甜葉菊有效成分動態積累分析及水提液澄清工藝初探

謝 虹，王雪銘，張紅藝，陳 云，梁建生

（1.揚州大學生物科學與技術學院, 江蘇揚州 225009；2.巴州正達綠源生物科技有限公司, 新疆和靜 841303）

甜葉菊（Stevia rebaudianaBertoni）是一種發源于南美洲的多年生草本植物[1]，我國于1977年試種成功后，甜葉菊種植面積居世界首位，近年來主要集中在安徽、甘肅和新疆等地種植[2]。甜菊糖苷（Steviol glycosides，SGs）是甜葉菊葉中含量最高的一類二萜類化合物的總稱，具有甜度高、熱量低、性質穩定等特點，可作為“甜味劑”應用于食品和藥品領域[3-4]。甜葉菊所含有的SGs達30多種，各糖苷雖結構相似但性質各異。甜菊苷（Stevioside，ST）的甜度是蔗糖的近200倍，有明顯的后苦味；瑞鮑迪苷A（Rebaudioside A，RA）的甜度為蔗糖甜度的350倍，但其甜味呈現較慢，有一定的后苦味；瑞鮑迪苷D（Rebaudioside D，RD）和瑞鮑迪苷M（Rebaudioside M，RM）的甜度是蔗糖甜度的350倍，苦澀后味明顯減少，最接近蔗糖的感官特征[5-8]。酚類是甜葉菊中另一類含量較高的化合物，總量可達甜葉菊干葉質量的15.12%，其中綠原酸類含量達12.85%[9]。綠原酸類亦被稱為咖啡酰奎寧酸類，包括單咖啡酰奎寧酸、二咖啡酰奎寧酸和三咖啡酰奎寧酸[10]，主要從綠咖啡豆、金銀花和杜仲葉中提取，生產成本較高[11]。研究表明，甜葉菊中二咖啡酰奎寧酸（異綠原酸A）占比最高，咖啡豆、金銀花、杜仲中以單咖啡酰奎寧酸（綠原酸）為主要組成成分，而綠原酸類的抗氧化活性隨著其分子結構中咖啡酰基數量的增加而增強[12]。除了綠原酸類外，甜葉菊還含有多種類黃酮化合物，含量達2.27%[9]。以往關于甜葉菊原料的品質評價和采收期的研究，以ST和RA的含量為考察指標[13-15]，將SGs、綠原酸類和類黃酮同時作為質量評估指標的研究報道較少。

盡管我國擁有豐富的甜葉菊資源，但目前對甜葉菊的利用主要集中在SGs的生產上[2]。SGs的制備工藝主要包括水浸提、澄清除雜、大孔吸附樹脂選擇性吸附、離子交換樹脂去除離子和結晶等工序[4]。甜葉菊水提液含有大量蛋白質、色素和可溶性多糖等雜質，為了提高SGs產品的質量和延長樹脂的使用壽命，對水提液進行除雜預處理是SGs分離純化的必要環節。工業化生產通常采用硫酸亞鐵作為絮凝劑，以氫氧化鈣作為助凝劑進行酸堿中和反應形成絮凝沉淀，從而除去甜葉菊水提液中80%的雜質[16]。研究表明，酚類化合物隨SGs一同浸出，但在澄清過程中隨廢渣被處理[17]。如能在SGs生產工藝的基礎上同時采用大孔吸附樹脂提取綠原酸類化合物，可以降低生產成本，提高甜葉菊的綜合利用效率。

本實驗以新疆巴州地區產甜葉菊葉為研究材料，通過探討其中SGs、綠原酸類和類黃酮的積累規律，為甜葉菊的規范化栽培和合理采收提供依據；以甜葉菊水提液的澄清率和9種有效成分保留率為指標對澄清工藝進行考察，為甜葉菊水提液同時保留SGs和綠原酸類的除雜預處理提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

甜葉菊葉 新疆巴州正達綠源生物科技有限公司種植基地（東經82°28'～87°52'，北緯42°06'～43°33'）采收，甜葉菊水浸提用實驗材料為10月初公司大面積采收的干葉；RA 對照品，Tokyo化學工業有限公司；ST、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖苷 對照品，Solarbio生物科技有限公司；瑞鮑迪苷B（Rebaudioside B，RB）、瑞鮑迪苷C（Rebaudioside C，RC）、杜克苷A（Dulcoside A，DA）、甜茶苷（Rubusoside，Ru）、甜菊雙糖苷（Steviolbioside，SBio） 對照品，ChromaDex公司；新綠原酸、隱綠原酸、1,3-二咖啡酰奎寧酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C 對照品，成都曼思特生物科技有限公司；綠原酸、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、蘆丁 對照品，成都瑞芬思生物科技有限公司；槲皮素-7-O-葡萄糖苷 對照品，上海源葉生物科技有限公司；槲皮素-3-O-木糖苷、山奈酚-3-O-鼠李糖苷、山奈酚-3-O-阿拉伯糖苷 對照品，四川省維克奇生物科技有限公司；以上對照品均為色譜純（質量分數均≥98%）；RD、RM 對照品（質量分數為95%），新疆巴州正達綠源生物科技有限公司；甲酸 色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司；磷酸（色譜純）、甲醇（分析純）、磷酸二氫鈉（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司；乙腈 色譜純，瑞典歐普森公司；殼聚糖季銨鹽、殼聚糖鹽酸鹽（脫乙酰度≥90%） 南通綠神生物工程有限公司；聚合氯化鋁（白色和黃色） 河南眾邦環保科技有限公司；硫酸亞鐵、氫氧化鈣 分析純，上海凌峰化學試劑有限公司。

1200高效液相色譜儀 安捷倫科技有限公司；Sepax GP-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm） 蘇州賽分科技有限公司；AL204電子天平、320pH計梅特勒-托利多公司；SP-2001分光光度計 美國Hoefer公司；DHG-9141A電熱鼓風干燥箱 德國美墨爾特公司；5804R冰凍離心機 德國艾本德公司；純化水器 南京優普環保設備有限公司；AP-01P真空抽濾裝置 天津奧特賽恩斯儀器有限公司；KQ-100TDE高頻數控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；JB300-D強力電動攪拌機 上海標本模型廠；HH-4水浴鍋 金壇城東新瑞儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 甜葉菊采集 2018年5月15日完成甜葉菊譜星6號扦插苗的移栽定植，種植密度1萬株/666.7 m2，于7月24日（70 d）、8月7日（84 d）、8月21日（98 d）、9月4日（112 d）、9月18日（126 d）、10月2日（140 d）、10月16日（154 d）每隔14 d采摘1次葉片，每次選取高度相近的5個單株，采摘方式為全株采摘，5個葉樣本在55 ℃烘箱干燥24 h，每個葉樣本分別稱重和粉碎后過40目篩備用。

1.2.2 甜葉菊甲醇浸提液的制備 稱取不同時期采收制備的葉粉末0.50 g，加入30 mL甲醇，室溫超聲（80 kHz）輔助浸提30 min，6000 r/min離心6 min，取上清液，沉淀重復超聲浸提2次，合并上清液并用甲醇定容至100 mL，得到甲醇浸提液，用以考察甜葉菊中有效成分的動態積累規律。每個樣本同時取3份進行超聲輔助浸提。

1.2.3 甜葉菊水提液制備溫度的考察 每份稱取大面積采收干葉制備的粉末15.00 g，加入300 mL純化水，分別在25、45、65、85 ℃溫度下攪拌浸提60 min，分別離心，取上清液，補足純化水至300 mL。測定各溫度條件下浸提液中指標成分的含量，以選擇適宜的浸提溫度。每個溫度下取2份葉粉末同時攪拌浸提。

1.2.4 甜葉菊水提液的制備 取一定量的甜葉菊干葉（不粉碎），按料液比1:20（g/mL）加純化水，浸泡30 min，在65 ℃下攪拌浸提60 min，減壓抽濾，即得深褐色甜葉菊水提液。

1.2.5 最佳絮凝劑的選擇 設置5組，每組2份，每份甜葉菊水提液400 mL。25 ℃條件下，在每組水提液中分別加入1%殼聚糖季銨鹽水溶液16 mL、1%殼聚糖鹽酸鹽水溶液16 mL、白色聚合氯化鋁7.20 g、黃色聚合氯化鋁7.20 g、硫酸亞鐵3.60 g +氫氧化鈣1.80 g（pH9.50），先以300 r/min的轉速攪拌30 s，再以100 r/min攪拌20 min，靜置10 min，分別取各澄清液過濾，取濾液測定pH、吸光度和指標成分含量。

1.2.6 殼聚糖鹽酸鹽投加量對澄清效果的影響 設置5組，每組2份，每份甜葉菊水提液400 mL。25 ℃條件下，每組水提液分別按0.35、0.45、0.55、0.65、0.75 g/L（殼聚糖鹽酸鹽質量/水提液體積）的投加量加入殼聚糖鹽酸鹽溶液，按“1.2.5”項下的條件進行澄清操作，計算澄清率。

1.2.7 體系溫度對殼聚糖鹽酸鹽澄清效果的影響設置5組，每組2份，每份甜葉菊水提液400 mL。每組水提液分別于25、35、45、55、65 ℃恒溫水浴中，按0.45 g/L投加量加入殼聚糖鹽酸鹽溶液中，按“1.2.5”項下的條件進行澄清操作，計算澄清率。

1.2.8 SGs含量的測定 參照GB 8270-2014《食品添加劑 甜菊糖苷》規定的方法進行含量的測定與計算[18]。色譜條件：色譜柱：Sepax GP-C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動相：A-NaH2PO4緩沖液（10 mmol/L，pH2.60），B-乙腈，A:B=68:32（V/V）；流速：0.9 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測波長：210 nm；進樣量：20 μL。用30%乙腈水溶液將精密稱量置于10 mL容量瓶中RD、RM、RA、ST、RC、RB、DA、Ru、SBio對照品溶解定容，得到混合對照品溶液，進入高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）儀用于確定各糖苷在樣品中的相對保留時間。精密稱取RA和ST對照品各10 mg左右，置于25 mL容量瓶中，30%乙腈溶解定容，將制得混合對照品溶液進入HPLC儀4針以上，記錄RA和ST的峰面積并計算各自峰面積的相對標準偏差（Relative standard deviation，RSD），當RSD＜2%，將用30%乙腈水溶液稀釋成合適濃度的待測樣品溶液進入HPLC儀進行分析。RM與ST分子質量比值為1.60。

1.2.9 綠原酸類和類黃酮含量測定 參照謝虹等[19]建立的方法，以外標法計算甜葉菊中綠原酸類和類黃酮含量。色譜條件：色譜柱：Sepax GP-C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流動相：0.5%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫程序（0～5 min，95%～90% A；5～40 min，90%～66%A；40～45 min，66%～5%A；45～50 min，5%～95%A）；柱溫：35 ℃；流速：0.9 mL/min；檢測波長：330 nm；進樣量：20 μL。因無木犀草素-7-O-蕓香糖苷的對照品，其含量的計算以木犀草素-7-O-葡萄糖苷對照品的峰面積及濃度為基準，參照文獻[19]的公式計算。

1.2.10 指標成分含量的保留率計算 用HPLC分別對澄清前后溶液中的RA、ST、RC、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C等指標成分含量進行測定，計算公式如下：

水浸提樣品中，由于RD和RM極性較大，在C18色譜柱上保留時間短，不能與其他雜峰有效分離從而影響定量準確性，因此以RA、ST和RC作為衡量SGs保留率的指標成分。

1.2.11 甜葉菊水提液澄清率的計算 參照謝捷等[16]的方法測定水提液澄清率，以純化水為參比，測定經過濾后的甜葉菊水提液在660 nm處的吸光度A0及絮凝劑處理的澄清液經過濾后在660 nm處吸光度A1，計算公式如下：

1.3 數據處理

實驗數據使用Microsoft excel軟件和SPSS 16.0統計分析軟件進行整理與分析，采用Origin 9軟件進行畫圖。

2 結果與分析

2.1 甜葉菊葉中有效成分和干物質累積動態

由圖1可知，甜葉菊譜星6號所含糖苷主要包括RD、RM、RA、ST和RC等5種。在取樣期內，糖苷總量介于153.73～168.74 mg/g之間，其中RA含量介于101.28～115.20 mg/g之間；RD含量介于17.38～22.16 mg/g之間；RC含量介于14.08～17.33 mg/g之間；ST含量介于8.88～11.62 mg/g之間；RM含量介于5.26～9.03 mg/g之間。由上述結果和圖2a可知，甜葉菊葉中各糖苷和總糖苷含量相對穩定、波動小，羅慶云等[14]以5個品種甜葉菊葉為研究材料也得出RA和ST含量在生長發育階段變化幅度小的結論。與已有研究[14,20-23]采用的守田系列、新光3號、鑫農4號、同心、綠源、菊隆、GT-1、GY系列、鑫豐3號、江甜3號、譜星1號、中山8號等甜葉菊品種中SGs相比，本研究選用的甜葉菊譜星6號中RA和RD的含量較高，這可能是由于甜葉菊品種的差異所導致的。甜葉菊中ST、RA、RD和RM均由起始底物甜菊醇經UGTs（UDP-糖基轉移酶，UDPglycosyltransferases）多步糖苷化反應而形成，首先形成ST，ST在UGT76G1催化下形成RA，RA在UGT 91D催化下形成RD，RD在UGT76G1催化形成RM[24]。ST含量于112 d升至最高，此后呈現下降態勢，而RA、RD和RM在140～154 d時段含量升至最高；ST、RA、RD和RM在甜葉菊中的動態積累趨勢與它們的合成規律相一致。

圖1 甜葉菊葉中SGs HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of SGs in the leaf of Stevia rebaudiana Bertoni

圖2 甜葉菊葉中有效成分和干物質動態積累圖Fig.2 Dynamic accumulation charts of effective components and dry matter in the leaf of Stevia rebaudiana Bertoni

甜葉菊譜星6號所含綠原酸類主要包括3種單咖啡酰奎寧酸（新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸）和3種二咖啡酰奎寧酸（異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C）（圖3），與郭志龍等[11]和李云聰等[12]的研究結果相同；異綠原酸A占比最高為46.14%，其次是異綠原酸C和綠原酸，分別占22.21%和18.16%。在取樣期內，甜葉菊中綠原酸類含量呈現降低-升高-穩定-降低的變化趨勢（圖2b），綠原酸類總量介于40.99～73.78 mg/g之間，其中異綠原酸A含量介于19.13～34.04 mg/g之間；異綠原酸C含量介于11.05～19.19 mg/g之間；綠原酸含量介于5.53～13.40 mg/g之間；新綠原酸含量介于2.98～7.94 mg/g之間；異綠原酸B含量介于1.05～1.82 mg/g之間；隱綠原酸含量介于1.22～1.71 mg/g之間。由于1,3-二咖啡酰奎寧酸在取樣期內含量較少為0.10～0.20 mg/g，未列入圖中。

圖3 甜葉菊葉中綠原酸類和類黃酮HPLC圖Fig.3 HPLC chromatograms of chlorogenic acids and flavonoids in the leaf of Stevia rebaudiana Bertoni

甜葉菊譜星6號中主要含有9種類黃酮的糖苷衍生物（圖3），其中槲皮素-3-O-鼠李糖苷占比最高，為62.43%；其次是蘆丁，占比為15.25%。在取樣期內，類黃酮總量同樣呈現降低-升高-穩定-降低的變化趨勢（圖2c）。類黃酮總量介于11.20～14.88 mg/g，其中槲皮素-3-O-鼠李糖苷含量介于6.64～9.29 mg/g；蘆丁含量介于1.83～2.29 mg/g；木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量介于0.71～1.06 mg/g；山奈酚-3-O-鼠李糖苷含量介于0.55～0.66 mg/g；芹菜素-7-O-葡萄糖苷含量介于0.41～0.62 mg/g；槲皮素-7-O-葡萄糖苷含量介于0.28～0.53 mg/g；木犀草素-7-O-蕓香糖苷含量介于0.32～0.52 mg/g；槲皮素-3-O-木糖苷含量介于0.18～0.35 mg/g；山奈酚-3-O-阿拉伯糖苷的含量介于0.05～0.17 mg/g。

譜星6號綠原酸類和類黃酮含量變化趨勢的結果表明，甜葉菊中酚類積累與生長期密切相關。植物合成次生代謝產物是為了適應環境的需要[25]，當甜葉菊苗移栽成活后，應立即打頂促進側芽生長以增加分枝和葉片的數量。為了抵御微生物的侵染、植食性昆蟲及打頂造成的機械損傷，在70 d甜葉菊中酚類含量已達較高水平（68.95 mg/g）。從70 d之后，酚類含量呈現下降態勢，推測此時段初級代謝相關酶的基因表達活躍，用于合成構成細胞壁的半纖維素、纖維素和果膠等多糖物質，因為干葉質量從70 d 開始呈現增加趨勢（圖2d），在84～98 d時段維持在穩定水平，而酚類含量在98 d降至最低。從98 d開始，干葉質量和酚類含量快速增加，推測與木質素合成相關酶的基因表達變化密切相關。木質素是細胞次生壁主要組成成分，占生物量的25%～30%，以維持細胞一定機械強度[25]。木質素、綠原酸和類黃酮均為苯丙素生物合成途徑的產物，為了合成木質素，該途徑上游的催化酶例如苯丙氨酸解氨酶基因表達上調為下游分支途徑上綠原酸、類黃酮和木質素等的合成提供大量的底物，從而導致三者在126～154 d時段內積累達到最高量。因此，新疆巴州甜葉菊適宜的采收期在9月中旬至10月初時段。

研究表明，氮肥能夠促進甜葉菊葉干物質、SGs和酚類積累[1,26]，機械損傷亦能夠刺激植物酚類的合成[27]。8月中旬之后，干葉質量和酚類含量快速增加，此時需給甜葉菊追肥，適當增加氮肥的量；同時在甜葉菊的栽培過程中可以適當增加打頂的次數。當前企業按照含水量＜10%、泥沙和枝條等雜質含量＜10%、總糖苷含量＞13%的質量標準收購甜葉菊干葉，本研究建議將綠原酸類含量納入企業收購干葉標準中。

2.2 甜葉菊水提液澄清工藝初探

2.2.1 不同溫度對甜葉菊中指標成分浸提效率的影響 國內工業化生產通常采用常溫水浸提甜葉菊葉中的SGs，從表1可知，25 ℃水提液中RA、ST和RC的含量已達到85 ℃水提液中RA、ST和RC的含量的60%，但6種綠原酸類化合物的含量較低，表明低溫狀態下，綠原酸類化合物的浸提效率不高。隨著浸提溫度的升高，新綠原酸、綠原酸及隱綠原酸的含量逐漸增加，異綠原酸B、異綠原酸A和異綠原酸C的含量也顯著增加（P＜0.05）。提高溫度可以增加甜葉菊中有效成分的浸出率，但相應地增加了蛋白質、多糖等雜質的溶出[28]。考慮生物活性成分在高溫下易變性失活的特性[29]，因此選擇在65 ℃條件對甜葉菊葉進行水浸提。

表1 不同溫度水提液中指標成分的含量Table 1 Contents of indicative components in water extract under different temperatures

2.2.2 不同絮凝劑對甜葉菊水提液澄清效果的影響從表2可知，SGs工業化生產中采用硫酸亞鐵和氫氧化鈣絮凝的澄清液淡黃清亮，澄清效果最好，但綠原酸類在澄清液中基本無保留。額爾敦巴雅爾等[30]的研究顯示采用硫酸亞鐵+氫氧化鈣絮凝方法去除甜葉菊水提液中綠原酸類和類黃酮物質效果較為顯著，而趙磊等[17]的研究顯示甜葉菊絮凝廢渣中富含綠原酸和類黃酮化合物。因此，硫酸亞鐵+氫氧化鈣不適合作為從甜葉菊水提液中進一步提取分離綠原酸類的絮凝劑。聚合氯化鋁屬于無機高分子絮凝劑，具有較高的電荷密度，通過電性中和及吸附橋架交聯作用促使膠體微粒絮凝沉淀[31]。白色聚合氯化鋁絮凝的澄清液中RA和ST的保留率較高，但RC和6種綠原酸類的保留率低；黃色聚合氯化鋁的澄清率雖然高于白色聚合氯化鋁的澄清率，但RA、ST和綠原酸類的保留率更低，尤其是異綠原酸基本無保留。殼聚糖作為陽離子線性高分子絮凝劑，通過螯合、電中和與吸附架橋作用除去植物浸提液中大量雜質[16]。盡管RA、ST和RC在殼聚糖季銨鹽絮凝處理的澄清液中全部保留，但異綠原酸損失率較大；殼聚糖鹽酸鹽的澄清效果優于殼聚糖季銨鹽的澄清效果，盡管ST和RC有一定的損失，6種綠原酸類基本保留在澄清液中。甜葉菊水提液pH為5.82，加入聚合氯化鋁和硫酸亞鐵+氫氧化鈣均使水提液pH產生較大變化。因此，選擇殼聚糖鹽酸鹽作為甜葉菊水提液的最適絮凝劑。

表2 25 ℃條件下不同絮凝劑對水提液的澄清效果Table 2 Clarification effects of different flocculants on water extract under 25 ℃

2.2.3 殼聚糖鹽酸鹽投加量對澄清效果的影響 從表3可知，25 ℃條件下，隨著絮凝劑加入量的增大，水提液的澄清率逐漸增加，當添加量超過0.55 g/L時，雖有絮狀沉淀，但水提液由澄清變為不透明狀態。這是因為過量的絮凝劑使膠粒表面發生二次吸附而覆蓋了一層絮凝劑，膠粒處于再穩定狀態，溶液變渾濁[16]。因此，綜合考慮澄清效果和生產成本等因素，選擇殼聚糖鹽酸鹽的合適投加量為0.45 g/L。

表3 25 ℃條件下殼聚糖鹽酸鹽的投加量對澄清效果的影響Table 3 Effects of different dosages of chitosan hydrochloride on clarification rate under 25 ℃

2.2.4 體系溫度對殼聚糖鹽酸鹽澄清效果的影響由表4可知，當水浴溫度低于55 ℃時，水提液中的雜質微粒與絮凝劑分子相互碰撞的幾率增大，加速了絮凝沉淀的過程[16]，因此，在45 ℃條件下，當加入絮凝劑攪拌2 min左右時，水提液出現明顯的絮狀沉淀且液體呈清亮狀態，澄清效果與硫酸亞鐵+氫氧化鈣組合的效果相當；當溫度升至55 ℃時，殼聚糖鹽酸鹽分子發生老化[16]，澄清率開始下降，65 ℃條件下水提液底部雖出現絮狀沉淀，但靜置30 min后液體仍呈渾濁狀態。因此，澄清操作溫度選擇在45 ℃左右為宜。

表4 體系溫度對殼聚糖鹽酸鹽澄清效果的影響Table 4 Effects of different flocculation temperatures of chitosan hydrochloride on clarification rate

3 結論

以甜葉菊葉為材料，測定了不同生長期甜葉菊中SGs、綠原酸類、類黃酮三類有效成分的含量。分析結果表明，各種糖苷以及總糖苷含量變化幅度小；甜葉菊中綠原酸類和類黃酮總量呈現降低-升高-穩定-降低的變化趨勢，于126 d達到最高值后趨于穩定。結合三類有效成分含量和產量因素分析，確定新疆巴州甜葉菊譜星6號葉采收的最佳時期為9月中旬～10月初。在甜葉菊的栽培過程中，可以適當增加氮肥施量和打頂次數，以促進葉中有效成分和生物量的積累。

以澄清率和水提液中RA、ST、RC、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C含量的保留率為考察指標，采用不同的絮凝劑對甜葉菊水提液進行澄清處理。研究結果表明，以殼聚糖鹽酸鹽絮凝處理的澄清液中，3種糖苷和6種綠原酸類物質的保留率高，有利于后續工藝中大孔吸附樹脂分別從澄清液中選擇性吸附SGs和綠原酸類。溫度為45 ℃、殼聚糖鹽酸鹽的添加量為0.45 g/L的絮凝條件下，水提液的澄清效果與硫酸亞鐵+氫氧化鈣絮凝處理的澄清效果相當。本研究為甜葉菊進一步開發和利用提供一定的理論基礎。