山西種豬場CSFV、PRRSV、PRV、PCV2免疫與感染情況調(diào)研

樊振華，孟 帆，吳 忻，張 娟，劉文俊，韓一超，米瑞娟，薛翼鵬，趙 岳

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，山西 晉中 030801 ； 2.山西省動物疫病預(yù)防控制中心，山西 太原 030027)

豬瘟(CSF)、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)、豬偽狂犬病(PR)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)感染四大疫病可破壞豬的生殖、呼吸、消化和免疫系統(tǒng)。其具有傳播快、病死率高、流行范圍廣、傳播途徑多等特點，并且常常混合感染，嚴(yán)重危害我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。2010年以來，CSF疫情出現(xiàn)了反彈現(xiàn)象，以亞臨床隱性感染為主，持續(xù)向外排毒、妊娠母豬帶毒綜合征、仔豬先天性感染和免疫耐受；2010年以PRRS為主的流產(chǎn)風(fēng)暴侵入山西，造成母豬繁殖障礙、仔豬呼吸系統(tǒng)損傷，一些豬場暴發(fā)高熱高死亡率。2012年我國南方地區(qū)一些豬場即使在豬偽狂犬病免疫抗體比較高的情況下，也發(fā)生母豬流產(chǎn)，1周齡乳豬有神經(jīng)癥狀、口吐白沫、死亡現(xiàn)象，并被實驗室確診為豬偽狂犬病[1-5]。PCV2可引起斷奶后仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征,急性暴發(fā)時，病死率可達(dá)30%以上，且嚴(yán)重危害豬生長發(fā)育。隨著山西養(yǎng)豬業(yè)向集約化、規(guī)模化發(fā)展，由于監(jiān)測檢測滯后，接種疫苗不科學(xué)、生物安全措施不到位等存在的問題造成這些疫病的流行，也成為制約養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的瓶頸。2013年以來，本項目組深入山西省11個地市70多個規(guī)模化種豬場，進(jìn)行了豬主要疫病流行情況調(diào)查，同時對采集的血樣和病料進(jìn)行了抗體和病原檢測，初步查明了山西省豬群豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、PCV2免疫與感染情況，為有效防控這些疫病的流行提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 血樣和病料的采集與處理 嚴(yán)格按照動物疫病實驗室病料樣品采集方法的相關(guān)規(guī)定，隨機(jī)從各豬場存欄的母豬、公豬以及不同日齡仔豬的耳靜脈，或前腔靜脈抽取血液，分離血清，然后于-70 ℃保存?zhèn)溆谩牟∷镭i中采集血、肺、肝、脾、腎、淋巴結(jié)等臟器組織，經(jīng)過處理后于-70 ℃低溫冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 ELISA方法血清抗體檢測

1.2.1 CSFV免疫抗體檢測 采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的ELISA診斷試劑盒，對待檢血清進(jìn)行相應(yīng)的抗體檢測。判定標(biāo)準(zhǔn)：OD630 nm≥0.35為CSFV抗體陽性，OD630 nm<0.35 為CSFV抗體陰性。

1.2.2 PRRSV感染抗體檢測 采用美國IDEXX 公司生產(chǎn)的PRRSV抗體檢測試劑盒，對待檢血清進(jìn)行相應(yīng)的ELISA抗體檢測。血清抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：S/P≥0.4 為陽性，S/P<0.4 為陰性。

1.2.3 PRV感染抗體檢測 采用美國IDEXX 公司生產(chǎn)的PRV gE 鑒別ELISA 診斷試劑盒，對待檢血清進(jìn)行檢測，可診斷豬群是否感染PRV野毒株。判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N≤0.6為陽性，S/N>0.7 為陰性，0.6

1.2.4 PRV免疫抗體檢測 采用美國IDEXX 公司生產(chǎn)的PRV gB抗體檢測試劑盒，對待檢豬血清進(jìn)行檢測，可診斷豬群免疫PRV疫苗后的抗體水平。判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N≤0.6為陽性，S/N>0.7 為陰性，0.6

1.2.5 PCV2病毒感染抗體檢測 采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的PCV2型ELISA抗體檢測試劑盒對待檢血清進(jìn)行檢測。抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD630 nm>0.42，判為陽性；樣品OD630 nm值介于0.38～0.42，判為可疑；樣品OD630 nm<0.38，判為陰性。

1.3 PCR方法病原檢測 對待檢血清及病料上清物進(jìn)行病原檢測，CSFV核酸擴(kuò)增檢測試劑盒，由北京索奧生物技術(shù)有限公司提供；PRRSV鑒別RT-PCR檢測試劑盒，由青島易邦生物工程有限公司提供；PRV PCR檢測試劑盒和PCV2 PCR檢測試劑盒，均由北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司提供。檢測方法與判定標(biāo)準(zhǔn)按各試劑盒使用說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果與討論

2.1 CSFV、PRV免疫抗體檢測 2013—2018年，采用ELISA抗體檢測試劑盒對山西省11地市70多個種豬場檢測母豬公豬CSFV抗體血樣902份，合格率為76.61%；檢測仔豬血樣3 133份，合格率為55.89%。檢測母豬公豬PRV gB抗體血樣661份，合格率為90.02%，檢測仔豬PRV gB抗體血樣3 892份， 合格率為88.26%，見圖1。從圖1可以看出，母豬公豬CSFV免疫抗體合格率，2013—2016年略呈逐年持續(xù)上升趨勢，2016—2017年呈明顯下降趨勢，2017—2018年呈上升趨勢，2018年恢復(fù)至2013—2015年平均水平。仔豬CSFV免疫抗體合格率，2013—2016年略呈逐年持續(xù)上升趨勢，2016—2017年呈明顯下降趨勢，2017—2018年呈上升趨勢，可見除2017年較其他幾年低外，2013—2018年間豬瘟免疫效果總體水平相當(dāng)，這可能由于2017年豬瘟退出政府強(qiáng)制免疫后，豬場對豬瘟的防控放松所致，與陳麗燕[6]對福建省龍巖市規(guī)模化豬場豬瘟免疫抗體情況調(diào)查和周恒等[7]對湖南省宜昌市夷陵區(qū)豬瘟免疫抗體監(jiān)測分析研究結(jié)果一致。母豬公豬PRV免疫抗體合格率2013—2015年呈逐年持續(xù)上升趨勢，2015—2016年呈下降趨勢，2016—2017年呈上升趨勢，2017—2018年呈下降趨勢；仔豬PRV免疫抗體合格率，2013—2014年略呈上升趨勢，2014—2015年略呈下降趨勢，2015—2016年呈明顯上升趨勢，2016—2017年略呈下降趨勢，2017—2018年略呈上升趨勢，總的來看，2013—2018年整體呈上升趨勢；豬偽狂犬免疫效果總體水平較為理想。但自2012年以來，調(diào)查發(fā)現(xiàn)即使免疫抗體效價和合格率較高，有些仔豬也會出現(xiàn)口吐白沫，伴有神經(jīng)癥狀等，導(dǎo)致死亡，豬PR病原檢測為陽性豬，這可能與PR病原發(fā)生變異有關(guān)[8-15]。同時對太原、晉中3個豬場不同日齡豬群的CSFV、PRV gB抗體消長情況進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRV gB抗體合格率從70日齡開始呈明顯持續(xù)下降趨勢，120日齡降至最低；CSFV抗體合格率從30日齡開始呈明顯下降趨勢，40、50日齡和60日齡降至最低，只有32%左右，比王娟萍等[16]報道的保育豬抗體陽性率平均為40.57%還低，為此應(yīng)調(diào)整CSF免疫程序與方法，強(qiáng)化仔豬的免疫，70日齡開始上升，100日齡又開始降低(圖2)。

圖1 CSFV、PRV免疫抗體合格率Fig.1 Qualified rates of immune antibody to CSFV and PRV

圖2 CSFV、PRV gB免疫抗體消長情況Fig.2 Fluctuation of immune antibody to CSFV and PRV gB

2.2 PRRSV、PCV2、PRV gE感染抗體檢測 應(yīng)用ELISA抗體檢測試劑盒檢測PRRSV非免疫豬群母豬公豬血樣602份，感染抗體陽性率為64.45%、仔豬血樣2 800份，陽性率為51.11%；檢測PCV2非免疫豬群母豬公豬血樣651份，陽性率為62.06%；仔豬血樣4 001份，陽性率為59.16%；檢測PRV gE血樣3 892份，陽性率為38.28%,見圖3。從圖3可以看出，隨著時間的變化，PRRSV母豬公豬感染抗體陽性率整體呈上升趨勢，除2016—2017年略呈下降趨勢外，其他年份都呈逐年持續(xù)上升的趨勢，尤其2016—2018年比2013—2015年明顯上升；PRRSV仔豬感染抗體陽性率整體呈上升趨勢，除2013—2014年略呈下降趨勢外，2014—2018年都呈逐年持續(xù)上升趨勢，尤其2016—2018年比2013—2015年明顯上升；PCV2母豬公豬感染抗體陽性率2013—2014年呈下降趨勢，2014—2015年呈上升趨勢，2015—2016年明顯呈下降趨勢，2016—2018年明顯呈逐年持續(xù)上升趨勢；PCV2仔豬感染抗體陽性率，2013—2014年呈上升趨勢，2014—2016年呈逐年持續(xù)下降趨勢，2016—2018年明顯呈逐年持續(xù)上升趨勢，證實山西豬群普遍感染PRRSV和PCV2[17]。PRV感染抗體陽性率，2013—2015年呈逐年持續(xù)下降趨勢，2015—2016年呈上升趨勢，2016—2017年呈下降趨勢，2017—2018年呈上升趨勢，可見山西豬群PRV gE抗體陽性率雖然起伏不定，沒有暴發(fā)流行，但2013—2018年整體呈上升趨勢，預(yù)示著隨時可能暴發(fā)偽狂犬病，預(yù)防及凈化工作刻不容緩。這與高許雷等[18]2012—2017 年我國部分地區(qū)規(guī)模化豬場PRV 野毒感染狀況血清流行病學(xué)調(diào)查情況相一致。

圖3 PRRSV、PCV2、PRV gE感染抗體檢測結(jié)果Fig.3 Detection results of PRRSV,PCV2 and PRV gE infection antibodies

2.3 CSF、PRRS、PR、PCV2感染病原檢測 應(yīng)用PCR和RT-PCR檢測試劑盒檢測病料616份，CSFV陽性率為12.66%，PRRSV陽性率為4.38%，高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)陽性率為22.40%，PRV陽性率為7.14%，PCV2陽性率為28.57%，見圖4。從圖4可以看出，CSFV陽性率2010—2011年呈上升趨勢，2011—2016年呈逐年持續(xù)下降趨勢，2016—2017年呈上升趨勢，2017—2018年呈下降趨勢，2010—2012年明顯高于其他年份，2010—2018年整體呈下降趨勢，可能因為國家2007年開始將豬瘟免疫納入重大動物疫病強(qiáng)制免疫的范疇后，使得豬瘟的免疫進(jìn)入規(guī)模化、科學(xué)化的軌道，這在一定程度使豬瘟得到了控制。PRRSV陽性率2010—2014年呈逐年持續(xù)下降趨勢，2014—2016年呈逐年持續(xù)上升趨勢,2016—2018年呈逐年持續(xù)下降趨勢，陽性檢出率起伏不定；HP-PRRSV陽性率2010—2014年呈逐年持續(xù)上升趨勢，2014—2015年呈下降趨勢，2015—2017年呈逐年持續(xù)上升趨勢,2017—2018年呈下降趨勢，2017—2018年明顯高于其他年份，整體呈上升趨勢，這與劉建奎等[19]2009—2017年對福建省PRRSV分子流行病學(xué)調(diào)查的情況相一致,可見PRRS的防控形勢依然嚴(yán)峻。PRV陽性率2010—2011年呈下降趨勢，2011—2013年呈逐年持續(xù)上升趨勢，2013—2015年呈逐年持續(xù)下降趨勢，2015—2018年呈逐年持續(xù)上升趨勢，陽性檢出率起伏不定，但2013年最高，可能與PRV發(fā)生變異有關(guān)[8-15]。PCV2陽性率2010—2015年呈逐年持續(xù)上升趨勢，2015—2017年呈逐年持續(xù)下降趨勢，2017—2018年呈上升趨勢，2015年明顯高于其他年份，陽性檢出率最高。學(xué)者宋玉慧[20]于2014—2015年對河南省18個地市進(jìn)行PCV2病原核酸檢測，PCV2的核酸陽性率為28.08%;李海全等[21]于2015—2017年在四川省7個市縣地區(qū)進(jìn)行PCV2病原核酸檢測，PCV2的核酸陽性率為49.20%，這些都表明，PCV2在全國都存在比較嚴(yán)重的感染。

圖4 CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV和PCV2 gE病原檢測結(jié)果Fig.4 Detection results of pathogen for CSFV, PRRSV,HP-PRRSV, PRV and PCV2 gE

2.4 CSF、PRRS、PR、PCV2感染病原混合感染 對616份病料同時檢測CSFV、PRRSV、PRV、PCV2，證明PCV2和其他4種疫病的混合感染達(dá)到16.23%。同時發(fā)現(xiàn)PCV2和HP-PRRSV共感染率最高，達(dá)8.12%，這與當(dāng)前我國豬群較為普遍感染模式仍是混合感染，病毒性混合感染中，PRRSV和PCV2混感仍為最主要的混合感染模式相一致。PCV2和PRV共感染率次之，達(dá)3.08%，其次為PCV2和PRRSV共感染及HP-PRRSV和PRRSV共感染，然后為PCV2和CSFV共感染，再次為CSFV和HP-PRRSV共感染，CSFV和PRV共感染及PRV和PRRSV共感染率最低(圖5)，這也可能是PCV2在豬場的存在對豬群免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抑制作用，致使對其他疫病免疫應(yīng)答反應(yīng)下降的原因之一[22]。

圖5 CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PRV和PCV2混合感染病原檢測Fig.5 Detection results of mixed infection pathogen for CSFV,PRRSV,HP-PRRSV,PCV2 and PRV

綜上所述，通過對山西省豬群CSFV和PRV 免疫抗體，PRRSV、PCV2和PRV感染抗體及CSFV、PRRSV、HP-PRRSV、PCV2和PRV病原的抽查檢測，基本掌握了山西省豬群免疫情況、感染情況以及流行動態(tài)，為免疫程序的調(diào)整和采取針對性防控措施提供了依據(jù)。