HPLC法檢測猴耳環提取物及猴耳環牙膏中沒食子酸含量

夏美蓮 徐媛婷

(江西誠志日化有限公司，江西 南昌 330013)

引言

沒食子酸(Gallic acid，GA)又稱五倍子酸或棓酸，是一種有機酸，可見于五倍子、漆樹、茶等植物中。化學式C6H2(OH)3COOH。沒食子酸易溶于水、醇和醚，具有酚(易被氧化和三氯化鐵水溶液生成藍黑色沉淀)及羧酸(加熱時失去二氧化碳成焦性沒食子酸)的性質。以沒食子酸為原料可以合成沒食子酸酯類化合物，沒食子酸的烷基酯根據烷基碳原子個數可分為低級酯(如甲酯、乙酯、丙酯等)和高級酯(如辛酯、月桂酯、十八碳醇酯等)，這些酯類化合物都是性能優良的食品抗氧化劑。根據李肖玲的報道，沒食子酸還有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基等多種生物學活性[1]。鄭雪花等[2]認為沒食子酸對食源性致病菌(沙門菌、志賀鄰單胞菌)，金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，枯草芽孢桿菌及變形鏈球菌均具有抑菌作用，且對革蘭陰性菌的抗菌作用高于革蘭陽性菌。

隨著牙膏工業的不斷發展，功效型牙膏越來越受到消費者的喜愛，各大企業也逐漸將中草藥活性成分加入到牙膏中作為其功效成分。功效型牙膏根據《功效性牙膏(QB/T 2966-2014)》的規定對其功效成分進行定性或定量測定。而沒食子酸作為猴耳環有機酸的主要功效成分，也是質量控制的主要成分。本研究摸索采用高效液相色譜法建立猴耳環牙膏中沒食子酸含量測定方法。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器

Agilengt 1200高效液相色譜儀；

Sartorius BT125D分析天平；

AP-01真空泵；

SC-04低速離心機；

KQ-300DE型數控超聲波清洗器。

1.2 試劑和材料

沒食子酸對照品(91.5%，批號：110831-201906，中國食品藥品檢定研究院)；

猴耳環提取物；

猴耳環牙膏(實驗室自制，批號:E20220715185)；

甲醇(西隴科學，色譜純)；

磷酸(麥克林，分析純)；

蒸餾水。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：XDB C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇∶蒸餾水∶磷酸=20∶80∶0.2；檢測波長：270nm；流速：1ml/min；柱溫：30℃；進樣量：10ul。

1.3.2 方法與結果

1.3.2.1 沒食子酸標準溶液的制備

準確稱取10.73mg沒食子酸對照品置于50ml容量瓶中，加入流動相溶解并定容至刻度，此溶液濃度為214.6ug/ml。

1.3.2.2 樣品溶液的制備

①稱取猴耳環提取物0.1g于50ml容量瓶中，加入流動相溶解并定容至刻度，搖勻后經0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為試樣溶液上機待測。

②稱取猴耳環牙膏樣1.25g于50ml容量瓶中，加入流動相溶解并定容至刻度搖勻，超聲溶解后離心，經0.45μm微孔濾膜過濾，濾液作為試樣溶液上機待測。

1.4 線性關系考察

將沒食子酸標準溶液配制系列濃度為0.8383ug/ml、3.3531ug/ml、13.4125ug/ml、53.65ug/ml、214.6ug/ml，按照1.3.1的色譜條件進樣分析。以沒食子酸濃度為X軸，其對應的峰面積為Y軸，繪制標準曲線。曲線方程為：

Y=53.66x-48.654，R2=0.9992

在濃度為0.8383ug/ml～214.6ug/ml范圍內線性良好。

圖1 沒食子酸線性方程

1.5 樣品中沒食子酸含量測定

1.5.1 按照1.3.2.2樣品溶液的制備配制，根據測定的峰面積，代入上述直線回歸方程，求得沒食子酸含量。圖譜見圖2、圖3，結果見表1。

圖2 猴耳環提取物中沒食子酸圖譜

圖3 猴耳環牙膏中沒食子酸圖譜

表1 樣品中沒食子酸含量

2 結果與分析

2.1 精密度實驗

按照1.3.1的色譜條件，取對照品溶液(53.65ug/ml)連續進樣6次，測定沒食子酸峰面積，并計算其RSD值，實驗表明儀器的精密度良好。結果見表2。

表2 精密度實驗

2.2 穩定性實驗

按照1.3.2.2樣品溶液的制備，分別將猴耳環提取物和猴耳環牙膏樣品處理好，在室溫下分別在0,2,6,24h進樣，記錄其峰面積，并計算RSD值。結果表明猴耳環提取物及猴耳環牙膏中沒食子酸在24h內穩定。結果見表3。

表3 穩定性實驗

2.3 回收率實驗

2.3.1 稱取猴耳環提取物已知沒食子酸含量(30.27mg/g)供試品總計6份，每份約0.1g，精密稱定，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液(214.6ug/ml)，按照1.3.2.2樣品溶液配制后進樣分析，計算回收率。結果表明猴耳環提取物中沒食子酸的加樣回收率良好。結果見表4。

表4 猴耳環提取物加標回收率

2.3.2 稱取空白牙膏(不含猴耳環提取物)供試品總計6份，每份約1.25g，精密稱定，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液(107.3ug/ml)，按照1.3.2.2樣品溶液配制后進樣分析，計算回收率。結果表明空白牙膏中沒食子酸的加樣回收率良好。結果見表5。

表5 空白牙膏加標回收率

2.3.3 稱取猴耳環牙膏已知沒食子酸含量(0.09mg/g)供試品6份，每份約1.25g，精密稱定，分別加入一定量的沒食子酸對照品溶液(107.3ug/ml)，按照1.3.2.2樣品溶液配制后進樣分析，計算回收率。結果表明猴耳環牙膏中沒食子酸的加樣回收率良好。結果見表6。

表6 猴耳環牙膏加標回收率

3 總結

對于猴耳環中沒食子酸含量測定，已經有挺多方法檢測，大多數是通過高效液相法測得，但是對于猴耳環牙膏中沒食子酸的研究，卻鮮有報導，本次實驗建立了HPLC檢測猴耳環提取物及猴耳環牙膏中沒食子酸含量的檢測方法。此法具有簡便、快速、靈敏度高、精密度好、準確性高等優勢。至今在國家標準及行業標準中并沒有制定牙膏中沒食子酸的檢驗標準。通過本次研究,為相關標準的制定提供了理論和數據基礎。希望之后為服務地方經濟,為行政執法提供科學依據，并對提高猴耳環牙膏相關產品檢測能力做出重要貢獻。