‘云田彩桂’組織培養研究

尹原森 郭志海 殷勤 韋慶華 汪成忠

摘 要：通過對‘云田彩桂’不同樹齡植株采集的外植體進行組織培養技術研究，結果表明：春季采取‘云田彩桂’3y的幼嫩枝條作外植體較好，這是因為在幼樹當年生枝條中所含的有毒有害物質及酚類化合物較少，能有效降低褐化率和污染率。最適宜的消毒劑及消毒時間為：75%酒精1min，0.1%的氯化汞溶液消毒10min，成活率達46.5%。在增殖階段為防止無菌苗褐化及提高增殖系數，采用MS+6-BA1.0/L+NAA0.1mg/L+Vc 20mg/L的培養基配方，能有效減少褐化率，并提高增殖系數至2.02。

關鍵詞：‘云田彩桂’;無菌苗褐化;增殖系數

中圖分類號 S792.99 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2021）23-0038-02

桂花[Osmanthus fragrans （Thunb.）Lour.]屬木犀科木犀屬的木本香花植物，原產地為中國西南地區。近年來陸續選育出新葉色彩變化極為豐富的新優品種，而‘云田彩桂’是變異品種一個優良品種，小喬木或灌木，作為桂花的新品種，其葉色一年四季變化多樣、精彩紛呈，初春嫩芽為紫紅玫紅，后轉為桃紅，進而轉金黃色至白色，再由中央主葉脈開始向兩邊漸變綠色，直至深綠。在氣候條件適宜的條件下，一年四季不斷有嫩芽冒出，因此整個植珠從上到下五色斑斕、姹紫嫣紅，整個植株的觀葉期超過半年，既是香花植物又是彩葉樹種。其適應性較強，能耐長江流域最高氣溫39℃，極端最低氣溫-10℃，耐熱及耐寒性良好，已成為景觀綠化及觀賞樹木界的新寵。

‘云田彩桂’主要是采用扦插嫁接的無性方式進行繁殖，但由于插穗數量有限及嫁接技術要求較高，繁殖系數相對較小。為此，本研究采用組織培養的方式進行種苗繁殖，加快繁殖速度，以利于優良品種的推廣及應用。

1 材料與方法

1.1 外植體 選取蘇州農業職業技術學院相城科技園品種圃內3y和10y樹齡的‘云田彩桂’，取樹冠外圍、芽體飽滿的當年無病蟲害、生長健壯的嫩枝，取材季節選擇春季，進行實驗。

1.2 外植體滅菌 選取‘云田彩桂’2種樹齡當年生的健壯的幼嫩枝條，葉片顏色兩側呈粉紅色，中間呈青黃綠條狀，剪除葉片保留葉柄，枝條剪成3～4cm的莖段，放入玻璃瓶中，加水和洗衣粉清洗，去除外部的灰塵等雜質，葉腋部分用毛刷刷洗，清洗完畢用流水沖洗1h。接種室消毒：均用75%酒精1min，分別用0.1%升汞和2%次氯酸鈉溶液各消毒10、12min和20、25min，用無菌水沖洗6次，將莖段放在無菌的濾紙上，切除葉柄，將莖段切成1～1.5cm的帶1個腋芽的小段，轉接于初代培養基MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.1mg/L中，莖段1個/瓶，各接種50瓶，30d后統計成活率。

1.3 繼代培養基的設計 繼代培養設置以下6種培養基：1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，2/3MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L+活性碳1g/L。每瓶接種2個芽。接種后放置于光照培養室中培養60d后，隨機抽取10瓶統計相關數據用于分析。

1.4 增殖培養中褐化的處理 在增殖培養基MS+BA1.0/L+NAA0.1mg/L中，分別添加4種濃度的添加劑，分別為活性炭：1g/L、2g/L及Vc：20mg/L、30mg/L，觀察其對褐化及增殖系數的影響。

2 結果與分析

2.1 不同消毒處理對外植體的影響 木本植物消毒效果相較于草本植物要難些，故采用2種消毒劑、不同消毒時間進行比較，其結果見表1。由表1可知，‘云田彩桂’的消毒劑最好是用氯化汞，消毒時間10min，成活率高達40.5%，但使用氯化汞的污染率雖然低于次氯酸鈉，但其褐化率均高于次氯酸鈉消毒劑。取‘云田彩桂’2種樹齡（3y和10y）的當年生健壯的幼嫩枝條為外植體，均用75%酒精1min，0.1%的氯化汞溶液消毒10min，結果見表2。由表2可知，3y采的外植體初代成活率優于10y，其污染率和褐化率均低于10y的。

2.2 不同植物生長調節劑對增殖系數的影響 由表3可知，6-BA與NAA配合的比例濃度是決定芽苗增殖的關鍵。其中，以4號培養基的比例配合最好，增殖系數為1.96，芽體也較健壯。在細胞分裂素濃度較低的培養基中芽體萎黃，而在較高濃度的培養基中，芽體周圍愈傷組織出現白色排列疏松的愈傷組織，最后芽體也逐漸發白并無生命力。

2.3 增殖培養中褐化的試驗 在增殖培養中，褐化一直存在，且影響苗體的生長及增殖速率，因此在4號繼代培養基上添加不同濃度的Vc及活性炭，能有效控制褐化。由表4可知，添加Vc及活性炭均能降低褐化率，但對無菌芽的增殖與分化有影響，添加20mg/L的Vc增殖系數高于其他濃度添加劑的培養基，而且葉色及芽體健壯度較好，平均增殖系數達2.02，培養60d后，芽體高度能長到2～3cm。

3 小結與討論

‘云田彩桂’外植體采取3y的幼嫩枝條較好，由于在幼樹當年生枝條中，所含的有毒有害物質及酚類化合物較少，因而能有效降低褐化率和污染率。用0.1%的氯化汞溶液消毒10min，效果較好，成活率達46.5%。在增殖階段為防止無菌苗褐化及提高增殖系數，采用MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+Vc 20mg/L的培養基配方，能有效減少褐化率，并提高增殖系數至2.02，為‘云田彩桂’的工廠生產和種苗快速繁殖提供了保障。

參考文獻

[1]易劍雄，“云田彩桂”新品種選育、繁殖技術研究.湖南省，湖南省株洲市石峰區云田苗木基地，2008-12-18.

[2]柳群.云田彩桂[J].花木盆景（花卉園藝），2014（02）：5.

[3]何海燕，何小弟，董筱昀.北美楓香“秋霞紅”組織培養快速繁殖技術研究[J].江蘇林業科技，2014，41（05）：23-26.

（責編：張宏民）