禽傳染性支氣管炎的診斷方法與防控建議

王旺/河南省駐馬店市遂平縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 463100

禽傳染性支氣管炎是由禽支氣管炎病毒感染引起的一種禽常見(jiàn)傳染病，給全世界的家禽業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。自首次于美國(guó)北達(dá)科他州發(fā)現(xiàn)禽傳染性支氣管炎以來(lái)，禽傳染性支氣管炎病毒在世界各國(guó)的雞群中被廣泛的發(fā)現(xiàn)，尤其是在擁有大量商品化禽種群的國(guó)家。除呼吸道感染外，禽傳染性支氣管炎還會(huì)影響家禽的腎臟和生殖道，分別導(dǎo)致腎功能障礙和產(chǎn)蛋量減少。雖然禽傳染性支氣管炎最初被認(rèn)為主要發(fā)生在低日齡雞，但是，所有日齡的雞均易感染禽傳染性支氣管炎病毒。

1 禽傳染性支氣管炎的流行病學(xué)

禽傳染性支氣管炎病毒主要感染家禽的呼吸系統(tǒng)并引發(fā)疾病。然而，一些病毒變種和一些野外分離物可影響雞的生殖、腎臟和消化系統(tǒng)。禽傳染性支氣管炎的臨床癥狀因所涉及的系統(tǒng)以及病毒株而異。

家禽被認(rèn)為是禽傳染性支氣管炎的天然宿主，但在非家禽物種中也發(fā)現(xiàn)了禽傳染性支氣管炎病毒樣冠狀病毒，包括野雞、孔雀、火雞、鵝、鴿子、鵪鶉、鴨子和亞馬遜鸚鵡。火雞冠狀病毒和禽傳染性支氣管炎病毒之間的抗原相似性也已得到證實(shí)。已在與家禽密切接觸的人類中檢測(cè)到禽傳染性支氣管炎抗體陽(yáng)性，但尚未報(bào)告該病毒會(huì)導(dǎo)致人類臨床疾病。所有年齡和品種類型的雞都易受禽傳染性支氣管炎病毒感染，但與成年雞相比，禽傳染性支氣管炎的臨床癥狀嚴(yán)重程度在低日齡的小雞中更為明顯。同樣，家禽對(duì)禽傳染性支氣管炎病毒感染的抵抗力也隨著日齡的增加而增加。

禽傳染性支氣管炎病毒通過(guò)呼吸道分泌物以及受感染家禽的糞便、飛沫傳播。受污染的物體和器具可能有助于禽傳染性支氣管炎病毒從一個(gè)群體傳播到另一個(gè)群體。通過(guò)氣溶膠傳播方式人工感染后在試驗(yàn)雞氣管、腎臟和法氏囊中檢測(cè)到禽傳染性支氣管炎病毒，證實(shí)了該病毒可通過(guò)空氣氣溶膠傳播。禽傳染性支氣管炎病毒在環(huán)境和宿主體內(nèi)的持久性仍有待闡明。

2 禽傳染性支氣管炎的臨床表現(xiàn)及病理變化

在家禽中，初始感染發(fā)生在哈德氏腺、氣管、肺和氣囊的上皮。禽傳染性支氣管炎的嚴(yán)重程度和臨床特征取決于所涉及的器官或系統(tǒng)。呼吸系統(tǒng)感染可能導(dǎo)致臨床癥狀有喘氣、打噴嚏、和流鼻涕。受影響的家禽無(wú)精打采，羽毛豎起。其他癥狀可能包括體重減輕和禽舍內(nèi)的家禽擠在一起。

與禽傳染性支氣管炎感染相關(guān)的其他臨床結(jié)果包括結(jié)膜炎、流淚、水腫。受感染的家禽也可能出現(xiàn)昏昏欲睡，有呼吸困難和不愿移動(dòng)的臨床表現(xiàn)。腎病性禽傳染性支氣管炎病毒毒株在肉雞中最為常見(jiàn)。臨床癥狀包括抑郁、濕便和過(guò)量飲水。生殖道感染與輸卵管損傷有關(guān)，導(dǎo)致產(chǎn)蛋量和蛋質(zhì)量下降。雞蛋可能會(huì)出現(xiàn)畸形、粗糙的外殼或帶有水樣的蛋黃。若不采取有效的治療措施，產(chǎn)蛋量下降不會(huì)恢復(fù)正常產(chǎn)蛋，從而導(dǎo)致高經(jīng)濟(jì)損失。

病理剖檢時(shí)肉眼觀察到的病理變化包括氣管黏膜和肺外支氣管充血和水腫。腎病性禽傳染性支氣管炎病毒毒株會(huì)引起以腎臟腫脹和充血為特征的腎炎，有時(shí)伴有尿酸鹽沉積的輸尿管蒼白。同樣，感染腎病性禽傳染性支氣管炎病毒毒株可能導(dǎo)致腎臟蒼白、腫脹和出現(xiàn)白色花紋。當(dāng)生殖系統(tǒng)受到影響時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)腺體下輸卵管炎，尤其是在嚴(yán)重感染的雞中更為常見(jiàn)。在感染某些禽傳染性支氣管炎病毒毒株后的青年蛋雞中也觀察到囊性輸卵管炎。

禽傳染性支氣管炎感染由于宿主相關(guān)、病毒相關(guān)、環(huán)境、繼發(fā)性細(xì)菌感染或共感染具有免疫抑制作用的病毒如傳染性法氏囊病病毒可能會(huì)造成禽傳染性支氣管炎病毒感染的惡化結(jié)果。通常，與僅感染呼吸系統(tǒng)或生殖系統(tǒng)的菌株相比，腎病禽傳染性支氣管炎病毒毒株會(huì)導(dǎo)致更高的死亡率。

3 禽傳染性支氣管炎的診斷方法

傳統(tǒng)的和新型的診斷方法已被用于診斷禽傳染性支氣管炎病毒感染。選擇一種檢測(cè)還是另一種檢測(cè)取決于樣品類型、檢測(cè)材料和設(shè)施的可用性、檢測(cè)報(bào)告時(shí)間、檢測(cè)目的以及檢測(cè)是在現(xiàn)場(chǎng)還是在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

3.1 禽傳染性支氣管炎的血清學(xué)檢測(cè)方法過(guò)去，病毒中和試驗(yàn)（VN）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）等血清學(xué)檢測(cè)試驗(yàn)被廣泛用于檢測(cè)和禽傳染性支氣管炎病毒毒株血清分型。血清學(xué)檢測(cè)方法也被用于檢測(cè)疫苗接種后的雞群保護(hù)。血清型特異性抗體通常使用血凝抑制試驗(yàn)，即使血凝抑制試驗(yàn)有時(shí)的檢測(cè)結(jié)果不太準(zhǔn)確。另一方面，ELISA 檢測(cè)是一種更靈敏，更容易應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)使用和監(jiān)測(cè)疫苗接種或暴露后的抗體反應(yīng)的檢測(cè)方法。然而，不與常用抗血清發(fā)生交叉反應(yīng)的不同禽傳染性支氣管炎病毒毒株血清型的出現(xiàn)通常使得血清學(xué)檢測(cè)在對(duì)新的或新興的禽傳染性支氣管炎病毒分離株進(jìn)行分類時(shí)不太適用并且是非決定性。

3.2 禽傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定病毒分離一直是診斷禽傳染性支氣管炎病毒的金標(biāo)準(zhǔn)。在疾病早期采集樣本并確保正確的采樣技術(shù)是成功分離禽傳染性支氣管炎病毒的關(guān)鍵。為從拭子中成功分離病毒，建議將拭子樣本置于培養(yǎng)基或 PBS 的緩沖溶液中，然后再將其運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。嚴(yán)格的技術(shù)要求和因素，例如病毒在雞蛋或細(xì)胞培養(yǎng)物中多次傳代所需的時(shí)間，限制了病毒分離作為禽傳染性支氣管炎病毒感染診斷方法的選擇。盡管如此，不同的實(shí)驗(yàn)室使用不同的分離方法，如雞胚接毒、細(xì)胞接毒和器官接毒。

3.3 免疫組織化學(xué)法免疫過(guò)氧化物酶和免疫熒光是兩種重要的組織化學(xué)方法，用于檢測(cè)和確認(rèn)來(lái)自受感染組織和/或細(xì)胞的禽傳染性支氣管炎病毒抗原。這些方法基于抗原-抗體反應(yīng)。免疫組織化學(xué)法已成功用于定位組織樣本中的禽傳染性支氣管炎病毒抗原。間接免疫熒光檢測(cè)是最常用的熒光技術(shù)。

3.4 分子生物診斷方法鑒于其靈敏度提高和報(bào)告時(shí)間縮短，分子診斷分析，如RT-PCR、實(shí)時(shí) PCR、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）和基因組測(cè)序，幾乎取代了傳統(tǒng)的血清學(xué)和禽傳染性支氣管炎病毒診斷的病毒培養(yǎng)方法。

3.5 電子顯微鏡觀察法電子顯微鏡根據(jù)冠狀病毒的形態(tài)特征提供了一種直接檢測(cè)和鑒定生物樣本中雞傳染性支氣管炎病毒的方法。透射電子顯微鏡（TEM）也是一種有用的工具，它可以使受感染細(xì)胞中的病毒樣顆粒可視化。然而，這種方法通常用于了解病毒附著和進(jìn)入細(xì)胞，但不是特定的診斷檢測(cè)。

4 防控建議

由于目前禽傳染性支氣管炎在我國(guó)大部分地區(qū)的雞群中均有流行的情況，一定要根據(jù)當(dāng)?shù)厍輦魅拘灾夤苎椎牧餍星闆r進(jìn)行針對(duì)性的防控，其中疫苗接種是禽傳染性支氣管炎防控方面最有效也是最重要的手段，因此應(yīng)根據(jù)禽傳染性支氣管炎在當(dāng)?shù)氐牧餍星闆r制定合理的疫苗接種計(jì)劃，防止雞群暴發(fā)大規(guī)模的禽傳染性支氣管炎。此外，對(duì)于引進(jìn)的雞苗和種蛋等一定要經(jīng)過(guò)檢疫，無(wú)禽傳染性支氣管炎的雞方可進(jìn)行飼養(yǎng)，防止引入帶毒雞造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在雞群接種疫苗后，要定期檢測(cè)雞群疫苗接種效果，確保疫苗接種的有效性。在日常養(yǎng)殖過(guò)程中，要提高對(duì)雞群的監(jiān)管意識(shí)，對(duì)疑似患禽傳染性支氣管炎的病雞或已出現(xiàn)臨床癥狀的雞及時(shí)淘汰處理，同群雞進(jìn)行針對(duì)性的預(yù)防性治療，避免雞群由于禽傳染性支氣管炎病毒感染造成的損失。在診斷禽傳染性支氣管炎時(shí)應(yīng)注意與其他有相似癥狀的疾病，如禽流感、傳染性鼻炎等進(jìn)行區(qū)分，最終診斷結(jié)果也應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確定后方可確診處理。

5 結(jié)語(yǔ)

自從二十世紀(jì)30 年代首次發(fā)現(xiàn)禽傳染性支氣管炎病毒以來(lái)，越來(lái)越多的新的禽傳染性支氣管炎病毒血清型被發(fā)現(xiàn)。缺乏有效的診斷方法和疫苗可以輕松應(yīng)對(duì)多種禽傳染性支氣管炎病毒血清型造成的威脅，部分原因歸咎于禽傳染性支氣管炎疾病造成的嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。病毒中和和病毒分離等常規(guī)檢測(cè)方法已被廣泛使用，但由于靈敏度和特異性以及時(shí)效性，這些檢測(cè)方法已逐漸被新的靈敏和特異檢測(cè)方法所取代，例如 RT-PCR、RFLP 和qRT-PCR，能夠快速進(jìn)行基因分型和鑒定新的禽傳染性支氣管炎病毒毒株。相信在未來(lái)，會(huì)有更加高效和準(zhǔn)確的禽傳染性支氣管炎病毒檢測(cè)方法被研制出來(lái)。