Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin免疫組化檢測在前列腺病理診斷中的價值

何進(jìn) 徐月 沈文婷

作者單位：南京醫(yī)科大學(xué)附屬江蘇盛澤醫(yī)院病理科，江蘇，蘇州215200

前列腺癌（prostatic cancer，PCa）是男性中高發(fā)的惡性腫瘤之一，其死亡率僅次于肺癌，嚴(yán)重危險全球男性的生命健康［1-2］。目前，對于前列腺癌的早期診斷主要包括血清前列腺特異性抗原（Prostate specific antigen，PSA）含量檢測、早期腫瘤穿刺活檢和病理診斷，很大程度提高前列腺癌檢出率［3-4］。但由于前列腺癌具有起病隱匿、發(fā)病早期癥狀不明顯、疾病早期發(fā)展慢等特點(diǎn)［5-6］，臨床上仍需進(jìn)一步提高檢出率，進(jìn)而達(dá)到早診斷，早治療的目的，提高前列腺癌患者生存率。隨著醫(yī)療和科技水平的發(fā)展，免疫組織化學(xué)技術(shù)（簡稱免疫組化）在腫瘤中的協(xié)助診斷得到越來越廣泛的應(yīng)用［7-9］。在本研究中，通過收集前列腺相關(guān)手術(shù)樣本，免疫組化檢測各樣本中相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)情況。探究免疫組化技術(shù)在前列腺癌病理診斷中的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集自2012年3月至2021年3月，南京醫(yī)科大學(xué)附屬江蘇盛澤醫(yī)院收治的行前列腺穿刺和電切活檢的患者190 例。其中良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）患者161 例，年齡為43～74 歲，平均年齡為（57.24±6.37）歲，患者血清PSA 含量均在0～10 μg/L 之間。前列腺癌患者29例，年齡為41～75 歲，平均年齡為（53.86±7.38）歲，所有患者血清PSA 含量均大于4 μg/L。患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①此前未經(jīng)任何前列腺相關(guān)藥物或化療等治療手段。②未合并其他原發(fā)性惡性腫瘤。③為何任何感染性疾病。④患者病歷資料完整。⑤自愿簽署知情同意書。患者排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并感染性疾病。②合并其他惡性腫瘤。③合并感染性疾病。④合并其他生殖系統(tǒng)相關(guān)的內(nèi)分泌疾病。⑤肝腎功能異常。⑥患者病歷資料不全。⑦未簽署或非自愿簽署知情同意書。所有患者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)院倫理委員會審批通過。

1.2 指標(biāo)檢測

檢測各穿刺活檢樣本中Ki67、p63、P504s、LIM激酶（LIM Kinase1，LIMK1）、絲切蛋白（Cofilin）的陽性檢出情況。收集患者穿刺活檢樣本，使用10%甲醛進(jìn)行固定，對組織進(jìn)行常規(guī)處理后進(jìn)行石蠟包埋。將制作好的蠟塊進(jìn)行切片，切片厚度為2 μm。對處理好的切片進(jìn)行免疫組化染色，見圖1。分別進(jìn)行Ki67（GT209402，基因科技（上海）股份有限公司）、p63（GM7247002，基因科技（上海）股份有限公司）、P504s（13H4，基因科技（上海）股份有限公司）、LIMK1（bs-2775R，北京博奧森生物技術(shù)有限公司）、Cofilin（bs-2759R，北京博奧森生物技術(shù)有限公司）一抗染色。以細(xì)胞核或胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為染色陽性。使用光學(xué)顯微鏡，隨機(jī)選取5 個視野進(jìn)行陽性細(xì)胞比例計數(shù)。當(dāng)陽性細(xì)胞比例大于10%，則認(rèn)定為表達(dá)陽性［7］。典型病例圖片見圖1。

圖1 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin免疫組化典型病例染色圖（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemical staining of Ki67，p63，P504S，LIMK1 and cofilin in typical cases（SP，×400）

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 20.0 進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；計數(shù)資料采用n（%）表示，組間樣本比較采用χ2檢驗；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 在不同樣本類型中的陽性檢出情況

和BPH 樣本相比，PCa 樣本中Ki67、P504s、LIMK1、Cofilin 陽性檢出率均顯著升高，p63 陽性檢出率顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 在不同樣本類型中的陽性檢出情況［n（%）］Table 1 positive detection of Ki67，p63，P504S，LIMK1 and cofilin in different sample types［n（%）］

2.2 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 陽性檢出率和前列腺癌臨床病例特征的關(guān)系

Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 陽性檢出率和患者年齡無關(guān)（P＞0.05），和前列腺體積、PSA 濃度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和Gleason 評分相關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 陽性檢出率和前列腺癌臨床病例特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between Ki67，p63，P504S，LIMK1，cofilin positive rate and clinical features of prostate cancer［n（%）］

3 討論

前列腺癌是嚴(yán)重威脅男性生命健康的癌癥之一［10］。我國男性前列腺癌發(fā)病率雖遠(yuǎn)低于西方國家，但由于飲食結(jié)構(gòu)的改變，人口老齡化等原因，我國前列腺癌發(fā)病率正逐年升高［11］。目前普遍認(rèn)可的前列腺癌診斷方式主要包括血清PSA 含量檢測、腫瘤穿刺活檢和病理診斷。但血清PSA 含量的檢測在早期前列腺癌診斷中具有較大的局限性，有可能造成患者生存獲益較小或過度治療等情況［12］。腫瘤穿刺活檢對腫瘤取樣部位、醫(yī)生的操作技術(shù)等均具有一定的要求［13］。并且由于前列腺癌的異質(zhì)性，病理早期可能不易發(fā)現(xiàn)前列腺癌細(xì)胞的典型診斷特點(diǎn)，進(jìn)而導(dǎo)致誤診或漏診等情況發(fā)生［14］。因此尋找更好的診斷手段有利于提高前列腺癌的早期診斷，并有利于提高患者的生存期，改善患者預(yù)后情況。

腫瘤穿刺活檢是確診前列腺癌的首選辦法，免疫組化技術(shù)檢測腫瘤相關(guān)標(biāo)志物，協(xié)助診斷腫瘤的早期病理診斷，目前在醫(yī)學(xué)上發(fā)展迅速［15］。Ki67 是反應(yīng)細(xì)胞增殖的核抗原，是反映細(xì)胞過度增殖的表達(dá)，其在正常組織中表達(dá)很低，在良性增生組織和癌組織中表達(dá)異常升高。且腫瘤分化程度越低，惡性程度越大，Ki67 則越強(qiáng)，其對腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。但僅通過檢測Ki67的表達(dá)判斷前列腺癌，會造成假陽性較高的情況［16］。p63 屬于p53 抑癌基因家族成員之一，可特異性標(biāo)記基底細(xì)胞，其在大多數(shù)前列腺良性增生或低級別上皮內(nèi)瘤中呈陽性表達(dá)，在高級別上皮內(nèi)瘤中p63 陽性表達(dá)成間斷性消失，在前列腺癌中絕大多數(shù)呈陰性表達(dá)。基底細(xì)胞消失是前列腺癌的重要依據(jù)，但由于p63 在基底細(xì)胞中呈間斷性表達(dá)，其陰性結(jié)果不能作為前列腺癌診斷的單獨(dú)因素，且p63 表達(dá)消失時間較長，不利于前列腺癌的早期診斷［17］。P504s 蛋白屬于細(xì)胞質(zhì)蛋白，在前列腺癌中表達(dá)升高，在前列腺癌診斷中具有非常重要的作用，但臨床上存在前列腺良性病變中P504s 表達(dá)陽性的情況，具有一定的假陽性情況［18］。目前臨床主要通過Ki67、p63、P504s聯(lián)合檢測進(jìn)行前列腺癌病理診斷，其聯(lián)合檢測可顯著提高臨床前列腺癌檢出率，但其靈敏度和特異性，以及在前列腺癌的早期診斷中仍存在一定局限。LIMK1 是一種絲氨酸-蘇氨酸蛋白，Cofilin 是一種肌動蛋白結(jié)合蛋白。LIMK1 和Cofilin 蛋白均在前列腺癌組織中表達(dá)升高［19］。本研究結(jié)果顯示，前列腺癌相關(guān)標(biāo)志物Ki67、P504s 在前列腺癌中的陽性檢出率遠(yuǎn)高于良性前列腺增生樣本，p63 陽性檢出率檢出低于良性前列腺增生樣本，這與先前的研究一致。LIMK1、Cofilin 在前列腺癌中的陽性檢出率顯著升高，且一定程度上高于Ki67、P504s 陽性檢出率。

提示聯(lián)合前列腺癌相關(guān)標(biāo)志物Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 的檢測，可顯著提高前列腺癌早期檢出率。同時將前列腺癌各樣本中前列腺癌相關(guān)標(biāo)志物Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 的陽性檢出情況和前列腺癌樣本臨床病例特征進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)Ki67、p63、P504s、LIMK1、Cofilin 的陽性檢出率和前列腺癌患者前列腺體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和Gleason 評分相關(guān)。進(jìn)一步提示可通過免疫組化技術(shù)檢測標(biāo)志物的表達(dá)，進(jìn)一步定位患者臨床分期，從而制定更合適的治療方案，提高前列腺癌患者治療獲益，改善前列腺癌預(yù)后生存情況。

綜上所述，免疫組化技術(shù)對前列腺癌標(biāo)志物的檢測對前列腺癌臨床診斷具有非常重要的意義。對腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測對提高臨床檢出率具有重要的價值。