S100A2、Blimp1在多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)水平及意義

呂殿亮 張寬順 吳藝 馮磊 石琳★

作者單位：1.河南省中醫(yī)院血液科，河南，鄭州450002

2.河南省中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院血液科，河南，鄭州450002

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是血液系統(tǒng)惡性腫瘤類疾病，其特征為克隆漿細(xì)胞異常增殖，可引起骨折、貧血、高鈣血癥等［1］。MM 發(fā)病率在血液系統(tǒng)惡性腫瘤類疾病為第二位，僅次于非霍奇金淋巴瘤，多發(fā)于老年人群，極大影響患者生存質(zhì)量。研究表明，相關(guān)細(xì)胞及分子生物學(xué)與MM 患者之間有很大的關(guān)系［2］。S100 鈣結(jié)合蛋白A2（S100A2）屬于S100 蛋白家族，測(cè)定S100 蛋白濃度有助于判斷相關(guān)部位的病灶大小、患者預(yù)后等［3］。S100 蛋白家族中眾多成員在MM 等不同疾病中呈現(xiàn)異常表達(dá)，而S100A2 位于細(xì)胞核中，并與細(xì)胞周期有一定關(guān)系。B 淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)成熟蛋白-1（Blimp1）為漿細(xì)胞分化過程中的主要調(diào)節(jié)因子，MM 患者體內(nèi)漿細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖，Blimp1 可作為重要的調(diào)節(jié)與預(yù)測(cè)指標(biāo)［4］。目前國內(nèi)外的研究多集中于將MM 患者體內(nèi)的S100A2 或Blimp1 作為單獨(dú)指標(biāo)討論，但關(guān)于MM 患者與兩指標(biāo)間關(guān)系的研究較少。本研究旨在研究S100A2、Blimp1在MM患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞（BMMNCS）中的表達(dá)水平及意義，以期為臨床治療提供案例依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月至2020年5月于河南省中醫(yī)院血液科治療的MM 患者82 例為觀察組（MM 患者），平均病程為（8.68±2.13）月，同期本科收治的單純貧血治療患者35 例為對(duì)照組，其中，輕度貧血20 例，中度貧血11 例，重度貧血4 例；缺鐵性貧血20 例，巨幼細(xì)胞性貧血7 例，再生障礙性貧血5 例，其他3 例。MM 分型為IgG 型43 例，IgA 型29 例，IgD 型6 例，IgM 型4 例。依據(jù)MM 的國際分期體系（ISS）［5］對(duì)患者進(jìn)行分期：Ⅰ期14 例，Ⅱ期22例，Ⅲ期46 例。兩組患者的一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均知情且簽訂同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南（2020年修訂）》［6］中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)骨髓細(xì)胞學(xué)檢查、病理檢查等確診為MM 患者②入組前未接受相關(guān)MM 治療方式；③對(duì)化療等無禁忌；④患者其它器官無嚴(yán)重病變；⑤治療依從性良好。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在其他免疫類疾病；②具有精神疾病、認(rèn)知障礙及溝通交流障礙患者；③非首次確診MM；④不愿意參與研究者；⑤中途退出者。

1.2 方法

兩組患者均保持良好休息、營養(yǎng)補(bǔ)充等常規(guī)治療。觀察組患者采用VAD 方案實(shí)施化療：長春新堿0.4 mg+多柔比星9 mg/m2，連續(xù)靜滴4 d，地塞米松40 mg/天口服，4 d 為1 個(gè)小療程，4 周為1 個(gè)大療程。入院后，第二日清晨采集兩組患者空腹靜脈血3～5 mL，使用EDTA 管并且加入肝素鈉進(jìn)行抗凝處理，分離患者BMMNCS，放置于-80℃的超低溫環(huán)境下。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)患者BMMNCS 中S100A2 表達(dá)水平，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（RT-PCR）檢測(cè)患者BMMNCS 中Blimp1 表達(dá)水平。試劑盒分別購至武漢伊萊瑞特生物科技有限公司與上海聯(lián)邁生物工程有限公司，操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用（）表示，兩組間采用t檢驗(yàn)，采用Pearson 相關(guān)性檢驗(yàn)分析MM 患者BMMNCS 中Blimp1、S100A2水平的相關(guān)性；采用受試者工作特征（ROC）曲線分析患者BMMNCS 中Blimp1、S100A2 表達(dá)水平及聯(lián)合指標(biāo)對(duì)發(fā)生MM 的預(yù)測(cè)價(jià)值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、吸煙史等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。觀察組患者S100A2表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Blimp1 表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general information between 2 groups（±s）

表1 兩組一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general information between 2 groups（±s）

組別觀察組對(duì)照組t 值P 值n 82 35年齡（年）70.98±5.22 71.56±5.35 0.546 0.586性別（男）45 23 1.183 0.277 BMI（kg/m2）23.32±3.22 23.48±3.36 0.243 0.808 S100A2（ng/mL）1.35±0.24 1.87±0.39 8.806＜0.001 Blimp1（相對(duì)比值）2.39±0.67 1.46±0.38 7.689＜0.001吸煙史（年）20.96±5.48 21.52±5.32 0.510 0.611

2.2 MM 病因的單因素分析

S100A2、Blimp1 表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 MM 患者病因的單因素分析（±s）Table 2 Single factor analysis of the etiology of MM patients（±s）

表2 MM 患者病因的單因素分析（±s）Table 2 Single factor analysis of the etiology of MM patients（±s）

組別觀察組對(duì)照組χ2值P 值n 82 35 S100A2（ng/mL）1.35±0.24 1.87±0.39 77.339＜0.001 Blimp1（相對(duì)比值）2.39±0.67 1.46±0.38 59.060＜0.001

2.3 MM 患者疾病發(fā)生影響因素的多因素Logistic 回歸分析

基于患者病因的單因素分析結(jié)果，以上述具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素為自變量，以是否發(fā)生MM 為因變量（發(fā)生組=1，未發(fā)生組=2），納入多項(xiàng)Logistic 回歸模型進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：S100A2、Blimp1 表達(dá)水平均為宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見表3。

表3 MM患者疾病發(fā)生影響因素的多因素Logistic回歸分析Table 3 Multivariate Logistic regression analysis of factors affecting the occurrence of MM patients

2.4 MM 患者BMMNCS 中S100A2 與Blimp1 的相關(guān)性

S100A2 表達(dá)水平與Blimp1 表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。

2.5 MM 患者BMMNCS 中S100A2 與Blimp1 的ROC 曲線

S100A2 預(yù)測(cè)MM 患者BMMNCS 中S100A2與Blimp1聯(lián)合指標(biāo)的曲線下面積為0.945，敏感度和特異度分別為0.971 與0.780 均高于單-檢測(cè)（P＜0.05）。見表4、圖1。

表4 分析S100A2 與Blimp1及聯(lián)合指標(biāo)預(yù)測(cè)價(jià)值Table 4 Analysis of the predicted value of S100A2 and Blimp1 and the combined index

圖1 ROC 曲線Figure1 ROC curves

3 結(jié)論

MM 是一種起源于B 細(xì)胞系的造血系統(tǒng)惡性腫瘤類疾病，特征為產(chǎn)生單克隆免疫球蛋白的異常漿細(xì)胞在骨髓內(nèi)發(fā)生惡性增殖。MM 患者90%以上發(fā)生過溶骨性骨疾病，徐珍珍等［7］的研究表明，其還可引起高鈣血癥、骨折等一系列骨相關(guān)疾病，王德印等［8］的研究對(duì)其病因進(jìn)行了深入分析，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。隨著新型化療藥物的研發(fā)及化療方式的進(jìn)步，MM 患者的生存質(zhì)量與五年生存率得到極大改善，但部分患者出現(xiàn)化療耐藥反應(yīng)導(dǎo)致綜合預(yù)后效果不佳。因此，深入探討MM 發(fā)病機(jī)制并在分子生物學(xué)及基因?qū)W領(lǐng)域?qū)ふ倚碌闹委煼较蛞殉蔀镸M 臨床研究的重點(diǎn)。

眾多研究［9-10］共同表明，S100 蛋白家族作為主要的鈣離子結(jié)合蛋白家族亞類，在調(diào)控細(xì)胞分化、細(xì)胞周期、鈣穩(wěn)態(tài)等過程中發(fā)揮重要作用，且參與調(diào)控多項(xiàng)生理病理過程。S100A2 是S100 家族重要成員，汪必成等［11］的研究表明，其在胰腺癌中呈表達(dá)水平異常，且在腫瘤發(fā)生及進(jìn)展期發(fā)揮重要作用。Blimp-1 是一種具有抑制β-干擾素分泌功能的轉(zhuǎn)錄因子，其存在一個(gè)重要的抑制基因叫做c-myc，它可以促進(jìn)細(xì)胞增值，并且阻斷細(xì)胞的終末分化。張倩男等［12］的研究表明，MM 患者機(jī)體的B 淋巴細(xì)胞發(fā)生了Blimp-1 的過早表達(dá)，這說明MM 患者漿細(xì)胞的異常應(yīng)從其前體細(xì)胞B 細(xì)胞階段開始。國外學(xué)者［13］研究表明，漿細(xì)胞的存活需要與特定的微環(huán)境密切互動(dòng)，該微環(huán)境由基質(zhì)細(xì)胞和造血起源的細(xì)胞組成，已經(jīng)顯示漿細(xì)胞通過釋放細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。漿細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化可導(dǎo)致MM 的產(chǎn)生，而Blimp-1 可調(diào)控漿細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄，同時(shí)促進(jìn)漿細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，并促進(jìn)B細(xì)胞向漿細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過程。

本次研究結(jié)果表明，S100A2、Blimp1 表達(dá)水平均為MM 發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。間接提示，S100A2 作為MM 發(fā)病過程的危險(xiǎn)因素，對(duì)于MM發(fā)病具有抑制作用；而MM 的發(fā)生導(dǎo)致其呈現(xiàn)低表達(dá)水平。本次研究結(jié)果表明，S100A2 表達(dá)水平與Blimp1 表達(dá)水平間呈顯著負(fù)相關(guān)。間接提示，S100A2 與Blimp1 的表達(dá)水平與MM 患者的BMMNCS 間存在中等相關(guān)性，并分別呈現(xiàn)低表達(dá)與高表達(dá)水平。另外，汪玉芳等［14］的研究表明，MM 患者漿細(xì)胞S100A2 呈低表達(dá)水平，S100A2 在肝癌、胃癌等惡性腫瘤中作為抑癌因子，而在胰腺癌、肺癌等中惡性腫瘤作為促癌因子，并推測(cè)S100A2 在MM 發(fā)病機(jī)制中可能為抑癌因子，這與本次研究結(jié)果一致。劉紅春等［15］的研究結(jié)果表明，MM 患者漿細(xì)胞Blimp1 呈高表達(dá)水平。這與本次研究結(jié)果一致。間接提示，S100A2、Blimp1 或可作為MM 的預(yù)測(cè)因子，且聯(lián)合指標(biāo)預(yù)測(cè)價(jià)值更高。

本研究的不足之處為，對(duì)于MM 患者骨髓微環(huán)境的研究，逐漸成為MM 新型藥物研究的方向。朱晶晶［16］的研究就表明，雙調(diào)蛋白（AREG）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、免疫抑制劑（PD-1）等物質(zhì)與MM患者骨髓微環(huán)境存在諸多聯(lián)系及反應(yīng)。而S100A2與Blimp1 表達(dá)水平與MM 患者的骨髓微環(huán)境間是否存在某種相關(guān)性，有待進(jìn)一步的研究討論。

綜上所述，S100A2、Blimp1 表達(dá)水平均可作為MM 發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且S100A2、Blimp1 表達(dá)水平均可作為MM 發(fā)生的預(yù)測(cè)因子，其中聯(lián)合指標(biāo)預(yù)測(cè)價(jià)值更高。