RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP對口腔正畸治療中牙周病的診斷價值

閆利輝 陳卓 謝冰 姚海亮 張嫻 劉琳 武時謙 越楊

作者單位：鄭州大學附屬鄭州中心醫院口腔科，河南，鄭州450000

正畸治療有助于改善患者咬合關系，促進口腔生理功能恢復，可以幫助患者有效改善患者的牙周組織狀況，減輕患者的牙齒炎癥，增加患者牙齒的穩定程度，改變患者牙周袋深度，使患者牙周袋變淺，提升患者的牙齒美觀度以及牙齒功能，但在正畸治療的過程中，患者的牙周組織會出現改變，長期使用固定矯治器可能會增加牙齒清潔難度，改變口腔內環境，導致菌斑大量蓄積，進而引發患者機體自然產生一定程度的炎癥反應。同時正畸治療過程中，牙周組織的炎癥愈合更為緩慢，牙周纖維、牙槽骨的改建及牙齒的移動會加速牙周病情的發展［1-3］。相關研究顯示［4］，牙周局部微環境改變，可破壞核因子κB 受體活化因子配體（receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand，RANKL）/骨保護素（osteoprotegerin，OPG）平衡，引起牙槽骨吸收。單核細胞炎性蛋白-1α（Macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α）、胸腺基質淋巴細胞生成素（thymic stromal lymphopoietin，TSLP）均為趨化因子，在免疫炎癥反應中起著重要作用［5-6］。本研究嘗試探討RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 在牙周病正畸治療中診斷及轉歸中的應用價值，旨在為臨床診治提供一種新途徑。報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取鄭州大學附屬鄭州中心醫院口腔科2017年3月至2020年3月牙周病正畸治療患者24 例為A 組，牙周正常的30 例正畸患者作為B 組，其中女30 例，男24 例，年齡平均（22.49±1.60）歲；體質量指數平均（20.62±1.39）kg/m2；病程平均（15.19±1.36）m；納入標準：①年滿18 周歲，口腔衛生習慣良好，有良好的依從性；②全身狀況：營養正常，無糖尿病、心臟病、血液病、心腦血管疾病、免疫缺陷、骨質疏松等系統性疾病，無長期用藥史，女性非妊娠期；③既往史：無正畸治療史，無頜面部外傷史，無唇腭裂病史，無夜磨牙或緊咬牙習慣；無囊腫或腫瘤病變者，無牙體和根尖周病變者，無不良修復體；④研究對象均在同一位正畸醫師處采用相同的托槽矯治器進行正畸治療，口腔衛生維護習慣良好；⑤其中牙周炎患者為輕、中度慢性牙周炎：根據1999年牙周疾病新分類法診斷為輕中度慢性牙周炎。穩定期診斷標準［7］：患者能良好的自我控制菌斑無≥5 mm 牙周袋，附著喪失無增加，全口探診出血陽性位點在20%以下，牙松動度無增加，無溢膿，無創傷等。本院倫理委員會經審核評議同意本研究，研究對象均知情同意。

1.2 方法

兩組患者均給予基礎治療，保持兩組患者口腔衛生，兩組患者均分別于正畸治療前、治療1、3、6 個月后，先評估牙齦顏色，牙周探針檢查并記錄牙周探診深度（PD）、牙齦指數（Gingival index，GI）和菌斑指數（PLI）；所有研究對象均取6 顆指數牙（16、11、26、36、31、46）的近中頰位點，佩戴無菌手套，常規清除齦上菌斑、軟垢，隔濕，輕柔吹干，于受試牙近中頰位點插入濾紙條（2 mm×10 mm），遇輕微阻力時停止，30 s 后取出，若出現血液和唾液污染，則棄置不用，再取。將取完齦溝液后6 根吸潮紙尖置入原離心管稱重，減去原記錄重量即為齦溝液重量，按1 g/mL 換算成體積，收集后封閉離心管，放于-70℃低溫保存，注意上述采集過程均由同一操作者獨立完成。緩沖液浸潤齦溝液紙尖末端，12 000 r/min離心15 min，離心半徑10 cm，取上清液，采用上海滬震實業有限公司酶聯免疫吸附試驗試劑盒測定齦溝液RANKL、OPG、MIP-1α、TSLP水平，將試劑盒中標準液稀釋至10 μg/mL，取96 孔板每孔加入標準液0.1 mL，4℃條件下過夜；第2 d 加入待測樣品，5 000 r/min 離心5 min，去除濾紙條，保留上清液，37℃下孵育60 min，加入雙抗，再次孵育30 min，采用酶標儀測定450 nm 波長處光密度值。并計算RANKL/OPG。

1.3 統計學方法

使用SPSS 24.0 軟件進行統計分析，正態資料以（）表示，t檢驗；計數資料用n（%）表示、χ2檢驗；齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 相關性用Pearson 相關分析；齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平對牙周病的診斷價值用受試者工作特征（ROC）曲線分析。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組正畸治療前后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平

兩組正畸治療前、治療6 個月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組正畸治療1、3、6 個月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平呈先升高后降低趨勢，且均在正畸治療3 個月后達到最高峰（P＜0.05）；A 組正畸治療1、3 個月后RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平高于B 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組正畸治療前后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平比較（±s）Table 1 levels of RANKL/OPG and MIP-1α、TSLP in GCF before and after orthodontic treatment in 2 groups（±s）

表1 兩組正畸治療前后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平比較（±s）Table 1 levels of RANKL/OPG and MIP-1α、TSLP in GCF before and after orthodontic treatment in 2 groups（±s）

時間RANKL/OPG MIP-1α（ng/μL）TSLP（ng/mL）組別A 組B 組t 值P 值A 組B 組t 值P 值A 組B 組t 值P 值n 24 30 24 30 24 30正畸治療前0.57±0.10 0.55±0.12 0.654 0.516 4.76±0.71 4.52±0.66 1.284 0.205 4.04±0.67 3.85±0.62 1.080 0.285正畸治療1 個月后0.82±0.15 0.68±0.13 3.672 0.001 12.24±2.05 8.73±1.76 6.768＜0.001 6.29±1.28 5.11±1.14 3.579 0.001正畸治療3 個月后0.96±0.24 0.73±0.18 4.025＜0.001 20.16±4.27 13.29±3.08 6.864＜0.001 8.56±2.34 6.05±1.59 4.682＜0.001正畸治療6 個月后0.63±0.16 0.60±0.12 0.787 0.435 9.37±2.24 8.81±2.03 0.962 0.305 5.32±0.94 5.01±0.88 1.248 0.218

2.2 兩組正畸治療前后PLI、GI

兩組正畸治療前、治療6 個月后PLI、GI 差異無統計學意義（P＞0.05）；兩組正畸治療1、3、6 個月后PLI、GI 呈先升高后降低趨勢，且均在正畸治療3 個月后達到最高峰（P＜0.05）；A 組正畸治療1、3個月后PLI、GI 高于B 組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組正畸治療前后PLI、GI 比較（±s）Table 2 Comparison of PLI and GI between 2 groups before and after orthodontic treatment（±s）

指標PLI GI組別A 組B 組t 值P 值A 組B 組t 值P 值n 24 30 24 30正畸治療前1.03±0.15 1.01±0.13 0.525 0.602 0.40±0.13 0.38±0.12 0.587 0.560正畸治療1 個月后1.48±0.20 1.31±0.17 3.376 0.001 0.75±0.16 0.60±0.14 3.672 0.001正畸治療3 個月后2.06±0.41 1.53±0.28 5.632＜0.001 1.04±0.26 0.81±0.22 3.521 0.001正畸治療6 個月后1.22±0.23 1.17±0.19 0.875 0.386 0.57±0.15 0.53±0.11 1.130 0.264

2.3 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 相關性

因兩組齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP及PLI、GI 均于正畸治療3 個月后達到最高峰，故選擇該時間點做相關性。Pearson 相關性分析，正畸治療3 個月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 呈正相關（P＜0.05）。見表3。

表3 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 與PLI、GI 相關性Table 3 RANKL/OPG and MIP-1 in GCF α、Correlation of TSLP with PLI and GI

2.4 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平對牙周病的診斷價值

因兩組齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP均于正畸治療3 個月后達到最高峰，故選擇該時間點做診斷。ROC 曲線顯示，正畸治療3 個月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 診斷牙周病的曲線下面積（AUC）分別為0.735、0.871、0.824，聯合診斷的AUC 為0.907（P＜0.05）。見圖1。

圖1 齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP水平對牙周病的診斷價值Figure 1 Expression of RANKL/OPG and MIP-1 in gingival crevicular fluid α、Diagnostic value of TSLP level in periodontal disease

3 討論

RANKL、OPG 均為牙周炎牙槽骨吸收的重要調節因子，有學者指出，二者比值是評估慢性牙周炎牙槽骨吸收嚴重程度的客觀指標之一［8］。本研究數據表明，兩組正畸治療1 個月、3 個月后齦溝液中RANKL/OPG 均較治療前升高，但牙周病患者升高幅度高于正常正畸治療患者，結合黃俊紅等［9］、張瑞林等［10］研究考慮機制可能在于牙周病可加重牙周組織損傷程度，降低新骨形成能力，增加骨吸收活性，從而表現為RANKL/OPG 升高。另外，因兩組齦溝液中RANKL/OPG 于正畸治療3 個月后達到最高峰，故選擇此時間點分析上述指標對牙周病的診斷價值，結果顯示，當截斷值設定為0.87 時，正畸治療3 個月后齦溝液中RANKL/OPG 單一診斷牙周病的敏感度為80.00%，提示齦溝液中RANKL/OPG 具有成為診斷牙周病的敏感指標。

MIP-1α 是炎癥介質之一，可趨化單核巨噬細胞、T 淋巴細胞、樹突狀細胞及自然殺傷細胞，并可穿透血管內皮細胞，結合特異性受體，刺激炎性因子產生，發揮促炎作用［11］。TSLP 為一類白介素17樣因子，主要衍生于上皮細胞，通過TSLP 受體，可刺激樹突狀細胞表達，調控促炎因子水平，促使Th細胞亞群分化［12］。本研究通過對比研究可知，牙周病患者正畸治療1 個月、3 個月后齦溝液中MIP-1α、TSLP水平均高于正常正畸治療患者，結合黃懷榮等［13］、林浩［14］研究推測這可能是由于正畸治療可引起牙周病原菌大量堆積，刺激牙齦上皮細胞、成纖維細胞及炎癥期牙齦中肥大細胞，從而造成MIP-1α、TSLP 異常分泌，間接誘導CD4+T 細胞前體轉化，促進白三烯、花生四烯酸、白介素等炎性因子釋放，進而介導牙周炎性免疫反應。PLI、GI是評估牙周炎病情程度的重要牙周臨床指標［15］。本研究結果顯示，正畸治療3個月后齦溝液中MIP-1α、TSLP 與牙周病患者PLI、GI 均存在正相關關系，佐證了齦溝液中MIP-1α、TSLP對判斷牙周病炎癥程度亦具有一定價值。然而正畸治療3 個月后齦溝液中MIP-1α、TSLP 單一診斷牙周病敏感度較低，存在一定局限性，故本研究通過繪制聯合曲線發現，正畸治療3 個月后齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP聯合診斷牙周病AUC＞0.900。提示共同檢測齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP 有望為牙周病提供一種有效診斷手段，可幫助臨床醫生合理調整治療策略。

綜上所述，齦溝液中RANKL/OPG、MIP-1α、TSLP聯合可為臨床診斷口腔正畸治療中牙周病提供科學指導。但本研究樣本量小，且受年齡、力的作用點等因素影響，不用個體齦溝液中細胞因子水平差較大，研究結果可能存在一定偏移，今后需擴大樣本量，開展分子生物學及動物體內研究，進一步論證本研究結果。