探討外院會診玻片行全自動免疫組化儀染色異常的優化方法

脫 穎，梁英杰

免疫組化技術可以檢測細胞來源、辨認細胞產物及了解分化程度等，為病理診斷和鑒別診斷提供客觀依據，并為疾病治療提供指導。在精準醫療時代，全自動免疫組化儀以其自動化程度高、操作簡便、染色流程標準化等特點，在病理科廣泛應用[1-2]。但全自動免疫組化儀染色也會遇到組織玻片非特異染色、染色偏弱或無法著色等問題[3]，其中以外院送檢的會診組織在羅氏Ventana免疫組化染色時最為常見。常規處理方法是對組織玻片進行脫脂奶粉浸泡，但并不能完全解決問題。本科室通過增加二甲苯脫蠟、重復抗原修復及更換免疫組化染色儀的方法，對會診組織染色異常的切片進行優化，取得理想效果，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021年1～4月中山大學附屬第一醫院病理科異常染色的組織玻片30例，分別行免疫組化染色檢測HER-2/NEU、Rb、Ki-67的表達。免疫組化染色儀：Ventana Benchmark XT(羅氏公司)，Leica BOND Ⅲ(Leica公司)、DAKO Omnis(DAKO公司)；二抗檢測顯色系統均為各公司機器配套試劑。

1.2 方法(1)二甲苯預處理組：用常規10%的脫脂奶粉溶液浸泡30 min前，增加二甲苯脫蠟環節(5 min×3次)，蒸餾水沖洗后上機，行HER-2/NEU染色。(2)重復儀器修復環節組：手工滴加抗體見油膜下沉，抗體無法充分覆蓋組織，停止運行。將組織玻片重新上機，重復自動化染色儀脫蠟熱修復環節，行Rb蛋白染色。(3)更換免疫組化染色儀組：在Leica BOND Ⅲ、DAKO Omnis全自動免疫組化染色儀行Ki-67染色。組織玻片拷片65 ℃，60 min。Ventana免疫組化染色儀選擇HER-2/NEU、Rb蛋白、Ki-67染色后，運行修復染色；Leica BOND Ⅲ、DAKO Omnis分別選擇Ki-67染色后，運行修復染色。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2 結果

2.1 二甲苯預處理組未經處理的會診組織玻片，HER-2/NEU在Ventana染色平臺上染色異常，呈胞質非特異陽性，甚至核未著色(圖1A)。若只經牛奶浸泡，免疫組化染色儀染色后只改善蘇木精復染細胞核著色，HER-2/NEU仍呈陰性(圖1B)。增加二甲苯脫蠟，會診組織染色效果佳，HER-2/NEU陽性，與原送檢單位染色結果一致(圖1C)。

2.2 重復儀器修復環節組未經處理的會診組織玻片，Rb蛋白在Ventana染色平臺上染色呈陰性(圖2A)。抗體未完全覆蓋組織，停止染色并在Ventana平臺重新上機，重復自動化染色儀脫蠟熱修復環節，Rb蛋白染色呈陽性(圖2B)。

2.3 更換免疫組化染色儀組未經處理的會診組織玻片，Ki-67在Ventana染色平臺上染色呈弱陽性，基底細胞只有極少量陽性(圖3A)；更換為DAKO Omnis、Leica BOND Ⅲ全自動免疫組化染色平臺，染色效果明顯改善，Ki-67呈陽性(圖3B)。

①A①B①C②A②B③A③B

3 討論

全自動免疫組化儀染色由于其自動化程度高、操作簡便、染色流程標準化等優點，已成為各病理科常規配置。染色過程中會出現對照組織染色佳，但待檢組織染色結果與原單位送檢結果不一致，或組織內對照染色陰性及偏弱現象。文獻報道除浸泡奶粉溶液外[4-5]，并未見其他相應的處理措施。

本科室對部分會診“問題組織玻片”的相同品牌玻片，加貼本院組織制片，在Ventana免疫組化平臺進行組織染色后發現結果正常，提示異常染色并不完全是玻片問題。原因可能是由于會診“問題玻片”的原單位組織脫水流程不佳或組織蠟塊質量層次不齊，機器自帶的脫蠟液對會診組織脫蠟不徹底，使組織玻片上殘留油污或油泡等物質，產生親油現象使油膜下沉，導致抗體分布不均勻，阻礙抗原抗體結合，造成部分未處理會診玻片較難獲得理想染色[5-6]。日常實驗中，奶粉浸泡只是增加玻片親水性，使正電荷分布更均勻，并不能徹底解決問題。

本科室通過對三種染色平臺的會診組織染色效果的長期觀察，發現Leica及DAKO公司的免疫組化染色平臺較少有組織玻片出現類似Ventana染色平臺非特異染色現象。文獻報道，部分外院組織玻片染色前不處理也能獲得到良好的染色，但為了保證各染色平臺的染色結果一致性，應盡量避開含油性試劑的Ventana染色儀[8-9]。如某些醫院僅有Ventana染色平臺時，應在染色前增加二甲苯上機前處理及后續全自動免疫組化儀脫蠟和修復多重環節，可達到理想染色效果。其操作簡單易行，經本科室長期驗證均取得良好效果，值得推廣。