獸醫實驗室實驗員熒光定量PCR理論與操作的調查分析及培訓建議

馮淑萍謝守玉 楊 榮 龍劍明

（1廣西壯族自治區動物疫病預防控制中心，廣西南寧 530001；2廣西南寧神九生物制品有限責任公司，廣西南寧 530001）

熒光定量PCR是一種在DNA擴增反應中以熒光化學物質測定每次聚合酶鏈式反應循環后產物總量的方法，最早也稱TaqMan PCR、Real-time PCR，是美國PE公司在1995年研制出來的一種新的核酸定量技術，也是目前病原檢測領域使用最為廣泛的核酸檢測方法。尤其是在非洲豬瘟和新冠疫情發生后，熒光定量PCR檢測技術得到了很大的應用和普及。

為進一步加強全區非洲豬瘟排查、檢測力量，做好非洲豬瘟防控工作，根據《廣西壯族自治區農業農村廳關于進一步加強非洲豬瘟實驗室檢測工作的通知》文件要求，截至2021年1月，廣西共發布20批次非洲豬瘟檢測實驗室名單，包括疫控獸醫系統、養殖企業、屠宰企業和第三方檢測等實驗室，共計252個。據不完全統計，2018年非洲豬瘟疫情發生前，廣西有12個市（縣）配備熒光PCR儀器；非洲豬瘟暴發后，市、縣級疫控獸醫系統及屠宰場、養殖場、第三方檢測等實驗室配置PCR儀達到140余臺，數量急劇增長。熒光PCR儀器和檢測技術作為分子生物學最新的檢測方法，涉及數學原理、化學原理、光學原理和探針引物設計等多項復雜原理。多年來，縣級基層獸醫實驗室大多數只做血清學檢測，實驗室人員年齡結構偏大（41～50歲占36.63%），縣級疫控獸醫系統、養殖場、屠宰場從事實驗室檢測的人員存在學歷低 （大專及以下學歷占40.6%）、培訓少等問題。因此，做好熒光PCR技術的有效培訓，使基層一線實驗室檢測人員能真正掌握熒光PCR檢測技術、提升檢測能力十分必要。

本調查問卷研究了市、縣級疫控獸醫系統及養殖場、屠宰場和第三方檢測等實驗室實驗員對熒光PCR儀的熟悉程度，分析了存在的問題，提出了有針對性的培訓建議，以期為進一步完善獸醫實驗室培訓制度提供參考。

1 問卷調查分析

1.1 調查內容與方法

問卷調查的對象主要是市、縣級疫控獸醫系統和屠宰場、養殖場、第三方檢測等實驗室實驗員，他們在動物疫病檢測一線，作為研究樣本具有代表性。

本次調查依據發現問題、分析問題、提出建議的設計思路，以市、縣級疫控獸醫系統及屠宰場、養殖場、第三方檢測等實驗室實驗員為樣本，利用“問卷星”在線設計并發布調查問卷。

1.2 調查結果

本次調查問卷共發布172份，回收答卷172份，回收率100%。問卷設置要求每個問題都回答才能提交，因而172份問卷均有效。獸醫實驗室問卷調查人員占比分布見圖1。

調查發現，被調研的市級疫控獸醫系統實驗室已100%配備熒光定量PCR儀器，縣級疫控獸醫系統實驗室有91.56%已配備，屠宰場、養殖場、第三方檢測實驗室有89.13%已配備，對熒光定量PCR儀器操作和理論知識有基本了解。調研中，172份問卷中對PCR儀操作的掌握程度，選擇“不了解，操作不熟悉”的占9.88%，選擇“基本了解，可以操作”的占61.05%，選擇“完全了解，熟悉操作”的只有29.07%。因其涉及多學科交叉綜合，調研對象對熒光定量PCR儀原理的掌握程度存在一定差距，未做到完全了解和熟練運用（表1）。

表1 熒光定量PCR儀器原理掌握情況調查問卷匯總

2 存在的問題

2.1 缺乏定期培訓

非洲豬瘟疫情暴發后，省、市級疫控獸醫系統實驗室逐步開放檢測非洲豬瘟的資質。隨著疫情的持續蔓延，越來越多縣級疫控獸醫系統實驗室和養殖場、屠宰場、第三方檢測實驗室通過實驗比對獲得檢測資質，但實驗室人員對熒光定量PCR理論掌握程度與實際操作水平參差不齊、基礎薄弱，亟須定期對新進人員、非專業出身的實驗操作人員、有實驗經驗的人員進行定期培訓和熒光定量PCR技術鞏固加強。

2.2 培訓師資力量不足

掌握熒光定量PCR技術要求對儀器設置的數學原理、化學原理和光學原理等技術原理能夠熟悉了解，同時還包括軟件操作、數據分析、儀器日常維護等技術。相比疾病預防控制中心（CDC）、海關檢疫、市場監督管理等系統來說，獸醫疫控系統師資力量明顯不足，需要管理培訓部門在內部不斷學習提升。

2.3 缺乏培訓前調研培訓后測評

在培訓計劃制定和日常實施過程中，由于缺乏人力、財力的支持和時間成本的考慮，大部分實驗室還存在如何根據人員需求制定培訓計劃、如何更合理地進行培訓安排、如何有針對性地進行培訓考核、如何進行培訓效果評估等問題。

3 建議

為了能夠有效、更好地開展熒光定量PCR儀的理論與操作培訓，提高基層獸醫實驗室一線實驗人員熒光定量PCR儀理論與操作水平，幫助他們切實掌握熒光定量PCR儀使用技術，可以從以下3個方面進行優化完善。

3.1 建立定期培訓機制

根據實驗室總體目標、疫病檢測技術發展趨勢和各層級實驗室在實際工作中的培訓需求，同時結合實驗室的管理評審、內部審核、考核續證等活動，堅持適時有效的原則，建立定期培訓機制。實驗室應定期派遣代表人員外出參加專業領域前沿技術或設備的培訓，對新進員工、臨時進入人員進行培訓和指導，對有經驗的人員開展周期性再培訓，采取多渠道、多形式、多層次的方式，力爭達到培訓計劃的系統性、針對性、有效性[1]。

3.2 建立培訓講師培養機制

技術培訓的質量與培訓講師自身的能力和教學水平有正向關聯。因此，主管部門應選拔業務水平高的人員組建高質量的講師團。自治區級科研院所、高校實驗室專業領頭人、技術骨干、研發企業高級職稱人才應成為講師團的人選。根據實驗室不同層次、不同需求制定培訓內容、培訓方式，有條件的實驗員最好能夠到講師實驗室“一對一”進行短期跟班學習，積極發揮專業技術骨干人才“傳、幫、帶”的作用，提高培訓的技術性，提升學員學習的積極性[2]。

3.3 建立培訓前調研和培訓后測評機制

樹立“以人為本”理念，通過培訓前調研和培訓后測評確定培訓的方式和內容，確保培訓的針對性和時效性。信息時代，可通過網絡問卷小程序等節約調研人力成本，或者結合平時其他工作，組織培訓前調研，根據不同疫病檢測項目、不同檢測技術、對培訓的不同需求等制定科學的實驗室操作人員技術培訓方案。調研內容可包括實驗室不同層次和崗位需求、操作人員亟須更新的技術和人才培養對象等方面[3]。調查問卷顯示，自治區集中培訓班（40.12%）、到上一級實驗室跟班學習（37.21%）、外聘講師到本實驗室專題授課（20.93%）是最受歡迎的培訓方式。

建立培訓后測評機制，從檢驗參訓人學習效果和培訓評價2個方面入手，檢驗培訓是否達到預期效果。如果效果未達到目標，就需要重新修正本次培訓存在的缺陷和不足，及時補充修正，以便保證后續培訓效果。同時，培訓后的測評也可以作為培訓講師的一項績效考核指標，從而激發講師積極改進教學方式方法的熱情，提高工作質量，達到講師和參訓人員的雙提升目的[4]。

4 結語

熒光定量PCR技術依靠高度特異性及高敏感性，是近幾年分子生物診斷檢測領域最常用、最熱門的方法，大量應用于非洲豬瘟、新冠病毒的核酸檢測。熒光定量PCR技術的普及應用、檢測方法的快速發展和大量的檢測任務使廣西壯族自治區各級獸醫實驗室檢測水平跨越新的臺階，也對檢測人員提出了更高的要求，有針對性、合理、高效的技術培訓能夠提高人員操作標準化水平和實驗室核心競爭力。