鹽沙苑子標準湯劑制備和質量標準研究

袁蒙蒙，許懷禮，徐頂巧，唐志書，劉乃堯，許洪波*

(1.陜西中醫藥大學/陜西省中藥資源產業化省部共建協同創新中心/陜西省創新藥物研究中心，陜西 咸陽712083；2.陜西中醫藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046)

沙苑子(Astragali complanati semen)為豆科植物扁莖黃芪AstragaluscomplanatusR.Br.的干燥成熟種子[1]，具有補腎壯陽、固精縮尿、養肝明目的功效，始載于《神農本草經》，其藥用歷史悠久[2]。現代藥理研究表明，沙苑子具有養肝明目[3-4]、增強免疫[5]、補腎縮尿[6]、抗癌[7]等功效，可用于治療肝腎虧虛[8]、白濁帶下、頭暈目眩，也可利尿澀精[9]、抗氧化[10-11]。沙苑子中主要包含黃酮、皂苷及多糖成分。其中沙苑子總黃酮具有降壓降脂[12-13]、保肝[14-15]、抗氧化[16]及抗癌[17-18]等藥理作用。沙苑子為臨床常用藥材，毒性極低，其毒性在100 g/kg以上，是具有廣泛藥效且無毒的安全藥物[19]。

臨床處方調查發現，鹽沙苑子使用居多，沙苑子藥性甘、溫，歸肝腎經，鹽制可引其入腎，能更好地發揮補腎縮尿的作用。中藥飲片標準湯劑被用來保障臨床治療時的用藥準確性及劑量一致性，使得臨床治療時的用藥更加規范和標準[20]。本研究依照《中藥配方顆粒質量控制與標準制定技術要求》中標準湯劑制備的方法，選用3個產區15批沙苑子飲片制備標準湯劑，以沙苑子苷為指標成分，從指標成分定量和整體定性方面評價鹽沙苑子標準湯劑質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20XR型高效液相色譜儀和LC-20型在線超高效液相色譜儀(日本島津公司)；KQ-300DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FTS-10A型多功能煎藥鍋(潮州市一壺百飲電器實業有限公司)；CPA2250型電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司，精密度0.01 mg)；EYELA N-1100型旋轉蒸發儀(東京理化器械株式會社)。

1.2 試藥

沙苑子苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111803-201704，含量：99.1%)；鹽沙苑子對照藥材均從正規檢查合格的藥廠購進，藥材信息見表1；乙腈(色譜純，霍尼韋爾公司)；純化水；其余試劑均為分析純。

表1 鹽沙苑子藥材信息

2 方法與結果

2.1 鹽沙苑子飲片檢查

按照《中國藥典》2020版鹽沙苑子飲片的檢查規定，測得15批鹽沙苑子含水量為6.72%～9.91%，灰分量為1.20%～4.94%，酸不溶灰分為0.01%～0.04%，結果見表2。以上檢查均符合2020版《中國藥典》規定，飲片符合標準。

表2 15批鹽沙苑子的質量檢查

2.2 鹽沙苑子飲片中沙苑子苷的含量測定

按照2020年版《中國藥典》沙苑子含量測定方法進行檢測，沙苑子苷質量分數0.10%～0.18%。結果表明，15批沙苑子飲片均符合《中國藥典》對沙苑子的含量測定要求(含沙苑子苷不得少于0.10%)。

2.3 鹽沙苑子標準湯劑的制備

取干燥鹽沙苑子飲片100 g，以沒過飲片的水量浸泡30 min后，用8倍量的水，煎煮30 min，趁熱用7號藥典篩過濾，保留濾液，再加6倍量的水，繼續煎煮30 min，同上方法過濾，合并濾液，濃縮至500 mL濃縮液，即得。

2.4 標準湯劑中沙苑子苷的含量測定

2.4.1 HPLC色譜條件 色譜柱：Agilent 5 TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(21∶79)，等度洗脫30 min，波長：266 nm，柱溫：30 ℃，進樣量：5 μL，色譜見圖1。

A：對照品；B：鹽沙苑子標準湯劑圖1 鹽沙苑子飲片標準湯劑HPLC譜圖

2.4.2 供試品溶液的制備 取“2.3”項下的鹽沙苑子標準湯劑于10 mL離心管中，5 000 r/min離心5 min，過0.45 μm濾膜，即得。

2.4.3 對照品溶液制備 精密稱量9.98 mg沙苑子苷對照品，加60%乙醇定容至25 mL容量瓶中，即得濃度為399.2 μg/mL的沙苑子苷儲備液。

2.4.4 線性關系考察 取“2.4.3”項下沙苑子苷對照品溶液，分別進樣0.1、0.2、0.5、1、2、3 μL，按“2.4.1”項下方法測定，以對照品含量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。沙苑子苷線性方程為Y=2 472 045.66X-9 655.01，R2=0.999，線性范圍0.0 399～1.197 6 mg/mL。

2.4.5 精密度試驗 取供試品溶液(S4)按“2.4.1”項下方法進樣6次，相對峰面積RSD=0.20%，表明儀器精密度良好。

2.4.6 穩定性試驗 取供試品溶液(S4)放置0、2、4、8、12、24 h后按“2.4.1”項下方法測定，24 h內相對峰面積RSD=0.11%，表明此樣品在24 h內穩定。

2.4.7 重復性試驗 按“2.4.2”項下方法平行制備6份供試品溶液(S4)，按“2.4.1”項下方法測定，相對峰面積RSD=0.71%，表明實驗方法重復性良好。

2.4.8 加樣回收試驗 精密量取已知沙苑子苷含量的供試品溶液(S4)6份，加入沙苑子苷對照品適量，混勻按照供試品制備方法制備，記錄峰面積，計算其平均回收率為102.8%，RSD=0.93%，表明該方法可用于沙苑子苷的含量測定。

2.4.9 樣品測定 按“2.4.1”項下條件對15批鹽沙苑子標準湯劑進行含量測定，記錄沙苑子苷的峰面積，計算沙苑子苷含量。

2.5 過程穩定性評價指標參數的設定

通過“2.3”項下方法制備標準湯劑，出膏率量取標準湯劑10 mL，干燥，稱定浸膏質量，計算出膏率，見表3。結果表明，15批樣品的出膏率范圍為10.52%～17.70%，平均值為15.47%。

轉移率=m/M×100%，其中，m表示16 g藥材按照標準湯劑方法提取的沙苑子苷的量(mg)，M表示1 g藥材按照藥典方法提取出的沙苑子苷的量(mg)，結果見表3，轉移率范圍為42.94%～81.22%，平均值為60.10%。

表3 鹽沙苑子標準湯劑含量測定

2.6 UPLC指紋圖譜分析

2.6.1 UPLC色譜條件 Thermo Fisher Scientific Accucore C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，2.5 μm)流動相為0.1%磷酸水(A)-乙腈(B)；柱溫為30 ℃；流速為0.4 mL/min；進樣量為5 μL。

A：對照品；B：鹽沙苑子標準湯劑。圖2 鹽沙苑子標準湯劑指紋圖譜

2.6.2 精密度試驗 取供試樣品(S2)按“2.6.1”項下方法進樣6次，用相似度評價軟件計算色譜圖的相似度。相對峰面積RSD=0.81%，相似度均大于0.9，表明儀器精密度良好。

2.6.3 重復性試驗 取同一標準湯劑(S2)按供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，按“2.6.1”項下方法測定，相對峰面積RSD=0.10%，相似度均大于0.9，表明該方法重現性較好。

2.6.4 穩定性試驗 取供試品溶液(S2)放置0、2、4、8、12、24 h后按“2.6.1”項下方法測定，相對峰面積RSD=1.71%，相似度均大于0.9，表明樣品24 h內穩定。

2.6.5 UPLC指紋圖譜采集 按“2.6.1”項下方法，采集15批鹽沙苑子標準湯劑UPLC指紋圖譜，利用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2012A)”進行色譜峰匹配，計算相似度，結果表明，15批標準湯劑與對照譜圖的相似度均大于0.98，符合中藥指紋圖譜要求。

圖3 15批鹽沙苑子飲片標準湯劑指紋圖譜

2.7 質譜指認

2.7.1 質譜條件 采用SCIEX Triple TOFTM5600+質譜儀，DuoSprayTM離子源，離子化模式為正、負離子，離子源溫度500 ℃，脫溶劑氣體為高純度氮氣，掃描范圍m/z為100～2 000。

2.7.2 色譜峰的指認 取供試品溶液5 μL注入SCIEX Triple TOFTM5600+/MS系統，按“2.6.1”項下條件運行，記錄數據，采用Analyst TF 1.7.1軟件對總離子流圖進行處理和分析，比對精確相對分子質量，保留時間，特征碎片峰，已建立的數據庫和文獻[21-23]，推測共有峰的化合物結構。結果見表5，質譜總離子流見圖4，化合物結構見圖5。

表4 15批鹽沙苑子飲片標準湯劑指紋圖譜相似度

A：正離子模式；B：負離子模式圖4 沙苑子標準湯劑的質譜總離子流

圖5 鹽沙苑子標準湯劑指紋圖譜中指認的化學結構

表5 正、負離子模式下鹽沙苑子標準湯劑共有指紋峰的鑒定

3 討論

沙苑子中含有黃酮、三萜皂苷類化合物，黃酮類化合物是其主要的有效成分，沙苑子苷是主要的生物活性成分之一，具有保護肝細胞、抑制肝纖維化的作用[24]，故本試驗選取沙苑子苷為指標性成分，結果表明，不同批次和不同產地的沙苑子苷含量均符合要求，標準湯劑中沙苑子苷轉移率為42.94%～81.22%，平均值為60.10%，在266 nm下的質譜結果顯示，13個成分中以黃酮和皂苷為主，表明該波長下的圖譜科學可靠，能反映沙苑子標準湯劑的主要成分。

本研究篩選了沙苑子3個主產地(陜西、河北、四川)的樣品，每個產地各5批，樣品具有代表性。試驗中采用標準化工藝制備鹽沙苑子標準湯劑，標準湯劑的質量控制主要體現在：①藥材選擇均來自沙苑子的主產區，實驗前對藥材進行了檢測，符合藥典規定；②制備工藝符合相關技術要求中標準湯劑制備的方法；③采用指紋圖譜和沙苑子苷含量測定相結合的方式評價標準湯劑的質量，并結合質譜指認，推斷其共有峰，從化學輪廓和指標成分定量標定了鹽沙苑子標準湯劑的特征，為鹽沙苑子標準湯劑的制備和質量控制提供參考。