌胃，加味烏梅散水提物低、中、高劑量組按照20、40 mg/(kg·bw)和80 mg/(kg·bw)的劑量灌胃，各組灌胃總容量都按照1 mL/(100 g·bw)進行，1 次/d，連續給藥7 d。第7天灌胃結束后，禁食12 h，每只SD大鼠背部按7 mL/(kg·bw)皮下注射20% 酵母混懸液，并測定其注射后1、2、3 h和4 h的肛溫，記錄體溫變化。

1.4.2 加味烏梅散水提物對熱板致小鼠疼痛試驗 將健康雌性小鼠放入溫度設置為(55.0±0.5)℃的智能熱板儀內，觀察小鼠出現舔后肢或扭頭為痛作為指標，記錄痛閾值，間隔10 min再測定1次，在5～30 s 出現疼痛反應的小鼠為疼痛試驗合格小鼠。選取合格小鼠50只，隨機分成對照組、阿司匹林組、加味烏梅散水提物低、中、高劑量組。其中，對照組按0.1 mL/(10 g·bw)灌純化水；阿司匹林組按100 mg/(kg·bw)灌胃給藥阿司匹林，加味烏梅散水提物低、中、高劑量組以大鼠與小鼠等量換算后按照30、 60 mg/(kg·bw)和120 mg/(kg·bw)的劑量灌胃，各組灌胃容量都按照0.1 mL/(10 g·bw)進行，1 次/d，連續給藥7 d。測定末次給藥后60 min 時的痛閾值(以60 s進行計算)。按照公式(1)計算痛閾提高百分率。

痛閾提高百分率/%=(用藥后平均痛閾值-用藥前平均痛閾值)/用藥前平均痛閾值×100%

(1)

1.4.3 加味烏梅散水提物對醋酸致小鼠扭體影響試驗 試驗取健康雄性KM小鼠50只，隨機分為5個組:對照組、阿司匹林組、加味烏梅散水提物低、中、高劑量組，并按1.4.2方法給藥。末次給藥30 min 后，各組小鼠均按0.1 mL/(10 g·bw) 腹腔注射新配制的0.6%醋酸溶液。觀察醋酸溶液注射后20 min 內的扭體反應次數。比較各組的扭體次數，按照公式(2)計算鎮痛百分率。

鎮痛百分率/%=(對照組平均扭體次數-試驗組平均扭體次數)/對照組平均扭體次數×100%

(2)

1.4.4 加味烏梅散水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹影響試驗 取健康KM小鼠50 只，雌雄各半，分組及給藥同1.4.2。于末次給藥30 min 后，用二甲苯以0.03 mL/只劑量均勻涂抹小鼠右耳兩面致炎。30 min 后處死小鼠，并用打孔器(直徑8 mm)對左右耳取樣，電子天平稱重，按照公式(3)以兩耳的重量差表示腫脹度，并按照公式(4)計算腫脹抑制率。

腫脹度=右耳耳片質量-左耳耳片質量

(3)

腫脹抑制率/%=[(模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度]×100%

(4)

1.5 統計分析 用SPSS 21.0統計學軟件進行顯著檢驗，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)進行組間顯著性比較，數據以“平均數±標準差”表示，P<0.05 為差異顯著，有統計學意義。

2 結果

2.1 加味烏梅散水提物對干酵母致大鼠發熱的影響 由表1可知，大鼠皮下注射酵母后，除對照組外，各組平均體溫至少升高1 ℃，符合試驗要求。各組基礎體溫和給藥前的體溫無顯著差異(P>0.05)。給藥1 h后，模型組的體溫比對照組顯著提高6.78%(P<0.05)；阿司匹林組的體溫比模型組顯著降低3.34%(P<0.05)。加味烏梅散水提物低、中、高劑量各組的體溫比對照組分別顯著提高7.02%、6.45%、6.50%(P<0.05)；與阿司匹林組比較顯著提高4.02%、3.46%、3.52%(P<0.05)。給藥2 h時，模型組與對照組比較，大鼠體溫顯著提高5.59%(P<0.05)；阿司匹林組與模型組比較顯著降低3.35%(P<0.05)；加味烏梅散水提物低、中、高劑量各組與對照組比較，大鼠體溫顯著提高5.67%、4.91%、3.32%(P<0.05)；低、中劑量組與阿司匹林組比較顯著提高3.54%、2.80%(P<0.05)。給藥3 h后，模型組與對照組比較，大鼠體溫顯著提高5.68%(P<0.05)；阿司匹林組與模型組比較顯著降低3.60%(P<0.05)。加味烏梅散水提物僅低劑量組比對照組、阿司匹林組顯著提高5.60%、3.66%(P<0.05)；高劑量組比模型組顯著降低2.70%(P<0.05)。給藥4 h后，模型組仍然顯著高于對照組3.80%(P<0.05)；阿司匹林組、加味烏梅散水提物中、高劑量組分別與模型組比較顯著降低3.43%、1.74%、2.18%(P<0.05)。

表1 加味烏梅散水提物對干酵母致大鼠發熱的影響Table 1 Effect of modified plum powder of water extracts on fever in rats (℃)

2.2 加味烏梅散水提物對熱板致小鼠疼痛的影響 由表2可知，各組基礎痛閾值差異不顯著(P>0.05)。阿司匹林組、加味烏梅散水提物中、高劑量組給藥后痛閾值分別比對照組顯著提高39.02%、23.41%、24.39%(P<0.05)。各組痛閾提高百分率比較，阿司匹林組顯著高于對照組407.77%(P<0.05)、低劑量組263.51%(P<0.05)、中劑量組55.54%(P<0.05)、高劑量組26.88%(P<0.05)；高劑量組顯著高于對照組300.19%(P<0.05)、低劑量組186.49%(P<0.05)；中劑量組顯著高于對照組226.45%(P<0.05)、低劑量組133.71%(P<0.05)。

表2 加味烏梅散水提物對熱板致小鼠疼痛的影響Table 2 Effect of modified plum powder of water extracts on pain induced by heat stimulation in mice

2.3 加味烏梅散水提物對醋酸致小鼠扭體的影響 由表3可知，阿司匹林組、加味烏梅散水提物低、中、高劑量組扭體次數分別顯著低于對照組(P<0.05)。阿司匹林組扭體次數顯著低于加味烏梅散水提物不同劑量組(P<0.05)。加味烏梅散水提物中、高劑量組分別顯著低于低劑量組(P<0.05)。同時，阿司匹林的抑制率最高達到71.26%；加味烏梅散水提物中、高劑量組抑制率比較接近，都遠遠高于低劑量組。

表3 加味烏梅散水提物對醋酸致小鼠扭體的影響Table 3 Effect of modified plum powder of water extracts on acetic acid-induced writhing in mice

2.4 加味烏梅散水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響 由表4可知，各組腫脹度比較，阿司匹林組、加味烏梅散水提物低、中、高劑量組分別顯著低于對照組(P<0.05)。阿司匹林組顯著低于加味烏梅散水提物各劑量組(P<0.05)。加味烏梅散水提物中、高劑量組顯著低于低劑量組(P<0.05)。阿司匹林組腫脹抑制率最高達63.58%；加味烏梅散水提物中、高劑量組腫脹抑制率接近，都比低劑量組高，呈現劑量依賴性。

表4 加味烏梅散水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響Table 4 Effect of flavoured black plum extract on xylene induced ear swelling in mice

3 討論

3.1 加味烏梅散水提物解熱作用 發熱在獸醫臨床上是最常見的一種癥狀，引起的原因復雜，主要有環境變化、病毒、細菌、毒素侵害等，會導致畜禽生理機能紊亂甚至造成動物死亡。干酵母致大鼠發熱模型是一個經典的發熱模型，應用非常廣泛，是干酵母所含的莢膜多糖和蛋白質引發的劇烈炎癥反應導致。加味烏梅散水提物中烏梅及其制劑對多種細菌有體外抑制作用[2]。王燕枝等[3]已經證實，黃連葉、須、根的浸膏、原粉對酵母致大鼠發熱模型有較好的解熱作用。訶子、姜黃具有抗菌抗炎作用，這可能是加味烏梅散發揮解熱作用的重要原因之一[4-5]。陸俊林[6]采用烏梅散加減方治療豬傳染性胃腸炎，發揮其解熱作用。本試驗結果也證實了加味烏梅散水提物高劑量組在給藥2 h發揮解熱作用，大鼠體溫開始呈降低趨勢，3 h后恢復到正常水平。加味烏梅散水提物對酵母引起的機體發熱具有一定的解熱作用，與其中的組成成分發揮抗菌和抗炎作用有一定關系。

3.2 加味烏梅散水提物鎮痛作用 疼痛是組織損傷以后引起的傷害性感覺，也是一種預警機制，防止機體遭受壓迫或進一步損傷。熱板法、扭體法是經典發快痛試驗模型，常用于篩選中樞鎮痛藥[7]。加味烏梅散水提物中烏梅組方能有效延長痛閾值[8]；黃連及其成分也能發揮鎮痛作用[9]；姜黃的成分姜黃素也有較好的鎮痛作用[10]；訶子水提物能延長小鼠痛閾值[11]；白術對熱板刺激致痛有較明顯的抑制作用[12]。本試驗結果顯示，加味烏梅散水提物中、高劑量組能顯著增加痛閾值，還能抑制醋酸引起的疼痛反應，減少小鼠的扭體次數，說明該水提物對物理、化學刺激疼痛有良好的鎮痛作用，主要與組方中烏梅、黃連、姜黃等成分有關。

3.3 加味烏梅散水提物抗炎作用 炎癥是具有血管系統的生物機體對損傷因子所發生的復雜的防御機制。加味烏梅散中烏梅能抑制二甲苯所致的耳腫脹[13]；川黃連對化學刺激性潰瘍有抗炎作用[14]；姜黃、訶子、白術也能抗急性炎癥[11，15-16]。本試驗觀察加味烏梅散水提物對二甲苯導致滲出、腫脹的影響，結果證實，加味烏梅散水提物低、中、高劑量組均對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有顯著抑制作用，對急性炎癥有效。

綜上所述，加味烏梅散水提物具有一定的解熱、鎮痛、抗炎作用，且呈劑量依賴性。本試驗結果將為加味烏梅散水提物的臨床用藥提供一定的理論依據。