豬腸道大腸桿菌病的診斷及抗生素治療

賈博/甘肅省莊浪縣朱店鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 744699

大腸桿菌是一種可引起多種豬病的病原體，包括新生仔豬腹瀉和斷奶后仔豬腹瀉（post-weaning diarrhoea，PWD），是造成全世界哺乳期仔豬和斷奶仔豬死亡的重要病因。產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是豬腸道大腸桿菌病的主要致病菌。由于ETEC 感染引起新生仔豬和斷奶仔豬腹瀉暴發(fā)，通常發(fā)病率較高，并在發(fā)病的豬群中反復(fù)發(fā)生，因此造成高額的治療和防控費(fèi)用。豬腸道大腸桿菌病可應(yīng)其造成豬較高的死亡率、體重增加減少、治療費(fèi)用增加、疫苗接種和飼料浪費(fèi)等造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)統(tǒng)計(jì)，根據(jù)豬腸道大腸桿菌病的嚴(yán)重程度，PWD 造成的經(jīng)濟(jì)損失為每頭40 至314 歐元。預(yù)防和控制新生仔豬大腸桿菌病的常用措施包括減少環(huán)境中致病性大腸桿菌的數(shù)量、實(shí)施養(yǎng)殖場(chǎng)衛(wèi)生措施、保障場(chǎng)內(nèi)外的生物安全、維持適宜仔豬生長(zhǎng)的環(huán)境條件、通過(guò)母豬接種疫苗保障仔豬獲得較高水平的被動(dòng)免疫力、提高仔豬的免疫水平等。除上述預(yù)防方法外，口服或注射途徑用應(yīng)用抗生素仍僅用于治療豬腸道大腸桿菌病。此外，控制豬腸道大腸桿菌病需要對(duì)大腸桿菌有足夠的了解，尤其是其致病機(jī)制，以便實(shí)施適當(dāng)?shù)脑\斷、預(yù)防和治療措施。可靠準(zhǔn)確的診斷方法是應(yīng)對(duì)豬大腸桿菌病暴發(fā)診斷的關(guān)鍵因素。

1 豬腸道大腸桿菌病的診斷

在診斷豬腸道大腸桿菌病時(shí)有多種診斷方法，從臨床觀察患病豬的臨床癥狀和大體病變開始，再到大腸桿菌的細(xì)菌性分離鑒定及流行病學(xué)調(diào)查等存在不同的診斷程序組合。

ETEC 引起的新生仔豬腹瀉常見于0～4 日齡的仔豬，一般情況下，在流行病學(xué)調(diào)查中，由于第一胎母豬所產(chǎn)仔豬缺乏被動(dòng)免疫保護(hù)從而更容易患腸道大腸桿菌病。ETEC 所致的PWD 通常在斷奶后的2～3 周可觀察到，但有報(bào)道在6～8 周也可發(fā)生。ETEC 所致的新生仔豬腹瀉可觀察到大量水樣或乳樣的腹瀉物，具有獨(dú)特的氣味，顏色通常為白色或黃色。ETEC 引起斷奶后仔豬大腸桿菌病的臨床表現(xiàn)為淡黃色、灰色或略帶粉紅色的水樣腹瀉，具有特征性的氣味，一般臨床癥狀可持續(xù)1 周。發(fā)病豬通常會(huì)出現(xiàn)食欲下降、被毛粗糙和精神沉郁。患病豬可出現(xiàn)突然性死亡，特別是在暴發(fā)初期，病豬通常會(huì)出現(xiàn)脫水癥狀和眼睛凹陷。剖檢病豬可見小腸擴(kuò)張、輕微水腫和充血。在新生仔豬或斷奶仔豬患大腸桿菌病后，胃通常擴(kuò)張并充滿凝結(jié)的乳塊或飼料，眼底充血，腸系淋巴結(jié)腫大充血。但應(yīng)注意的是這些病變不具有特征性，應(yīng)結(jié)合其他檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行判斷或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

經(jīng)臨床觀察和大體病變判斷為豬大腸桿菌病時(shí)，可采集樣品送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌學(xué)或分子生物學(xué)檢測(cè)。采樣時(shí)可選取3～5 頭未治療的仔豬，采樣豬腹瀉時(shí)間在12～24h。對(duì)其進(jìn)行安樂死并尸檢，評(píng)估患病豬的各消化器官病變并收集樣品。將小腸段和大腸段末端打結(jié)，用于病理組織學(xué)試驗(yàn)需用10%的福爾馬林固定，而細(xì)菌學(xué)檢測(cè)則保證樣品的新鮮度因此需在4℃溫度下儲(chǔ)存并在24h 內(nèi)迅速送至實(shí)驗(yàn)室。自然死亡的動(dòng)物也可采樣，但應(yīng)注意的是在動(dòng)物死亡后尸體會(huì)發(fā)生自溶而影響結(jié)果，因此應(yīng)在動(dòng)物死后立即進(jìn)行剖檢和樣品采集。如果無(wú)組織樣品可收集，也可收集3～5 頭豬的糞便或直腸拭子作為檢測(cè)樣品，但應(yīng)注意糞便不能被環(huán)境中的其他污染物污染。

采集的樣品可以接種至血瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基或其他腸桿菌科選擇或鑒定培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的分離和初步鑒定。新生仔豬腹瀉或PWD樣品中分離的菌株在血瓊脂培養(yǎng)基上菌落的溶血性常用作診斷ETEC 的常用指標(biāo)。一般來(lái)說(shuō)，從患有大腸桿菌病的新生仔豬腹瀉樣品中分離菌株在血瓊脂培養(yǎng)基上溶血和非溶血的菌落均存在，但從PWD 樣品中分離的ETEC 具有溶血性的菌株占比較大。但致病菌株的檢測(cè)結(jié)果并不總能證明仔豬出現(xiàn)大腸桿菌病，還要結(jié)合大腸桿菌的致病性、患病豬的臨床癥狀等方面因素綜合判斷。此外對(duì)用抗生素治療后的病豬檢測(cè)ETEC 結(jié)果為陰性并不能證明豬群未發(fā)生豬大腸桿菌病，還需對(duì)未治療的豬進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。在實(shí)驗(yàn)室診斷中，采用PCR 的方法對(duì)ETEC 編碼的特征性毒力基因?qū)Ψ蛛x株進(jìn)行分型驗(yàn)證以區(qū)分致病菌株已成為一種常用方法，該方法能快速的診斷出ETEC，但由于其他腸桿菌科可能存在類似的毒力基因也可能影響檢測(cè)結(jié)果。熒光定量PCR檢測(cè)方法已發(fā)展為單獨(dú)或與其他細(xì)菌學(xué)診斷方法結(jié)合的ETEC 檢測(cè)方法之一。該方法對(duì)大腸桿菌進(jìn)行了量化顯示，是一種很有前景的腸道大腸桿菌病的診斷方法。此外，部分致病性大腸桿菌也可通過(guò)O 抗原血清型分型來(lái)識(shí)別，因?yàn)樯贁?shù)特定的O 血清型大腸桿菌與豬大腸桿菌病有關(guān)。豬大腸桿菌病的病理學(xué)檢測(cè)也常用于該病的診斷。在患有新生仔豬大腸桿菌病的仔豬可觀察到ETEC 黏附于大部分小腸細(xì)胞刷狀緣膜表面，其他病理變化可包括血管充血出血和炎性細(xì)胞數(shù)量增加。PWD的微觀病變特征是在回腸絨毛上皮細(xì)胞頂端表面的斑塊中可觀察到細(xì)菌層。

由于豬腸道疾病的發(fā)生通常是由多種病原和因素共同作用的結(jié)果，因此單一考慮某種病原和因素可導(dǎo)致臨床治療效果欠佳。此外，ETEC 引起的腹瀉與其他病原引起的仔豬腹瀉具有一定的相似性，如冠狀病毒、輪狀病毒、沙門氏菌和胞內(nèi)勞森菌等，因此在臨床大體病變、剖檢組織病變以及實(shí)驗(yàn)室診斷過(guò)程中應(yīng)注意區(qū)分并進(jìn)行針對(duì)性的治療。

2 抗生素與豬腸道大腸桿菌的治療

在治療豬大腸桿菌病時(shí)，抗菌治療是公認(rèn)的首要目標(biāo)。在許多豬腸道大腸桿菌病的診治病例中常應(yīng)用抗生素來(lái)避免致病菌傳播和緩解臨床癥狀。在應(yīng)用抗生素治療豬大腸桿菌病時(shí)，在藥物選擇和制定給藥計(jì)劃時(shí)應(yīng)首選確定致病菌株對(duì)抗生素的敏感性，選擇對(duì)致病菌具有最佳殺菌或抑菌效果的抗生素是有效治療的基礎(chǔ)。另外，還應(yīng)考慮用藥的劑量和頻率，以確保用于治療的抗生素在主要感染部分達(dá)到足夠的抗菌濃度。最后，經(jīng)驗(yàn)性治療是對(duì)畜群體有足夠的了解和致病菌抗性模式數(shù)據(jù)充分分析下進(jìn)行的快速用藥方法。大腸桿菌病的暴發(fā)通常需要采取迅速的措施，因此抗生素的使用總是先于耐藥模式檢測(cè)。因此在大多數(shù)情況下，正確選擇抗生素治療豬大腸桿菌病是該病防治和緩解致病菌耐藥性的產(chǎn)生壓力的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)室可通過(guò)藥物敏感性試驗(yàn)、最小抑菌濃度等試驗(yàn)精準(zhǔn)分析病原體對(duì)抗生素的敏感程度。

在歐洲的一些國(guó)家，如荷蘭將所有抗生素分為三類，并根據(jù)致病菌株耐藥和敏感情況、流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)等更新該分類。一般而言，在臨床診斷后進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性治療可先使用首選抗生素治療，在臨床治療或藥物敏感性試驗(yàn)驗(yàn)證首選藥物無(wú)效后選用第二類抗生素，而第三類抗生素則是在前兩類抗生素?zé)o效的情況下作為最后的選擇。在抗生素治療豬大腸桿菌病相關(guān)的腸道疾病時(shí)，由于病豬很少進(jìn)食和飲水，所以應(yīng)以腸胃外給藥方式進(jìn)行治療。在日常養(yǎng)殖時(shí)，在畜群中出現(xiàn)因大腸桿菌感染所致死亡時(shí)應(yīng)及時(shí)處理患病動(dòng)物和死亡動(dòng)物，對(duì)同畜群的豬可進(jìn)行預(yù)防性治療。

抗菌治療取決于病原體對(duì)抗菌治療的敏感度、引起靶向微生物所需的藥物結(jié)合特征以及在感染部位所能達(dá)到的藥物濃度。正常使用抗生素，優(yōu)化抗生素治療劑量可增加治療有效性，減少藥物毒性和病原體的耐藥性。適當(dāng)劑量的抗生素是控制或清除抗感染部位細(xì)菌的關(guān)鍵，也是限制抗生素耐藥性的關(guān)鍵，在對(duì)劑量?jī)?yōu)化的同事，也許對(duì)治療的頻率和時(shí)間等進(jìn)行優(yōu)化已達(dá)到最佳的臨床結(jié)果和最低對(duì)致病菌的藥物選擇壓力。

近年的研究發(fā)現(xiàn)，引起PWD 的ETEC 菌株對(duì)越來(lái)越多的抗生素表現(xiàn)耐藥，耐藥譜日益擴(kuò)大，耐藥程度日益加重。對(duì)多種抗生素耐藥的ETEC 發(fā)現(xiàn)，以及ETEC 對(duì)用于治療豬大腸桿菌病的抗生素的耐藥趨勢(shì)是一個(gè)令人擔(dān)憂的現(xiàn)象。豬ETEC 的耐藥性在不同的國(guó)家和豬群中的情況各不相同，這與各國(guó)和各養(yǎng)殖場(chǎng)優(yōu)選使用抗生素藥物的不同有關(guān)。

3 結(jié)語(yǔ)

豬腸道大腸桿菌病的防控關(guān)鍵在于準(zhǔn)確的診斷和適當(dāng)?shù)念A(yù)防治療措施。其中，應(yīng)提高診斷方法的敏感度和準(zhǔn)確性，此外，經(jīng)濟(jì)成本也是影響診斷方法應(yīng)用范圍的關(guān)鍵因素，同時(shí)也應(yīng)在養(yǎng)殖場(chǎng)或獸醫(yī)診所等建立起標(biāo)準(zhǔn)化的診斷流程。抗生素在治療新生仔豬和斷奶仔豬大腸桿菌病中被廣泛應(yīng)用，在許多國(guó)家應(yīng)用抗生素進(jìn)行預(yù)防性和治療性使用仍十分普遍。隨著從腹瀉豬樣品中分離的大腸桿菌菌株多重耐藥情況越來(lái)越流行，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注致病性大腸桿菌菌株的抗生素耐藥性，并且抗生素替代的治療和預(yù)防方法的研究得到更多的關(guān)注，如疫苗、益生菌、中草藥、化學(xué)藥物和飼養(yǎng)管理方式等。即使某些預(yù)防方法顯示出一定的效果，但目前使用抗生素治療和控制豬腸道大腸桿菌病的首選方法。如今人們更加關(guān)注從養(yǎng)殖動(dòng)物分離的細(xì)菌的抗生素耐藥性增加，這迫使相關(guān)工作人員更加理性和理智的使用抗生素。

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