發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)及腸道菌群的影響

吳 東，計(jì) 徐，周 芬，楊家軍，吳義景，夏倫志，朱洪龍，陳麗園，于 政，汪興生，謝繼奎

（1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031；2.申亞生物科技股份有限公司，安徽 阜陽(yáng) 236065）

開(kāi)發(fā)新型的替代抗生素的藥物成為新的研究方向。中草藥是我國(guó)傳統(tǒng)的藥物，具有提高免疫力、抗菌譜廣、抗病毒、抗腫瘤、穩(wěn)定性好、不易產(chǎn)生耐藥性等多種優(yōu)點(diǎn)[1-2]。使用中草藥飼料添加劑，不僅可以獲得良好的防病治病和促生長(zhǎng)效果，而且能解決毒副作用、耐藥性及藥物殘留問(wèn)題，與抗生素及其他替代品相比，具有明顯優(yōu)勢(shì)[3-4]。但由于中草藥的有效成分多存在于細(xì)胞的胞漿中，而植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，其活性成分難以釋放，使得其有效成分利用率低[5]，造成資源的浪費(fèi)，同時(shí)還有可能影響動(dòng)物對(duì)飼料的適口性，一定程度上制約了中草藥飼料添加劑的發(fā)展。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，微生物發(fā)酵中草藥可使有效成分充分分離，生物活性增強(qiáng)[6]，并且中草藥發(fā)酵過(guò)程中可產(chǎn)生新的活性成分，從而增強(qiáng)中草藥的藥效[7]。本試驗(yàn)研究發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、血清免疫指標(biāo)及腸道菌群的影響，為選擇適宜的飼用抗生素替代物提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

發(fā)酵中草藥添加劑：用連翹、金銀花、杜仲、黃芪、蒲公英、山楂等配制，用乳酸菌和酵母菌發(fā)酵而成。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)于2020年7—8月在安徽省阜陽(yáng)市某豬場(chǎng)進(jìn)行。選擇體重15 kg左右、日齡相近的健康杜長(zhǎng)大三元雜種斷奶仔豬80頭（公母比1∶1），隨機(jī)分為抗生素組和發(fā)酵中草藥添加劑組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭，公母各半，單圈飼養(yǎng)。預(yù)試期6 d，試驗(yàn)期33 d。抗生素組在基礎(chǔ)飼糧中添加15% 金霉素500 g/t、20% 土霉素鈣1 000 g/t，發(fā)酵中草藥添加劑組是在基礎(chǔ)飼糧中添加2% 發(fā)酵中草藥添加劑。

1.3 試驗(yàn)飼糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)期間所有豬自由采食和飲水，每天清掃圈舍，以保持圈內(nèi)清潔，采取自由通風(fēng)，所有圈舍定期消毒，免疫消毒程序按照豬場(chǎng)常規(guī)方法進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)豬禁食（自由飲水）12 h后稱重，以重復(fù)為單位記錄始重和末重，統(tǒng)計(jì)耗料量。計(jì)算各組的日增重、日采食量和料重比。

1.4.2 血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭豬進(jìn)行頸下靜脈采血，每頭采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，于-20 ℃保存，待測(cè)；測(cè)定血糖（GLU）、總蛋白（TP）、尿素氮（BUN）含量；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性；血清中總抗氧化能力（T-AOC）。采用南京建成公司試劑盒在酶標(biāo)儀上進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.4.3 血清免疫指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食12 h，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭豬進(jìn)行頸下靜脈采血，每頭采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，于-20 ℃保存，待測(cè)；血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量測(cè)定，采用南京建成公司試劑盒在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.4.4 腸道菌群的測(cè)定 盲腸糞便采集與處理：每個(gè)重復(fù)選取1頭豬，早晨飼喂1 h后，現(xiàn)場(chǎng)及時(shí)采集直腸糞便，直接在肛門采集（用已滅菌的棉簽伸入肛門取樣，無(wú)菌采集直腸末端新鮮糞球2～5 g滅菌離心管封裝，置于冰盒，直到完成整個(gè)采樣過(guò)程，整個(gè)過(guò)程保證在1 h以內(nèi)完成。低溫條件下帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。無(wú)菌操作臺(tái)中取盲腸糞便0.5 g于10 mL的滅菌離心管中，加入無(wú)菌生理鹽水4.5 mL，用旋渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)，乳酸菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)lg（CFU/g）表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，抗生素組和發(fā)酵中草藥添加劑組仔豬始重差異不顯著（P＞0.05）；與抗生素對(duì)照組相比，發(fā)酵中草藥添加劑組平均日增重上升10.43% （P＜0.01），平均日采食量上升0.4% （P＞0.05），料重比下降9.04% （P＜0.01）。

表2 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力的影響

由表3可知，與抗生素對(duì)照組相比，發(fā)酵中草藥添加劑組總抗氧化能力上升76.58% （P＜0.05），總蛋白上升9.37% （P＜0.05），血糖、尿素氮、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶兩組差異都不顯著（P＞0.05）。

表3 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力的影響

2.3 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，與抗生素對(duì)照組相比，發(fā)酵中草藥添加劑組IgM上升79.02% （P＜0.01），IgA、IgG兩組差異都不顯著（P＞0.05）。

表4 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

2.4 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬腸道菌群的影響

由表5可知，與抗生素對(duì)照組相比，發(fā)酵中草藥添加劑組中乳酸菌含量上升6.25% （P＞0.05），大腸桿菌含量下降9.81% （P＞0.05）。

表5 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬腸道菌群的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

章華其等[8]在研究?jī)山M復(fù)方中草藥添加劑對(duì)生長(zhǎng)肥育豬生長(zhǎng)性能影響的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，添加山楂、神曲能顯著提高仔豬日增重11.26% 和全程日增重9.66%。孫玉華[9]、苗旭等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬飼糧中添加黃芪、黃芩等中草藥飼料添加劑，可使斷奶仔豬的日增重顯著提高，料重比顯著降低；曹授俊等[11]試驗(yàn)報(bào)道，黨參、黃芪、茯苓、白術(shù)、神曲、扁豆、山楂和麥芽等復(fù)方中草藥可提高仔豬的日增重，降低料重比。發(fā)酵后復(fù)方中草藥可以提高飼料的利用率，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝及動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育[12]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中草藥添加劑組比抗生素對(duì)照組仔豬日增重顯著提高、料重比顯著降低，與上述報(bào)道基本一致。可能是發(fā)酵中草藥添加劑富含的活性物質(zhì)及未知生長(zhǎng)因子，促進(jìn)仔豬胃腸內(nèi)多種消化酶的分泌，提高飼料在體內(nèi)消化與吸收及其利用率，從而提高仔豬的生長(zhǎng)性能。

3.2 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬血清生化指標(biāo)和總抗氧化能力的影響

王宇等[13]研究黃芪何首烏提取物對(duì)斷奶仔豬血液指標(biāo)及免疫的影響，結(jié)果表明在飼糧中添加0.5% 黃芪、何首烏提取物，相對(duì)于飼喂基礎(chǔ)飼糧的對(duì)照組而言，能顯著提高TP含量，ALP（堿性磷酸酶）含量。易延彬[14]在研究中草藥添加劑對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，添加含黃芪、茯苓、連翹的1.5 g/kg中草藥添加劑能顯著提高TP含量，ALB（白蛋白）含量高于對(duì)照組，能顯著降低BUN含量，ALT、AST 均低于對(duì)照組。血清中總蛋白濃度反映了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的吸收、合成、分解狀況和體液免疫的關(guān)系。血清總蛋白和白蛋白含量的升高說(shuō)明機(jī)體蛋白質(zhì)代謝旺盛，蛋白質(zhì)的吸收利用率及沉積作用增強(qiáng)，動(dòng)物的生產(chǎn)性能提高[15-16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼糧中添加2% 的發(fā)酵中草藥添加劑，仔豬血清中總蛋白含量顯著提高，促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)代謝，有利于提高機(jī)體的免疫功能；這與上述報(bào)道基本一致；而血糖、尿素氮、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶兩組差異都不顯著；本試驗(yàn)中發(fā)酵中草藥添加劑組中總抗氧化能力指標(biāo)顯著上升，而發(fā)酵中草藥添加劑導(dǎo)致仔豬總抗氧化能力提升少見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

3.3 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬血清免疫指標(biāo)的影響

仔豬血清中免疫球蛋白水平可反映其免疫能力的高低，免疫球蛋白可保護(hù)仔豬不受外界病原侵害，對(duì)預(yù)防仔豬腸道疾病有重要作用[17]。中草藥中富含多糖類、生物堿和揮發(fā)性成分等生物活性物質(zhì)，可以促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體免疫器官的發(fā)育，提高機(jī)體的抗病能力[18]。黃子慧等[19]在研究加味四君子湯對(duì)仔豬血清免疫因子水平及腸黏膜免疫的影響中發(fā)現(xiàn)，加味四君子湯能顯著或極顯著提高仔豬血清中4種免疫因子水平，極顯著提高IgA的mRNA相對(duì)表達(dá)量，表明在飼糧中添加2% 的加味四君子湯能提高仔豬機(jī)體免疫應(yīng)答能力。與抗生素對(duì)照組相比，發(fā)酵中草藥添加劑血清中IgM極顯著升高，IgA有一定程度的升高，與上述報(bào)道的結(jié)果一致。

3.4 發(fā)酵中草藥添加劑對(duì)仔豬腸道菌群的影響

王芳芳等[20]研究表明，在斷奶仔豬飼糧中添加黃芩、金銀花、白芍等中草藥可以顯著提高仔豬的生長(zhǎng)性能，降低腹瀉率，抑制腸道內(nèi)大腸埃希氏菌繁殖，促進(jìn)有益菌乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖。發(fā)酵中草藥渣與乳酸桿菌、雙歧桿菌具有協(xié)同作用，從而提高機(jī)體免疫力。促進(jìn)乳酸桿菌和雙歧桿菌的生長(zhǎng)繁殖，抑制腸道內(nèi)的有害菌的增殖[21]。而本試驗(yàn)發(fā)酵中草藥添加劑組與抗生素對(duì)照組相比，豬腸道中乳酸菌含量有一定程度的上升，大腸桿菌含量有一定程度的下降，與上述報(bào)道基本一致。

4 結(jié)論

綜上所述，與抗生素對(duì)照組相比，發(fā)酵中草藥添加劑組使豬的生長(zhǎng)性能、總抗氧化能力和免疫指標(biāo)顯著提高，腸道菌群結(jié)構(gòu)有一定程度的改善。