基于中藥質(zhì)量常數(shù)的苦參飲片等級(jí)評(píng)價(jià)

孫福仁，張睿智，劉 沙，魯倩倩，韓宏建，劉 威，李 哲，李軍山,2

(1.神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司,河北石家莊 051430;2.楚雄神威施普瑞藥物研究有限公司，云南楚雄 675000)

苦參，別名苦骨、地槐、水槐，為多年生草本或灌木，在中國(guó)大多數(shù)地區(qū)均有分布，常生長(zhǎng)在向陽山坡、山麓、郊野、路邊等地的草叢中，春、秋二季采收，除去根頭和小支根，洗凈，干燥，或趁鮮切片，干燥。苦參為中藥常用的清熱燥濕藥，《本草綱目》中記載：“主治熱病發(fā)狂，傷寒結(jié)胸，毒熱足腫大，遍身風(fēng)疹”，現(xiàn)載于2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)[1]。臨床上用于治療皮膚病、肝炎、婦女濕熱下注所致的帶下色黃、濕熱痢疾等癥[2]。現(xiàn)代藥理作用顯示，苦參具有顯著的中樞鎮(zhèn)靜作用，還可以抗心率失常、平喘、抗炎、抗腫瘤等[3]。

苦參飲片傳統(tǒng)分級(jí)方法一般以長(zhǎng)度、直徑、規(guī)定重量中的個(gè)數(shù)、色澤、純凈度等形態(tài)和質(zhì)地作為依據(jù)。主要按照外形分類，以片大為優(yōu)，其次是顏色、質(zhì)地、雜質(zhì)、含量等[4]。王惠娟等[5]通過TLC法與HPLC法建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，用于苦參飲片的質(zhì)量控制。傳統(tǒng)的分級(jí)方法側(cè)重飲片性狀特征，而質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)則以飲片的含量高低判斷優(yōu)劣，故亟需一種將外在性狀與指標(biāo)成分含量結(jié)合的評(píng)價(jià)方法。中藥飲片質(zhì)量常數(shù)法是一種全新的分級(jí)方法，通過公式將性狀、含量參數(shù)量化，對(duì)飲片進(jìn)行等級(jí)劃分，目前，已成功應(yīng)用于首烏藤、川芎等藥材[6-7]，但尚未有以苦參飲片為研究對(duì)象的報(bào)道。本文引入中藥質(zhì)量常數(shù)法，對(duì)不同產(chǎn)地苦參飲片的外在性狀、內(nèi)在指標(biāo)成分進(jìn)行測(cè)定，通過數(shù)據(jù)處理，對(duì)苦參飲片進(jìn)行了分類，為苦參飲片品質(zhì)分級(jí)提供了一種新的評(píng)價(jià)方式。

1 儀器與材料

1.1 儀 器

CPA225D 電子分析天平(德國(guó)賽多利斯股份公司提供)；KH-7200E超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲波儀器有限公司提供)；Agilent 1260液相色譜儀(安捷倫科技有限公司提供)；InertSustain NH2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm，日本島津公司提供)。

1.2 試 劑

苦參堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110805-201007，純度：98.7%)；氧化苦參堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110780-201909，純度：92.9%)；中性氧化鋁(100～200目(75～147 μm，下同)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司提供)；甲醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司提供，色譜純)；乙腈(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司提供，色譜純)；其余試劑均為分析純；水為純化水。

1.3 原材料

15批苦參飲片分別采購(gòu)于山西、內(nèi)蒙古、甘肅、吉林、河南5個(gè)不同產(chǎn)地，經(jīng)原河北省藥品檢驗(yàn)所孫寶惠老師鑒定本品為豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根，具體來源情況見表1。

表1 15批苦參飲片來源及批號(hào)Tab.1 Sources and numbers of 15 batches of Sophora flavescens decoction pieces

2 評(píng)價(jià)方法

2.1 中藥質(zhì)量常數(shù)及百分質(zhì)量常數(shù)的計(jì)算

中藥質(zhì)量常數(shù)(A)被定義為單位藥材中指標(biāo)成分質(zhì)量與其飲片厚度平方之比，即A=M/H2[6]?？鄥樘偾o類藥材，形狀為短圓柱形，其公式可按圓柱形模型進(jìn)行簡(jiǎn)化：

A=M/H2=(ρVc)/H2=(ρSHc)/H2=

(ρπR2c)/H，

(1)

飲片的質(zhì)量m與半徑R呈正比，且更易于測(cè)定，故將式(1)再次簡(jiǎn)化為

A=(mc)/H2，

(2)

式(1)和式(2)中：M為指標(biāo)成分質(zhì)量；m為單個(gè)飲片的平均質(zhì)量；c為指標(biāo)成分的含量；ρ為飲片密度；R為飲片半徑；S為飲片橫截面；H為單個(gè)飲片平均厚度。該常數(shù)包含了飲片的大小、厚度和指標(biāo)成分含量3個(gè)關(guān)鍵因素，依據(jù)質(zhì)量常數(shù)進(jìn)行分級(jí)比較客觀科學(xué)。

將實(shí)驗(yàn)樣品中質(zhì)量常數(shù)的最大值記為100%，其他飲片質(zhì)量常數(shù)與最大值的百分比值則為百分質(zhì)量常數(shù)，即A%=Ai/Amax×100%(Ai為某批樣品的質(zhì)量常數(shù)，Amax為當(dāng)前樣品中的最大質(zhì)量常數(shù))[6]。規(guī)定A%≥80%為一等飲片；50%≤A%<80%為二等飲片；剩余的均為三等飲片[7]。

2.2 形態(tài)參數(shù)的測(cè)定

15批苦參飲片均為圓柱形片，見圖1，按式(2)要求，測(cè)定飲片的質(zhì)量和厚度。為減少實(shí)驗(yàn)誤差，使結(jié)果具有代表性，每批樣品隨機(jī)選取3組，每組隨機(jī)選擇50個(gè)飲片作為測(cè)量對(duì)象，記錄其厚度和質(zhì)量，計(jì)算每批次單個(gè)飲片的平均厚度H和平均質(zhì)量m。

圖1 15批苦參飲片的性狀特征圖Fig.1 Characteristic maps of 15 batches of Sophora flavescens decoction pieces

2.3 指標(biāo)成分含量的測(cè)定

1)色譜條件

色譜柱為InertSustain NH2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)；以乙腈(A)-無水乙醇(B)-3%磷酸溶液(C)為流動(dòng)相(φ(A)∶φ(B)∶φ(C)=80∶10∶10)等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL/min，理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000?？鄥嬈纳V圖如圖2所示。

圖2 苦參飲片的色譜圖Fig.2 Chromatograms of Sophora flavecens decoction pieces

2) 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定苦參堿、氧化苦參堿對(duì)照品適量，加乙腈-無水乙醇(80∶20，體積比，下同)混合溶液分別制成每1 mL含苦參堿49.5 mg、氧化苦參堿0.14 mg的對(duì)照品溶液。

3) 供試品溶液的制備

取苦參飲片粉末，粉碎后過3號(hào)篩，精密稱定0.3 g，轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液0.5 mL，再次加入三氯甲烷20 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率為250 W，頻率為40 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，內(nèi)徑1 cm)上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3，體積比，下同)混合溶液各20 mL洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)訜o水乙醇適量溶解，轉(zhuǎn)移至15 mL容量瓶中，加無水甲醇至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

4) 樣品測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，按1)項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算苦參堿、氧化苦參堿總和，色譜圖見圖2。

3 結(jié)果與分析

1) 外在形態(tài)參數(shù)測(cè)定

15批苦參飲片平均質(zhì)量為0.66～1.86 g，質(zhì)量最大者約為最小者的3.0倍。飲片的平均厚度為2.49～4.72 mm，ks-13飲片平均厚度是ks-7飲片的2倍左右，已超出“厚片”的規(guī)定范圍，見表2。

2) 內(nèi)在指標(biāo)成分含量

按2.3項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定15批飲片中苦參堿及氧化苦參堿的含量，結(jié)果表明，15批飲片均符合2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)中苦參項(xiàng)下的含量要求(即苦參堿及氧化苦參堿總和不得少于1.0%)，見表2。

表2 苦參飲片性狀參數(shù)、質(zhì)量常數(shù)、百分質(zhì)量常數(shù)的測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of character parameters, quality constants and percentage quality constants of Sophora flavescens decoction pieces

3) 苦參飲片等級(jí)劃分

按式(2)計(jì)算15批飲片的質(zhì)量常數(shù)及百分質(zhì)量常數(shù)，見表2。為了更加直觀地表示出15批苦參飲片的等級(jí)差異，將計(jì)算的百分質(zhì)量常數(shù)做柱狀圖，見圖3。由圖3可知，ks-2，ks-6，ks-7批飲片的質(zhì)量常數(shù)大于等于34.22，百分質(zhì)量常數(shù)大于等于80%，為一等品； ks-3，ks-4，ks-5，ks-8，ks-12批飲片的質(zhì)量常數(shù)為21.39～34.22，百分質(zhì)量常數(shù)為50%～80%，為二等品；余下飲片的質(zhì)量常數(shù)小于21.39，百分質(zhì)量常數(shù)小于50%，均列為三等品。

圖3 15批苦參飲片百分質(zhì)量常數(shù)分布Fig.3 Distribution of percentage quality constants of 15 batches of Sophora flavescens decoction pieces

4 討 論

4.1 指標(biāo)成分的選擇

苦參為豆科植物苦參的干燥根，功效為清熱燥濕、殺蟲、利尿?？鄥⒅兄饕煞譃榭鄥A、氧化苦參堿、槐果堿、三葉豆紫檀苷、4-羥基-3-甲氧基-8,9-二亞甲基二氧紫檀素、異去氫淫羊藿素、三葉豆紫檀苷-6’-單乙酰酯、7-甲氧基香豆素、降脫水淫羊藿素、苦參酮、高麗槐素、β-谷甾醇等[8-11]。

本研究選取苦參堿及氧化苦參堿總和為苦參等級(jí)評(píng)價(jià)的內(nèi)在指標(biāo)，主要從以下2個(gè)方面考慮：1)苦參堿及氧化苦參堿為2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)苦參項(xiàng)下的法定指標(biāo)成分；2)苦參堿及氧化苦參堿為苦參中含量較高的生物堿類代表性化合物，具有抑制巨噬細(xì)胞及TNF-α[12]、抑菌活性[13]、解熱、鎮(zhèn)痛、抗病毒[14]的功效，是苦參發(fā)揮清熱燥濕作用的重要藥效成分。因此，選擇苦參堿及氧化苦參堿總和作為內(nèi)在指標(biāo)較為合理且具有代表性。

4.2 苦參堿及氧化苦參堿的影響因素

結(jié)合本文研究和文獻(xiàn)[15—16]對(duì)不同產(chǎn)地的苦參進(jìn)行含量分析，發(fā)現(xiàn)河南、河北、云南、湖南、山東、四川、內(nèi)蒙古等產(chǎn)地的樣品指標(biāo)成分含量存在差異。僅貴州產(chǎn)區(qū)的21個(gè)產(chǎn)地樣品的苦參總生物堿含量就存在明顯差別，其中，畢節(jié)市大方縣和銅仁市思南縣所產(chǎn)的苦參中總生物堿含量高于其他產(chǎn)區(qū)[17]?？鄥⑺幉脑耘嗲?年的側(cè)根和主根中5種生物堿含量增長(zhǎng)快速，隨后放緩，以9月底到11月底采挖的苦參中生物堿含量最高[18-19]。同時(shí)，苦參側(cè)根的生物堿類含量大于主根，蘆頭、莖、葉依次遞減[20]。因此，產(chǎn)地、采收期、藥用部位可能是影響苦參飲片中指標(biāo)成分含量的主要因素。

4.3 傳統(tǒng)鑒別法與質(zhì)量常數(shù)評(píng)價(jià)法的對(duì)比

2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)苦參項(xiàng)下飲片性狀規(guī)定：“本品呈類圓形或不規(guī)則形的厚片”。本研究收集到的飲片中ks-3的H=4.23 mm，m=1.85 g，從外觀形狀上，超過厚片的規(guī)定范圍，但其內(nèi)在指標(biāo)成分含量高。因而，分級(jí)被列為二等品。說明傳統(tǒng)鑒別方法僅以外觀形狀進(jìn)行評(píng)價(jià)，無法全面反映飲片的內(nèi)在質(zhì)量，易忽視飲片的內(nèi)在品質(zhì)。本研究中所論述的中藥質(zhì)量常數(shù)評(píng)價(jià)方法既兼顧了傳統(tǒng)鑒別方法所注重的外在性狀，又結(jié)合了指標(biāo)成分含量高即品質(zhì)優(yōu)的觀點(diǎn)。最終分級(jí)結(jié)果顯示，15批苦參樣品中一等飲片的平均厚度與二等、三等飲片存在一定差異，也符合厚片為宜的鑒別特征，提示該方法合理且可行[21-22]。

5 結(jié) 語

本文豐富了苦參飲片的品質(zhì)評(píng)價(jià)方法。應(yīng)用質(zhì)量常數(shù)法對(duì)苦參飲片評(píng)價(jià)能夠更加科學(xué)、準(zhǔn)確地體現(xiàn)飲片品質(zhì)，具有很大的實(shí)用價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)，僅有3批苦參飲片符合一等品，4批苦參飲片為二等品，其余8批為三等品。以內(nèi)蒙古產(chǎn)地為例，巴彥淖爾的ks-4為二等品，相同產(chǎn)區(qū)的ks-1為三等品；而內(nèi)蒙古索倫、錦山的樣品均為三等品，說明產(chǎn)地、加工方式對(duì)苦參飲片的品質(zhì)有一定影響，單獨(dú)以性狀或者指標(biāo)成分含量評(píng)價(jià)飲片品質(zhì)過于片面。

本文所提出的質(zhì)量常數(shù)法對(duì)飲片品質(zhì)進(jìn)行了較好的分級(jí)評(píng)價(jià)，對(duì)苦參飲片的市場(chǎng)流通具有一定指導(dǎo)意義。由于本研究中樣品批次的限制，并未收集到更多其他產(chǎn)地的樣品，因此，在今后的研究中需要擴(kuò)大研究的樣品量，以完善該評(píng)價(jià)方法。