胸腔積液細胞塊切片免疫組化染色技術對肺腺癌的診斷效果

張宏巖

常規細胞涂片法中受間皮細胞增生、涂片厚度、組織形態結構影響,容易將其誤診為轉移性腺癌,特別是間皮腫瘤、肺腺癌僅依靠細胞涂片往往難以準確診斷,容易影響患者病情治療,導致患者病情延誤,因此,探尋安全、有效、準確的診斷手段,對間皮腫瘤及肺腺癌患者存活具有重要意義［1,2］。本研究收集本院收治的90 例胸腔積液患者,分析胸腔積液細胞塊切片免疫組化染色技術在肺腺癌患者中的診斷價值,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018 年1 月～2020 年1 月本院收治的90 例胸腔積液患者納入研究,其中男48 例,女42 例；年齡最小21 歲,最大74 歲,平均年齡(47.5±9.2)歲。所有患者均存在胸腔積液,臨床特征、影像學檢查結果為惡性,在詳細了解此次研究內容后自愿參與,且已簽署知情同意書；排除血液系統疾病、心、肝、腎等重要臟器器質性損傷疾病、嚴重感染、精神疾病、認知障礙,不具備獨立溝通能力及不配合者；本研究已獲本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 采集胸腔積液標本 清晨所有患者均接受胸腔積液采集,采集量為50 ml,使用5 支試管進行分裝,每支試管10 ml；使用離心機進行離心處理,3000 r/min,時間為10～15 min,吸出上層清液,保留沉渣；使用部分沉渣進行HE 細胞涂片制作,再將2.5 ml 戊二醛加入剩余沉渣中,固定好后進行離心處理,3000 r/min,時間為5 min,將上層清液吸出,使用濾紙將沉渣脫水保留,再進行石蠟包埋,并將其處理為3～4 μm 切片。

1.2.2 HE 染色 分別對細胞塊切片和細胞涂片進行HE 染色處理,選擇科室2 名以上具備豐富經驗的病理醫師進行閱片,觀察標本核不典型性、粘附性及細胞形態,判定標本性質。良性反應性間皮細胞增生：不具備不典型性,細胞彌散進行分布,細胞形態較為溫和；惡性間皮瘤細胞或轉移性腺癌：重度不典型性細胞核和細胞形態,細胞成團進行分布；不確定良惡性：中重度不典型性細胞核,細胞彌散進行分布,或輕中度不典型性細胞核,細胞成團進行分布。

1.2.3 免疫組化染色檢查 選擇福州邁新公司DAB顯色試劑和Maxvision試劑盒進行免疫組化S-P法染色,所有相關指標抗體均根據基因公司要求嚴格對間皮細胞免疫組化指標(Desmin、WT-1、CK5/6)和肺腺癌免疫組化指標(BerEP4、TTF-1、CK17、CD15)進行檢查,其中Desmin、CK5/6、BerEP4、CK17 顏色結果為棕黃色細胞質染色則診斷為陽性,CD15 出現細胞膜、細胞質染色則診斷為陽性。

1.3 觀察指標 對比細胞塊切片HE 染色和細胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結果；常規細胞涂片和細胞塊切片免疫組化染色技術的惡性胸腔積液診斷率；間皮細胞免疫組化指標(Desmin、WT-1、CK5/6)、肺腺癌免疫組化指標(BerEP4、TTF-1、CK17、CD15)染色結果［3］。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0 統計學軟件對研究數據進行統計分析。計量資料以均數 ± 標準差()表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 細胞塊切片HE 染色和細胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結果對比 90 例患者經細胞塊切片HE 染色顯示38 例(42.22%)為良性,28 例(31.11%)為惡性,24 例(26.67%)為不確定性；細胞涂片HE 染色顯示37 例(41.11%)為良性,31 例(34.44%)為惡性,22 例(24.44%)為不確定性。細胞塊切片HE 染色和細胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結果對比差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 常規細胞涂片和細胞塊切片免疫組化染色技術的惡性胸腔積液診斷率對比 90 例患者經細胞塊切片免疫組化染色技術診斷48 例(53.33%)為良性,42 例(46.67%)為惡性；常規細胞涂片診斷39 例(43.33%)為良性,33 例(36.67%)為惡性,18 例(20.00%)為不確定性。細胞塊切片免疫組化染色技術的惡性胸腔積液診斷率明顯高于常規細胞涂片,差異具有統計學意義(P<0.05)。經病理檢查發現90 例患者中40 例為惡性,細胞塊切片免疫組化染色技術診斷誤診2 例,診斷準確率為95.24%(40/42)。

2.3 常規細胞涂片和細胞塊切片免疫組化染色技術染色結果對比 肺腺癌患者細胞中CD15、CK17、TTF-1、BerEP4 陽性表達率明顯高于良性細胞、間皮腫瘤、不確定性細胞,差異具有統計學意義(P<0.05)；良性細胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達率明顯高于肺腺癌,差異具有統計學意義(P<0.05)；肺腺癌患者細胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達率低于間皮腫瘤細胞,差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 常規細胞涂片和細胞塊切片免疫組化染色技術染色結果對比［n(%)］

3 討論

胸腔積液屬于高發呼吸系統疾病,多見于炎癥、非小細胞肺癌、惡性胸膜間皮瘤、肺腺癌患者中,該疾病發病后雖進展緩慢,但前期就已存在血行轉移情況,死亡率高,因此,早診斷、早治療對患者病情預后具有重要意義。在臨床診斷中,因胸腔積液細胞采樣、制片操作方便,速度快,通過觀察胸腔積液標本中是否存在脫落癌細胞可判斷患者胸腔積液性質,成為常用病理診斷方式［4,5］。但由于胸腔積液成分較為復雜,部分細胞形態較為接近,僅依靠細胞涂片難以準確判斷患者細胞性質,特別是肺腺癌、惡性間皮瘤形態相似度較高,細胞涂片HE 染色診斷容易出現誤診［6,7］。近年來,隨著現代醫學診斷技術日漸成熟,細胞塊切片免疫組化染色技術逐漸在臨床診斷中推廣,該技術也常稱之為免疫細胞化學技術,主要通過抗體熒光素、同位素顯色劑化學反應,判斷組織細胞中多肽、蛋白質,特異性較高,臨床發現該診斷方式在間皮腫瘤及肺腺癌患者診斷中敏感性較高［8,9］。相較于細胞涂片,細胞塊切片免疫組化染色技術由單人進行專業儀器染色操作,雖操作復雜,但耗材低,可避免人為因素影響診斷結果,細胞塊均勻分布,脫落細胞形態、結構可得到更好保存,彌補了細胞涂片細胞分布不均、形態模糊等弊端,可避免診斷結果假陽性,且能準確對患者胸腔積液良惡性進行判斷［10-12］。本研究結果顯示：細胞塊切片HE 染色和細胞涂片HE 染色對胸腔積液的診斷結果對比差異無統計學意義(P>0.05)。細胞塊切片免疫組化染色技術的惡性胸腔積液診斷率明顯高于常規細胞涂片,差異具有統計學意義(P<0.05)。經病理檢查發現90 例患者中40 例為惡性,細胞塊切片免疫組化染色技術診斷誤診2 例,診斷準確率為95.24%(40/42)。肺腺癌患者細胞中CD15、CK17、TTF-1、BerEP4 陽性表達率明顯高于良性細胞、間皮腫瘤、不確定性細胞,差異具有統計學意義(P<0.05)；良性細胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達率明顯高于肺腺癌,差異具有統計學意義(P<0.05)；肺腺癌患者細胞中Desmin、WT-1、CK5/6 陽性表達率低于間皮腫瘤細胞,差異具有統計學意義(P<0.05)。

綜上所述,肺腺癌采取細胞涂片聯合細胞塊切片免疫組化染色技術進行診斷,可為臨床醫生提供更多診斷參考依據,有助于提高診斷準確率。