復方四黃復合水凝膠的基質和載藥量研究

袁一鳴　辛曉芳　鐘希文　許廣全　李四維　林曉燕

【摘要】? 目的? 探討醫院外用制劑復方四黃外洗液的劑型改造，探索復方中藥復合水凝膠合適的基質和載藥量。方法? 通過卡波姆U21、海藻酸鈉、黃原膠、水溶性殼聚糖及它們復合的凝膠為基質，以感官指標、穩定性及抑菌效果考察，篩選出與復方四黃液結合最佳的空白凝膠基質，以其對金葡菌的抑菌試驗確定最佳載藥量。結果? 卡波姆U21/海藻酸鈉復合凝膠為復方四黃外洗液合適凝膠基質，最佳載藥量為1.5倍復方四黃外洗液。結論? 該基質與復方四黃液穩定結合，為復方四黃凝膠劑的成型工藝研究提供依據。

【關鍵詞】? 復方四黃復合水凝膠;卡波姆U21;海藻酸鈉水復合凝膠

中圖分類號? R286? ? 文獻標識碼? A? ? 文章編號? 1671-0223（2022）01-005-03

復方四黃外洗液為醫院的中藥洗劑，是以《肘后備急方》中黃連解毒湯[1]為基礎加減而成，即大黃、黃連、黃柏、黃芩、連翹及虎杖六味中藥按照一定工藝制備成的復方合劑。它具有清熱解毒，去腐生肌，消腫止痛的功效，對外科或感染等效果顯著[2]。該劑型為外洗劑，存在局限性，而水凝膠劑具有穩定性良好、不良反應少及不污染衣著等優點[3-5]，且凝膠劑基質用量小而載藥量大，藥物易于溶出，對皮膚刺激性小，患者的順應度更高[6]。由于水凝膠劑有著諸多優勢，且對工藝條件要求不高，又能產生較好的經濟效益，較為適合中藥復方制劑的生產現狀[7]。

1? 材料與儀器

1.1? 材料

連翹、黃芩、虎杖、大黃、黃連、黃柏，均購自大參林醫藥集團股份有限公司;卡波姆U21（安徽蕪湖奧斯通生物技術有限公司）;海藻酸鈉（福晨化學試劑有限公司）;透明黃原膠（山東優索化工科技有限公司）;水溶性殼聚糖（南京都萊生物技術有限公司）;10%氫氧化鈉標準溶液（以達科技有限公司）;雙蒸水。

1.2? 儀器

Agilent Technologies 1260 infinity 高效液相色譜儀;JJ200 型電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠 d=0.01g）;BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司 d=0.0001g）;KQ5200E醫用超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;東方-A型直熱式電熱恒溫干燥箱（廣州東方電熱干燥設備廠）;HH-S4 數顯恒溫水浴鍋（金壇市醫療儀器廠）。

1.3? 菌種

金黃色葡萄球菌ATCC29213，由中山市中醫院檢驗科提供。

2? 凝膠基質的篩選

2.1? 凝膠的基質考察

查閱相關文獻及預實驗結果，決定單方凝膠基質選用卡波姆、海藻酸鈉、黃原膠及水溶性殼聚糖。復合凝膠基質則由以上凝膠基質材料兩兩組合成，根據各基質的成型情況、質感、流動性及黏稠度等綜合感官指標，進行凝膠基質的初步篩選。

2.1.1? 空白凝膠制備方法? 單方凝膠制備方法為分別稱取各凝膠基質材料一定量，置于杯中，加入蒸餾水攪拌、溶脹、排氣泡。其中卡波姆在溶脹后用NaOH溶液調節pH至中性。復方凝膠的制備則是在單方凝膠的基礎上再將另一種凝膠基質材料添加到單凝膠中，均勻攪勻，排氣泡。

2.1.2? 空白凝膠基質感官指標? 將卡波姆配成0.3%、1.0%、1.5%的凝膠溶液;黃原膠配成0.5%、1.0%、1.5%的凝膠溶液;殼聚糖配成3.0%、5.0%、7.0%的凝膠溶液;海藻酸鈉配成3.0%、6.0%、9.0%凝膠溶液。再根據單方凝膠基質的成型狀態及相關預實驗結果，初步確定復合凝膠基質的配比﹕卡波姆U21/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）、卡波姆U21/黃原膠（1.0%﹕1.0%）、卡波姆U21/殼聚糖（3.0%﹕3.0%）、海藻酸鈉/黃原膠（6.0%﹕1.0%）、海藻酸鈉/殼聚糖（6.0%﹕3.0%）、黃原膠/殼聚糖（1.0%﹕1.0%）。感官指標結果見表1。

由表1結果可知，7.0%水溶性殼聚糖、1.0%卡波姆U21、卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）及卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）4組空白凝膠基質的綜合感官指標相對理想，均可作為復方四黃外洗液的凝膠載體。各基質材料中，水溶性殼聚糖的相容性則最差、用量較大、成本高。故只對后三者進行下一步考察篩選。

2.2? 穩定性考察

2.2.1? 載藥凝膠劑制備方法? 根據表1感官指標結果，選用單方卡波姆1.0%、卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕ 6.0%）及卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）3組的空白凝膠基質，與復方四黃提取液混合，攪拌均勻，調節pH至7.0左右，靜置排氣泡，制備成凝膠基質與藥液比例分別為1﹕1，1﹕1/2，1﹕1/3的載藥凝膠劑。

2.2.2? 穩定性考察方法? 將上述方法制備的所有載藥凝膠劑同時放置冰箱冷藏（0～5℃）及每天40℃水浴加熱3小時條件下交替重復進行，以載藥凝膠劑最終發霉變質的時間作為指標進行考察。結果見表2。

同時對三組載藥凝膠劑進行離心試驗，對比三組凝膠基質與藥液結合后的載藥凝膠劑的穩定性。參照離心公式T1=T2（4π2R）n2/g，R為離心機的半徑（米），n為轉速時間（r/s），T1為保存時間（天），T2為轉速時間，保留時間為15天，依次進行離心（4000r/min）30min，1h。凝膠劑穩定，無分層、沉淀現象。

2.2.3? 穩定性結果? 結果可知，三組載藥凝膠劑的離心試驗結果均穩定，沒有分層或沉淀現象出現，證明載藥凝膠劑成型后較為穩定。由表2可知，與單方卡波姆U21空白凝膠相比，復合載藥凝膠劑的長久穩定性更強。復合載藥更均勻凝膠更細膩，綜合各項指標，決定采用卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）、卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）復合凝膠劑進行下一步考察。

2.3? 不同混合基質抑菌實驗考察

選用卡波姆/黃原膠（1.0%﹕1.0%）及卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕6.0%）兩組復合空白凝膠，與復方四黃提取液結合，制備成凝膠基質與藥液比例為1﹕1的載藥凝膠劑，制備方法同“2.2.1載藥凝膠劑制備方法”。選用中山市中醫院標準金黃色葡萄球菌菌株ATCC29213進行抑菌實驗，同時以兩組載藥凝膠劑各自的空白凝膠作為空白組。抑菌實驗方法為紙片擴散法，以二者抑菌效果的優異作為判斷指標，進行下一步篩選。

2.3.1? 抑菌實驗操作方法? 在無菌環境下，將少量新培養的金葡菌至稀釋液中，稀釋并校正濁度至0.5麥氏標準濃度，菌液的濃度約為1.5×108CFU/ml。用棉試子蘸取菌液后涂布整個培養基表面，反復3次后，取出已浸泡24小時的復方四黃液藥敏紙片。烘干，貼于瓊脂平板表面，置35℃培養箱內培養，24h后用游標卡尺測量抑菌圈的直徑。

2.3.2? 抑菌實驗結果? 實驗結果表明，卡波姆/海藻酸鈉載藥凝膠劑組的抑菌效果（抑菌圈直徑9.5mm）強于卡波姆/黃原膠載藥凝膠劑組（抑菌圈直徑7.0mm），二者各自的空白凝膠組均無抑菌效果。最終決定選擇卡波姆/海藻酸鈉復合空白凝膠作為復方四黃外洗液的凝膠基質，進行下一步考察。

3? 載藥量考察

凝膠劑本身含有水分，會使主藥液稀釋。根據不同載藥量的復方四黃復合水凝膠的抑菌效果與復方四黃外洗液的抑菌效果相對比，以及凝膠劑的感觀與穩定性，確定復方四黃復合水凝膠的最佳載藥量。

3.1? 抑菌實驗

設立1.5倍、1.75倍及2倍載藥量凝膠劑組和復方四黃外洗液組進行對比，載藥凝膠劑制備方法同“2.2.1”項，抑菌實驗操作方法同“2.3.1”項。以金黃色葡萄球菌作為考察對象，進行抑菌實驗考察。

3.2? 載藥凝膠離心試驗

對1.5倍、1.75倍及2倍載藥量凝膠劑組參照2.2.2項進行離心試驗，依次進行離心（4000r/min）30min，1h。

3.3? 結果

三組載藥凝膠劑離心后穩定，無分層、沉淀現象。而且抑菌效果相近，均稍弱于復方四黃外洗液組，在流動性及黏稠度方面，1.5倍載藥量的凝膠劑最佳。綜合考慮1.5倍載藥量的復方四黃復合水凝膠為最佳載藥量。見表3。

4? 討論

本實驗采用卡波姆U21作為凝膠載體，卡波姆U21黏度更強，而水溶性殼聚糖的相容性最差，其與海藻酸鈉無法完好相溶。觀察所得，基質電荷和特性有關。海藻酸鈉含有負電荷天然多糖，黃原膠帶負電荷微生物多糖，他們與聚陽離子的水溶性殼聚糖生成難溶化合物。但卡波姆為聚陰離子化合物，與水溶性殼聚糖能混合，但凝膠不是很細膩。

通過查閱親水性凝膠劑的相關文獻及預實驗，初步確定了凝膠基質的材料及大概的用量范圍，再通過凝膠感官指標的綜合判斷、制備成本、與主藥結合后的穩定性及抑菌考察等多方面的考慮，最終確定了復合凝膠卡波姆/海藻酸鈉（0.3%﹕0.6%）作為主藥的基質[8-10]。該復合凝膠與主藥結合后質感上最為均勻細膩、富有光澤、穩定性好，故選擇其作為復方四黃外洗液的凝膠基質。

5? 參考文獻

[1] 梅全喜.黃連解毒湯源出《肘后備急方》考辨[J].時珍國醫國藥，2013，24（11）：2730.

[2] 袁一鳴，林愛華，梅全喜.復方四黃外洗液指紋圖譜研究[J].時珍國醫國藥，2017，28（10）：2417-2419.

[3] KuenYL，David JM.Hydrogels for tissue engineering[J].Chemical Reviews， 2001：1869.

[4] 王曙東，劉文雅.凝膠劑的研究進展及應用概況[J].中國藥業，2010，19（21）：1-4.

[5] 楊凡.野西瓜凝膠劑的研究[D].中山：廣東藥科大學，2019.

[6] 劉安廷，張合城，羅玉萍，等.雙黃凝膠劑的制備及應用研究[J].中國繼續醫學教育，2019，11（28）：144-146.

[7] 方和桂.適用于中藥外用的劑型——凝膠劑[J].中國藥業， 2002（8）：25-26.

[8] Constain H Salamanca，Alvaro Barrera-Ocampo，Juan C Lasso，et al.Franz diffusion cell approach for pre-formulation characterisation of ketoprofen semi-solidDosage forms[J].Inventi Impact-Pharmaceutical Process Development，2019：2019

[9] 廖龑，蔣德錫，王沼丹，等.漢方抗痘凝膠制備工藝研究[J].中國實驗方劑學雜志，2009，15（5）：32-34.

[10] 袁一鳴.復方四黃外洗液提取工藝優化和質量標準研究[D].中山：廣州中醫藥大學，2017.

[2021-11-25收稿]