復發性流產患者PAI-1、TSP-1、D-D水平變化及其臨床意義

張亞崴 張利萍 于治芳

作者單位：河北北方學院附屬第一醫院婦科，河北，張家口075000

復發性流產（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指連續2 次及以上的自然流產，占孕婦妊娠期間流產總數的15%～20%［1］。RSA 常見的病因有父本或母本染色體異常、子宮生理結構異常、病原感染等，但仍有30%～40%的反復流產原因尚不明確［2］。RSA 的發生對育齡婦女造成極大的身體與精神創傷，給其家庭帶來巨大的壓力。隨著國家二胎政策的開放和人口老齡化的加劇，人們對RSA 也愈加重視。有研究表明，RSA 早期診斷能有效減少RSA 的發生，提高RSA 患者的治療效果，因此尋找一種有效的RSA診斷方法，對RSA 的預防及預后具有重要的意義［3］。纖溶酶原活化物抑制因子（Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）是纖溶系統中調節纖溶活性的重要指標，可保持血管壁通透性，維持血液流動狀態，并修復組織。血小板反應蛋白-1（Thrombospondin-1，TSP-1）是發現最早、關注最多的抑制因子，其包含多個TSRs 結構域，可與不同的配體相結合并發揮多種生物學效應，在人體生理和病理調節中發揮著重要。D-二聚體（D-dimer，D-D）是纖維蛋白降解產物，與纖溶系統活性和血栓溶解密切相關。本研究選取PAI-1、TSP-1、D-D 三種檢測指標，探討三者在復發性流產患者血清中的變化，以期為臨床提供參考。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年3月本院收治的184 例復發性流產患者作為RSA 組，根據流產次數分為RSA1 組（流產次數＞3 次）和RSA2 組（流產次數≤3 次）。納入標準：①經期規律，內分泌檢查結果正常；②夫妻染色體檢查正常；③生殖系統發育正常；④連續自然流產≥2 次。排除標準：①患有甲狀腺疾病或糖尿病；②2月內使用抗凝或者促纖溶藥品；③合并患有其他嚴重肝、腎、心腦血管疾病。④內分泌、遺傳、感染等原因所致的流產。RSA 組平均年齡（29.65±2.27）歲，平均孕周（9.05±2.27）周。選取同時期具有正常分娩史、染色體、內分泌等檢查均為正常且本次妊娠正常女性172 例作為正常妊娠組，平均年齡（28.05±2.62）歲，平均孕周（9.65±2.61）周。兩組年齡、孕周比較差異無統計學意義（P＞0.05）。本研究經醫院醫學倫理委員會批準通過，受試者均簽署知情同意書。

1.2 實驗室檢測

兩組受試者空腹8 h 后抽取妊娠早期外周血4 mL，以3 000 r/min 速度（r=10 cm）離心10 min，取上清置于EP 管中，置于-80℃備用。采用酶聯免疫吸附法對PAI-1、TSP-1、D-D 進行檢測，試劑盒購自美國ThermoFisher 公司，具體實驗步驟：①包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度，每凹孔加0.3 mL，4℃過夜，貯存冰箱；②洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液洗3 次，每次5 min；③每凹孔加入0.2 mL 用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標本，37℃作用1～2 h；④洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液洗3 次，每次5 min；⑤加入0.2 mL 用稀釋緩沖液稀釋的酶標記特異性抗體溶液，37℃作用1～2 h；⑥洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液洗3 次，每次5 min；⑦加入0.2 mL 底物溶液于每個凹孔，室溫作用30 min；⑧加終止劑：每凹孔加2 M H2SO40.05 mL；⑨觀察記錄結果：目測或用酶標比色計測定OD 值。并統計RSA 組胎兒預后情況，根據結果分為流產組和活產組。

1.3 統計學處理

采用SPSS 18.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料采用（）表示，采用t檢驗，相關性分析采用Pearson 分析。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清PAI-1、TSP-1、D-D 含量比較

RSA組血清PAI-1、TSP-1、D-D含量顯著高于正常妊娠組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清PAI-1、TSP-1、D-D 含量比較（±s）Table 1 Comparison of PAI-1，TSP-1 and D-D in serum of two groups（±s）

表1 兩組血清PAI-1、TSP-1、D-D 含量比較（±s）Table 1 Comparison of PAI-1，TSP-1 and D-D in serum of two groups（±s）

組別RSA 組正常妊娠組t 值P 值n 184 172 PAI-1（ng/mL）38.49±3.38 30.24±2.46 26.178＜0.001 TSP-1（mg/mL）3.72±0.61 2.67±0.42 19.020＜0.001 D-D（mg/mL）1.69±0.31 1.19±0.27 16.180＜0.001

2.2 RSA 組血清中PAI-1、TSP-1、D-D水平的相關性分析

Pearson相關性分析結果顯示，RSA組血清PAI-1與TSP-1 表達水平無顯著相關性（P＞0.05），PAI-1與D-D 表達水平無顯著相關性（P＞0.05），TSP-1 與D-D 表達水平無顯著相關性（P＞0.05）。見表2。

表2 觀察組血清中PAI-1、TSP-1、D-D水平的相關性Table 2 Correlation of PAI-1，TSP-1 and D-D levels in serum of women in observation group

2.3 RSA 組PAI-1、TSP-1、D-D水平與預后情況比較

根據RSA 組胎兒預后情況，結果分為流產組（n=98）和活產組（n=89）。流產組血清PAI-1、TSP-1、D-D水平顯著高于活產組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 RSA組PAI-1、TSP-1、D-D水平與預后情況比較（±s）Table 3 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis in RSA group（±s）

表3 RSA組PAI-1、TSP-1、D-D水平與預后情況比較（±s）Table 3 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis in RSA group（±s）

組別流產組活產組t 值P 值n 98 86 PAI-1（ng/mL）40.30±4.29 36.94±3.61 6.610＜0.001 TSP-1（mg/mL）2.86±0.53 2.32±0.41 8.287＜0.001 D-D（mg/mL）1.82±0.40 1.59±0.29 5.268＜0.001

2.4 RSA 組流產次數與PAI-1、TSP-1、D-D水平的比較

RSA1 組PAI-1、TSP-1、D-D水平顯著高于RSA2 組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組PAI-1、TSP-1、D-D水平與預后情況比較（±s）Table 4 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis between the two groups（±s）

表4 兩組PAI-1、TSP-1、D-D水平與預后情況比較（±s）Table 4 Comparison of PAI-1，TSP-1，D-D levels and prognosis between the two groups（±s）

組別RSA1 組RSA2 組t 值P 值n 82 102 PAI-1（ng/mL）40.95±4.17 37.31±3.54 6.402＜0.001 TSP-1（mg/mL）2.93±0.56 2.46±0.45 6.313＜0.001 D-D（mg/mL）1.84±0.42 1.61±0.30 4.327＜0.001

3 討論

RSA 是指孕齡婦女發生連續2 次及以上的自然流產，其發病機制較為復雜，反復流產原因尚不完全明確。RSA 早期診斷能有效提高RSA 患者的治療效果，RSA 早期有效診斷方法對其預防及預后具有重要的意義。文獻研究發現，血液中相關因子表達水平與妊娠狀態的維持有一定的相關性［4］。

本研究選取PAI-1、TSP-1、D-D 三種檢測指標，探討三者在復發性流產患者血清中的變化及其對預后的預測價值。PAI-1 是一種單鏈糖蛋白，能特異性地抑制纖溶酶原的激活［5］。纖溶酶活性受到抑制，纖維蛋白及纖維蛋白原清除作用減弱，誘導血栓形成［6］。D-D 是結構最簡單的纖維蛋白溶解產物，在正常人血清中濃度較低，D-D水平下降表明機體存在纖維蛋白溶解作用抑制，是機體血液高凝狀態的臨床評價指標之一［7-8］。近年來有研究發現，妊娠女性血液凝固系統的失衡與病因不明的RSA 存在某種聯系，部分RSA 患者經治療改善凝血狀態后均成功分娩［9-10］。本研究顯示，RSA 組孕婦血清PAI-1、D-D水平顯著高于正常妊娠組，且隨著流產次數的增加，患者血清中PAI-1、D-D 表達水平逐漸升高。分析原因可能是，血清PAI-1、D-D水平的上升提示RSA 組孕婦血液處于高凝狀態，纖維蛋白清除能力受到抑制，造成子宮內膜上皮組織、胎盤絨毛間隙纖維蛋白積聚，臍動脈和毛細血管通暢性降低，血液灌注量不足，導致胎盤氧氣和營養物質運輸能力下降，局部微血栓擴張加劇形成梗死灶，最終造成胚胎停止發育或流產［11］。本研究根據胎兒最終結局分組發現，胎兒活產組孕婦血清PAI-1、D-D 表達水平顯著低于流產組，也進一步說明了孕婦血液高凝狀態對妊娠結局的影響，提示孕婦血清PAI-1、D-D水平檢測對于妊娠結局和預后具有一定的參考價值。

TSP-1 是細胞外基質糖蛋白家族中的一員，也是廣泛研究的血管抑制因子之一，主要通過TSR 與其相應受體結合，抑制血管生成，調節細胞表面功能，影響細胞遷移和黏附，其在腫瘤復發和轉移方面的作用在近年來的研究中引發重點關注［12-13］。TSP-1可以通過競爭結合的方式抑制血管內皮生長因子活性，還能抑制血管內皮細胞增殖和分化，誘導細胞凋亡［14］。動物實驗發現TSP-1 在小鼠受精卵分裂早期的表達水平上升，推測TSP-1 可能對于妊娠初期胎盤血管的形成具有重要意義［15］。有文獻認為，妊娠初期胎盤血管機能不全是造成流產的潛在原因之一［16］。本研究結果顯示，RSA組血清中TSP-1水平顯著低于正常妊娠組，且隨著流產次數的上升，RSA組TSP-1水平出現增加的趨勢，提示TSP-1 表達水平上升可引發RSA 組血管生成抑制作用增強，新生血管數量下降，繼而造成妊娠中止。相關性分析結果顯示，RSA 組血清PAI-1、D-D、TSP-1水平兩兩比較無顯著相關性，原因尚需要進一步的實驗證實。

綜上所述，RSA 患者血清PAI-1、TSP-1、D-D水平呈高表達，三者對RSA預后具有一定的臨床應用價值。因此，本研究認為，臨床應對血清PAI-1、TSP-1、D-D水平進行監測，并進行針對性干預，以降低RSA。