病理抗酸染色要避免其它分枝桿菌干擾

陳洪勛 劉衛艷 劉偉 謝立 任興昌

摘要： 目的 ?如何避免病理抗酸染色中其它分枝桿菌污染。方法 ?收集操作過程中涉及的水龍頭、水池底部及攤片盛水容器底部的粘性物質涂片進行抗酸染色，觀察有無抗酸染色陽性菌。結果 攤片盛水容器底部、清洗水池底部、技術室水龍頭涂抹物，尤其是粘膩物均有較多抗酸染色陽性桿菌。結論 ?進行病理抗酸染色時所使用的儀器注意清潔，避免其它分枝桿菌的干擾。

關鍵詞：抗酸染色;陽性桿菌

【中圖分類號】R445 【文獻標識碼】B 【文章編號】1673-9026（2022）01--01

結核桿菌的細菌學檢查是確定結核病診斷和治療方案的重要依據。目前雖然有多種方法用于檢測結核桿菌[1-2]，但對于病理醫師來說，抗酸染色法仍然是結核桿菌檢測的常用方法，其作為一種經典方法，成本低廉，操作簡單，一直被各大醫院廣泛使用。筆者在多年的日常工作中發現病理標本石蠟組織切片抗酸染色容易被自來水中的分支桿菌污染，造成結果假陽性。下面圍繞這個問題簡要闡述下本科室在日常工作中如何避免常規抗酸染色中假陽性的產生。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料 非結核病理樣本，每例3um厚切片撈于普通載玻片上，常規脫蠟后備用;另用棉簽蘸取病理攤片儀盛水容器底部、自來水龍頭、清洗水池邊緣，尤其是粘膩物質涂于載玻片上烘片烤干備用。

1.2 ?方法

采用購自貝索公司（BASO）的抗酸染色試劑盒，具體操作步驟參考試劑盒說明書進行。

抗酸染色完成后鏡下觀察染色結果。

2 ? 結果

油鏡下觀察發現非結核病理切片組織周邊有可疑抗酸陽性桿菌，攤片盛水容器底部、清洗水池底部、技術室水龍頭涂抹物，尤其是粘膩物均有較多抗酸染色陽性桿菌，菌體多帶有節點，也有不帶節點呈菌體均一的。

3 ? 討論

目前已發現分枝桿菌屬有100多種分枝桿菌，國際上通常將分枝桿菌分為遲緩生長（菌落形成需7天或7天以上，慢生型分枝桿菌）和迅速生長（7天之內菌落形成，快生型分枝桿菌）兩大類[3]。生長緩慢的結核分枝桿菌、麻風分枝桿菌（麻風菌）是典型的致病性分枝桿菌。除結核分枝桿菌復合群（結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、田鼠分枝桿菌）和麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌，統稱為非結核分枝桿菌。非結核分枝桿菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是廣泛存在于自然界水、土壤和空氣塵埃等的環境微生物，故亦稱環境分枝桿菌（environmental mycobacterimn，EM）[4-5]。一些NTM也已成為條件致病菌，通過接觸污染的醫用物品、器械，也有成為醫院感染發生的重要原因，而分枝桿菌的耐氯性更強[4]，水中的NTM是污染的主要來源。越來越多的研究發現NTM存在于公共飲水系統和醫院供水系統中，包括供水系統水龍頭。

關于分枝桿菌，病理醫生知道結核、麻風、非結核分枝桿菌，也常常因為考慮有相關肉芽腫病變而進行抗酸染色并在油鏡下進行仔細查找。但是，知道自來水中有分枝桿菌的并不多，自來水中不但有分枝桿菌，而且還能耐受含氯消毒劑的作用，在溫暖季節繁殖更加明顯，醫生在常規抗酸染色切片中查找陽性桿菌工作時，有時發現組織內有或者沒有陽性桿菌，組織周邊都會出現陽性桿菌，這種假陽性的發生很容易影響醫生的正確診斷，針對此情況我們對工作中的每個環節反復推敲，最終發現病理組織切刀片攤片所用的自來水垢可能是造成假陽性出現的原因。病理切片撈片時所用的盛水器皿由于沒有每天清洗導致器皿底部自來水中的分枝桿菌得以繁殖生長，從而污染了正常的組織切片，產生假陽性結果。 攤片用的盛水器皿中出現的粘膩物進行涂片，其中抗酸染色陽性菌尤其多，還可以作為抗酸染色的陽性對照。因此，當實驗室進行抗酸染色或分枝桿菌的相關檢測，要避免供水系統的污染，定期清洗水龍頭，要將用具清洗干凈，不用時要保持干燥。組織蠟塊切片展片時盡量使用單獨玻璃容器盛裝蒸餾水進行展片;如需使用自來水，尤其是在染色前、染色中要注意避免自來水龍頭的污染，保證染色結果的準確性。

參考文獻：

[1]葉豐，陳昱，何度，等.應用熒光定量聚合酶鏈反應對疑似結核組織的DNA分析[J].中華病理學雜志，2013，42（8）：534-537.

[2] 尹林峰.結核分枝桿菌實驗室檢測方法的臨床研究[J].醫學信息，2015，28（27）：384.

[3]邢燕.環境中分枝桿菌的醫學意義及其鑒定[J].中國麻風皮膚病雜志，2009，25（2）：114-116.

[4] 王桂榮，黃海榮.非結核分枝桿菌的分布和生長影響因素及其傳播途徑研究[J].中國防癆雜志，2016，38（10）：869-873.

[5] Falkinhan JO 3rd. Enviromental sources of nontuberculous mycobacteria[J].Clin Chest Med，2015，36（1）：35-41.

作者簡介：陳洪勛，19790328、女、重慶市開縣、杭州市中醫院，主管技師，碩士研究生，研究方向：微生物學