不同粒度的炒牛蒡子煮散工藝比較*

劉芳，張禮欣，束雅春，吳磊，黃亞威

南京中醫藥大學附屬醫院/江蘇省中醫院，南京210029

中藥煮散是指以水為溶媒與藥材顆粒或細末煎煮取汁服用的用藥形式[1]。煮散既可提高利用率、減少藥物的用量，又可減少煎煮時間、節約能耗[2]。本實驗選取2020 版《中國藥典》中明確規定“臨方搗碎”的炒牛蒡子進行研究，通過對比不同粒度的炒牛蒡子煎煮過程中主要成分的煎出率并結合浸膏得率為指標作綜合評價，篩選出最佳粒徑的煮散飲片。

1 儀器與藥品、試劑

Agilent 1100 高效液相色譜儀（安捷倫科技公司，含G1311A 四元泵、G1316A 柱溫箱、G1314A VWD 檢測器、Chemstation 工作站）；Agilent 1260 高效液相色譜儀（安捷倫科技公司，含G1312B 二元泵、G1316A 柱溫箱、G1367E 自動進樣器、G1322A 脫氣機、G4212B DAD 檢測器）；JE1001 電子天平（上海浦春計量儀器公司）；BP-211D 萬分之一分析天平，AX224ZH/E 電子天平（奧豪斯儀器常州公司）。

對照品：牛蒡苷（批號110819-201812，純度95.0%）、綠原酸（批號110753-202018，純度96.1%）購于中國食品藥品檢定研究院；牛蒡子苷元（批號PCS-200509，純度98%）、異綠原酸A（批號PCS-200904，純度98%），購于北京世紀奧科生物技術公司。甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純；水為純凈水。

炒牛蒡子（批號：201201，產地遼寧）經南京中醫藥大學附屬醫院黃亞威副主任中藥師鑒定為菊科牛蒡Arctium lappa L.的炒制后的干燥成熟果實。

2 方法與結果

2.1 不同粒度炒牛蒡子煮散的制備

根據2020 版《中國藥典》所用藥篩和粉末分等標準，牛蒡子屬種子類藥材，含有大量油性成分，粘性很大，容易粘連成塊并堵塞篩孔，所以本實驗將炒牛蒡子粉碎成3 種粒徑：能全部通過5 目篩，且混有能通過10 目篩不超過20%的粉末；能全部通過10 目篩，且混有能通過50 目篩不超過20%的粉末；能全部通過24 目篩，且混有能通過65 目篩不超過40%的粉末；依次定為炒牛蒡子2 號、3 號、4號。以原炒牛蒡子（未粉碎）定為1 號。對4 種規格粉末粒度進行考察。

2.2 不同粒度炒牛蒡子特征圖譜及其含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Hedera ODS-2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）；檢測波長：286 nm；柱溫：35℃；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：5μL。洗脫梯度見表1。

表1 梯度洗脫程序

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取牛蒡苷、異綠原酸A、牛蒡子苷元、綠原酸的對照品適量，用甲醇溶解后定容，得對照品儲備液。精密移取各對照品儲備液一定量，混合定容至同一量瓶內，配制成綠原酸0.499 mg·mL-1、異綠原酸A 0.200 4 mg·mL-1、牛蒡苷9.22 mg·mL-1、牛蒡子苷元0.222 2 mg·mL-1的混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 參照《醫療機構中藥煎藥室管理規范》（國中醫藥發〔2009〕3 號），分別取炒牛蒡子1、2、3、4 號各40 g，加入8 倍量水，浸潤30 min，用武火煮沸后，改用文火再煎煮30 min，趁熱濾出藥液，殘渣加6 倍量水，煎煮20 min，趁熱過濾，合并煎煮液，得供試品溶液。

2.2.4 線性關系考察 精密吸取“2.2.2”項下混合對照品溶液適量，用甲醇倍比稀釋后得系列質量濃度的混合對照品溶液；精密吸取該液5 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣檢測，以對照品質量濃度為橫坐標（X），峰面積值為縱坐標（Y），進行線性回歸，繪制標準曲線。結果表明，4 種被測成分在各自線性范圍內呈良好線性關系，見表2。

表2 炒牛蒡子中4 種成分線性關系

2.2.5 精密度試驗 精密吸取“2.2.3”項下制備的供試品溶液（炒牛蒡子4 號）5 μL，按“2.2.1”項下色譜條件連續進樣6次，測得樣品中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元峰面積，計算樣品含量，其含量的RSD 分別為0.03%、0.16%、0.13%、0.65%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液（炒牛蒡子4號），分別于0、2、4、8、12、24 h 按“2.2.1”項下色譜條件進樣5 μL 測定，測得綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元峰面積，計算樣品含量，其含量的RSD 分別為0.45%、2.17%、0.24%、0.51%，表明供試品溶液在24 h 內穩定。

2.2.7 重復性試驗 按照 “2.2.3” 項下方法平行制備供試品溶液（炒牛蒡子4 號）6份，按“2.2.1”項下色譜條件進樣檢測，測得綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元峰面積，計算樣品含量，其含量的RSD 分別為0.14%、0.57%、0.16%、0.58%，表明供試品溶液重復性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗 分別精密吸取“2.2.3”項下供試品溶液（炒牛蒡子4 號）6份，每份600 μL，分別精密加入已知含量綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元混合對照品適量，依照“2.2.1”項下色譜條件測定含量,再根據公式：回收率（%）=（測得量-供試品稱樣量×樣品中含量）/加入量×100%，計算加樣回收率，結果見表3。

表3 各指標成分加樣回收率

2.2.9 樣品含量測定 按照上述含量測定方法,測定炒牛蒡子1、2、3、4 號煎煮液中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元的含量。結果見圖1、表4。

表4 不同粒徑的炒牛蒡子煮散飲片煎煮湯劑中4 個有效成分含量（mg·g-1，n=3）

圖1 混合對照品溶液（A）及炒牛蒡子4 號供試品溶液（B）的HPLC 色圖譜

2.2.10 出膏率的測定 精密量取“2.2.3”項下4 種供試品溶液各5 mL，均平行3 份。供試品溶液質量記為m1，置恒重蒸發皿中水浴蒸干，105℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻0.5 h，精密稱定質量，得到供試品干膏，質量記為m2，根據公式（1）計算出膏率。炒牛蒡子1、2、3、4 號的平均出膏率分別為5.768%、10.584%、11.069%、12.642%；以4 號出膏率最高。

3 指標權重確立和綜合評分

本實驗選擇綜合加權評分法，篩選炒牛蒡子煮散飲片最佳粉碎粒度。設定滿分100分，共設5 個考察指標：綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷、牛蒡子苷元的含量權重系數分別為18 分；浸膏得率反映中藥整體性，權重系數為28 分。以各考察指標的最大值為滿分，對同一指標其他數據進行百分化處理并計算其對應分數，不同粒度的炒牛蒡子累加各自的5個考察指標分數即得到最終分數，分值越大質量相對越好，結果見表5。

表5 最佳炒牛蒡子煮散飲片煎煮湯劑加權評分表

根據實驗結果及評分情況，炒牛蒡子4 號＞炒牛蒡子2 號＞炒牛蒡子3 號＞炒牛蒡子1 號。從比較結果可知，炒牛蒡子進行煮散其加權評分結果均明顯高于原飲片。考慮臨床上應用炒牛蒡子打粉的可操作性和加權評分結果，確定炒牛蒡子煮散飲片最佳煎煮粒度為4號，即能全部通過24 目篩，且混有能通過65 目篩不超過40%。

4 小結

中藥煮散飲片的粒度大小能夠直接影響其成分煎出和浸膏得率。隨著煮散飲片粒度的減小，與水接觸的總表面積變大，利于有效成分的溶出；但煮散粒度過小時，在傳統煎煮方式下煮散會發生聚集效應乃至吸附作用，不利于有效成分的溶出[3]。使用超聲提取工藝，提取率可進一步提高[4]。