虎奶菇不同栽培方案及其子實體抗氧化研究

付圣麟　方　亮　蘇廣林　劉　斌

虎奶菇不同栽培方案及其子實體抗氧化研究

付圣麟1,2方亮1,2蘇廣林1,2劉斌1,2

（1.廣西大學食用菌研究所廣西南寧530005；2.廣西大學農學院應用微生物研究所廣西南寧530005）

文章旨在探究不同木屑搭配菌草后對虎奶菇產量及其子實體抗氧化的影響。選取苦楝木屑、松木屑和杉木屑3種木屑，共設置3種不同栽培配方：A.苦楝木屑52%、菌草26%、麩皮20%、石灰1%、石膏1%；B.松木屑52%、菌草26%、麩皮20%、石灰1%、石膏1%；C.杉木屑52%、菌草26%、麩皮20%、石灰1%、石膏1%。測定不同配方下的菌包產量、子實體活性物質含量及抗氧化活性。試驗結果表明：配方B的子實體產量最高，達到160.13 g/包；配方B栽培的子實體的多糖、三萜和多酚含量均最高，分別為21.84 mg/g、14.76 mg/g、4.37 mg/g；配方B栽培的子實體的醇提物對DPPH的清除能力最強，7 mg/mL醇提物的清除率可達81.50%；配方A栽培的子實體的醇提物對ABTS的清除能力最強，1.0 mg/mL醇提物的清除率可達87.69%。

虎奶菇；木屑；栽培；產量；抗氧化

虎奶菇[(Fr.) Sing]，別名菌核側耳、茯苓側耳、虎乳菌，為木腐生真菌，屬擔子菌亞門層菌綱傘菌目側耳科側耳屬，具有重要的藥用價值，其耐高溫，主要種植在熱帶和亞熱帶地區，一般能在木樁或者土壤內的腐木上生長[1]。該菌也是一種子實體和菌核都能食用的珍稀食藥用菌[2]。

食用菌具有非常高的營養價值和藥用保健的藥理功效，食用菌多糖在抗癌方面具有一定的優越功效[3]。此外，還能降低某些物質誘發腫瘤的發生率，并對多種化療藥物具有增效效應[4]。

目前側耳類食用菌栽培多使用棉籽殼培養基，而貴州省農作物品質資源研究所開發的松杉木鋸末發酵熟料竹蓀脫袋培養基解決了農業廢料的污染問題。研究發現，利用鋸末的培養基產量與效率較低，且開發難度大[5]，尤其針對針葉木材廢料在食用菌栽培培養基的開發較少[6]。其樹脂道中分泌樹脂酸等是針葉樹防御蟲害及其共生微生物入侵的重要途徑[7]，所以目前利用木屑的培養基中幾乎都是闊葉木材[8]。針葉木屑作為許多木材加工廠的副產物，是一種可以利用起來的潛在資源[9]。

本研究以不同針葉木屑為主料設置栽培配方，對其產量和活性物質進行了初步研究，篩選出適宜的木屑栽培虎奶菇，以期為木屑的有效利用和虎奶菇的栽培提供參考方向。

1 材料與方法

1.1 供試菌株與材料

試驗所用菌株采自廣西壯族自治區來賓市經分子鑒定與形態鑒定確定種屬，現保存于廣西大學微生物研究所。

木屑來源于南寧市木材加工市場，麩皮等發酵粗料均來自廣西大學微生物研究所菌種廠；試劑包括硫酸鈣等常用試劑，均購于成都科龍化工有限公司；儀器有SYW-2食用菌自動裝袋機（隨州智宸機械有限公司）、KQ-300GDV恒溫數控超聲波清洗器（昆山舒美儀器有限公司）等。

1.2 菌種培養基

母種培養基為PDA，即200 g馬鈴薯、20 g葡萄糖、20 g瓊脂、1 g磷酸二氫鉀、0.5 g硫酸鎂，加水定容至1 000 mL，pH自然。

1.3 栽培方案設計

不同栽培方案設計如表1。

表1虎奶菇栽培料配方表

配方編號苦楝木屑/%松木屑/%杉木屑/%菌草/%麩皮/%生石灰/%石膏/% ABC52———52———52262626202020111111

1.4 栽培管理

按照上述表1配方，將配料拌勻，控制含水量為60%，攪拌均勻后裝入15 cm×33 cm的聚丙烯袋，每袋裝料重量為500 g（濕重），用棉花塞緊封口，貼好標簽，放入高壓滅菌鍋121 ℃滅菌2 h。每個配方設置10個重復。

將接種好的菌袋放入栽培菇房進行菌絲培養，培養期間溫度設置為25 ℃～28 ℃，濕度保持在70%～80%。

待菌絲長滿菌袋后，即可開袋放入出菇菇房進行出菇，出菇期間保持菇房溫度為28 ℃，濕度為80%，每天間斷日光燈光照3 h～6 h。

1.5 多糖類化合物含量測定

1.5.1 葡萄糖標準曲線的繪制

精確稱取干燥至恒重的葡萄糖1.00 g，加水溶解定容到100 mL，即標準溶液濃度為10.0 mg/mL。對標準溶液進行稀釋，得到濃度分別為0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL的葡萄糖溶液各2.0 mL。以蒸餾水為對照，各試管加入5%苯酚溶液0.50 mL搖勻。再分別加入2.50 mL濃硫酸，充分搖勻后，室溫下靜置15 min，于490 nm波長處測得其相應吸光度值。以濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制出葡萄糖濃度與吸光度值之間關系的標準曲線，得到回歸線方程和線性范圍。

1.5.2 虎奶菇子實體多糖類化合物含量測定

將采摘后的虎奶菇子實體放入烘箱烘干至恒重后粉碎，稱量1 g子實體粉末，置于25 mL試管中，加入80%乙醇25 mL，混合均勻后，置于超聲破壁儀中超聲30 min，用苯酚-硫酸法測定多糖含量，測定具體操作方法同1.5.1。

1.6 三萜含量測定

1.6.1 三萜標準曲線的繪制

精密稱取105℃干燥至恒重的齊墩果酸（對照品）10.0 mg，以色譜級甲醇配制成0.2 mg/mL的溶液。分別精密吸取0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL該溶液置于刻度試管中，60 ℃水浴蒸發干溶劑，加入新配制的0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液及1.2 mL高氯酸，70 ℃恒溫水浴15 min后冰水浴冷卻。再加入乙酸乙酯使體系總量為4 mL，搖勻，于550 nm波長處測定吸光度，以對照品溶液濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

1.6.2 虎奶菇子實體三萜含量測定

稱量1 g虎奶菇子實體粉末于錐形瓶中，加入25 mL乙醇，連續超聲45 min，過濾后將濾液置于100 mL容量瓶中定容待測。參照NY/T 1676—2008，用香草醛-冰醋酸法測定醇提物中的三萜含量[10]。吸取待測樣品溶液1.0 mL置于試管中60 ℃水浴蒸干，加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL及高氯酸1.2 mL后，按齊墩果酸對照品溶液處理方法處理，于550 nm波長下測定吸光度，計算樣品中三萜類化合物含量。

1.7 多酚含量測定

稱取虎奶菇子實體粉末0.25 g，加8 mL水超聲60 min，加水定容至10 mL。取2 mL于離心管中，12 000 r/min離心10 min，上清液轉至新離心管中，即虎奶菇供試樣液。具體測定多酚含量操作參照李洋洋等（2017）[10]的方法。

1.8 抗氧化活性測定

1.8.1 清除DPPH自由基能力測定

將上述1.6中醇提物樣品稀釋成不同濃度，樣品組為2 mL不同濃度樣品+2 mLDPPH試劑，對照組用無水乙醇代替DPPH，空白組用無水乙醇代替樣品。測定方法參考范三紅等（2020）[11]的方法并加以改動。

1.8.2 清除ABTS自由基能力測定

參照謝惠等（2017）[12]的方法并加以改動。樣品組為2 mL不同濃度樣品+2 mLABTS試劑，對照組用蒸餾水代替ABTS，空白組用蒸餾水代替樣品。

1.9 數據處理

采用Origin2018軟件繪圖，并采用Excel和SPSS 25軟件進行分析。

2 結果與分析

2.1 出菇產量

待子實體生長至八分成熟后采收，將每袋子實體采收后用天平稱量子實體鮮重，計算出不同配方的平均產量，結果如表2。

表2不同配方出菇產量及顯著性差異分析比較

配方編號單包產量/（g/包）顯著性差異（P＜0.05） ABC135.08±3.99160.13±4.6693.10±2.63 bac

由表2可知，供試的不同木屑配方中，配方B的產量和配方A、C的產量均存在顯著性差異。其中，配方B的產量在3種配方中是最高的，其單包產量達160.13 g；而以杉木屑為主料的配方C產量最低，僅為93.1 g/包，與B相比，其單包產量相差41.98 g。

2.2 不同配方下虎奶菇子實體活性成分含量比較分析

（1）活性成分標準曲線繪制。

圖1　苯酚-硫酸法葡萄糖含量標準曲線

圖2　香草醛-冰醋酸法三萜含量標準曲線

根據實驗結果，得到如圖1苯酚-硫酸法葡萄糖標準回歸曲線=0.067 5－0.066 3，2=0.999，以及圖2香草醛-冰醋酸法三萜含量標準回歸曲線=2.561 1－0.026 5，2=0.999，以此作為后續測定值的計算依據。

（2）子實體活性成分含量比較分析。

圖3　不同配方虎奶菇子實體活性成分含量

由圖3可知，3種不同木屑對虎奶菇子實體內的多糖、三萜以及多酚等活性成分含量均有一定的影響。其中，在多糖含量方面，配方B的子實體多糖含量最高，為21.84 mg/g，配方C的多糖含量最低，其含量與配方B相差1.09 mg/g。

三萜含量方面，以松木屑為主料的配方B栽培的虎奶菇子實體內三萜含量最高，達到14.76 mg/g，其次是以苦楝木屑為主料的配方A，而以杉木屑為主料的配方C栽培的子實體三萜含量最低，為12.77 mg/g，與配方B相差1.99 mg/g。

在多酚含量方面，也是以松木屑為主的配方B栽培的子實體含量最高，為4.37 mg/g，其次為配方C，配方A的含量最低，為3.9 mg/g。因此，綜合分析，配方B栽培的虎奶菇子實體的多糖、三萜、多酚這些活性物質含量均為最高。

2.3 不同配方虎奶菇子實體醇提物的抗氧化活性分析

圖4　不同配方下虎奶菇子實體醇提物對DPPH的清除率

圖5　不同配方下虎奶菇子實體醇提物對ABTS的清除率

如圖4，隨著濃度的增大，不同木屑栽培的子實體醇提物對DPPH自由基的清除率都呈穩定上升趨勢。當醇提物濃度為1 mg/mL～5 mg/mL時，3種配方下的子實體醇提物對DPPH自由基的清除率均呈快速上升趨勢，且配方A的子實體醇提物對DPPH的清除率較高于配方B、C；當醇提物濃度大于5 mg/mL時，清除率的上升趨勢逐漸緩慢趨平，但配方B的子實體醇提物對DPPH的清除率相較于配方A和C增長迅速；當醇提物濃度達到7 mg/mL時，不同配方下的子實體醇提物的DPPH自由基清除率均達到最大值，分別為80.78%（A）、81.50%（B）、77.64%（C），即B＞A＞C。

如圖5，隨著濃度的增大，不同木屑栽培的子實體醇提物對ABTS自由基的清除率也呈上升趨勢[10]。當醇提物濃度為0.2 mg/mL～1.0 mg/mL時，配方A的子實體醇提物對ABTS的清除率均高于配方B、C；當醇提物濃度為0.6 mg/mL～1.0 mg/mL時，配方C的子實體醇提物的清除率高于配方B；當醇提物濃度達到1.0 mg/mL時，配方A的子實體醇提物的ABTS清除率最高，為87.69%，此時配方C的子實體醇提物的清除率接近配方A，為84.00%，而配方B為78.53%，即A＞C＞B。

3 討論

通過使用不同木屑對虎奶菇進行栽培，對比其產量和活性物質含量，發現苦楝木屑、松木屑和杉木屑中，松木屑對虎奶菇栽培產量提高效果顯著。之后對虎奶菇活性物質進行測定分析，發現松木屑栽培的虎奶菇子實體中多糖、三萜及多酚這些活性物質含量也是最高的。因此，從這3種木屑中可篩選出松木屑和菌草搭配更適宜栽培虎奶菇，希望本實驗能為木屑資源的有效利用提供參考。

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10.3969/j.issn.2095-1205.2021.12.07

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A

2095-1205(2021)12-18-03

劉斌