功能性便秘患者腸道菌群分布特點

卜 佳，榮 芳（通訊作者），榮雨露，溫娟娟

（1 山西大同大學醫學院 山西 大同 037009）

（2 大同市第五人民醫院消化科 山西 大同 037009）

功能性便秘（FC）是一種常見的消化系統功能性疾病，臨床檢查無消化道器質性病變，患者出現糞便干結、排便困難、排便次數減少等癥狀，以60 歲以上老年人最為高發，發病率約為10%～20%[1]。FC 病程長，反復發作，長期發展可誘發結腸癌、心腦血管疾病等，嚴重影響患者健康。目前，臨床對FC 的發病機制尚無統一定論，一般包括胃腸功能動力不足、腸道菌群紊亂、內臟感覺神經障礙等，其中，腸道菌群紊亂是導致FC 的主要原因[2]。腸道菌群分為有益菌和有害菌2 個部分，正常情況下2 個菌群能夠維持平衡，以厭氧菌為主的腸道原籍菌（如雙歧桿菌、乳酸桿菌），可借助腸黏膜固有屏障和免疫系統，防止外籍菌的黏附。當平衡被打破，有益菌大量減少，有害菌大量繁殖，可引發FC[3]。因此，腸道菌群紊亂是FC 的重要發病原因，研究FC 與腸道菌群之間的關系至關重要。本文分析FC 的腸道菌群變化，現報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

將2020 年1 月—2021 年6 月我院消化內科治療的90 例FC 患者作為觀察組，男48 例，女42 例，年齡25 ～78 歲，平均年齡（48.6±11.2）歲；將同期90 例健康體檢者作為對照組，男47 例，女43 例，年齡23 ～76 歲，平均年齡（48.1±10.9）歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。納入標準：所有觀察組患者均確診為FC，至少25%的排便費力及不盡感、排便有肛門梗阻感和堵塞感、便質為干球糞或硬糞、需要手法輔助排便，每周排便＜3 次，癥狀持續≥6 個月，經B 超、CT、腸鏡等檢查無腸道器質性病變，血生化檢查肝腎功能、電解質、血常規均正常；排除標準：近3個月內使用過抗生素及其他可導致便秘的藥物、合并腸道器質性病變、嚴重內分泌和代謝性疾病等。

1.2 方法

兩組分別留取新鮮糞便樣本，采用16 S rRNA 細菌檢測技術鑒定腸道菌群。將新鮮糞便200 mg 置于無菌離心管中，采用Powerfecal DNA Isolation K i 試劑盒，進行基因組DNA 抽提，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA。根據乳桿菌、雙歧桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的16 S rDNA 基因序列設計PCR 引物，進行熒光定量PCR反應[4]。反應體系共20 FL，上、下游引物各1 μL，反應共40 個循環，將擴增產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，AxyPrep DNA 凝膠回收試劑盒（AXYGEN 公司）切膠回收PCR 產物，Tris-HCl 洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測進行純化回收，測定純化產物吸光度值及濃度，換算為各標準品1 yL 的拷貝數用于制作標準曲線。使用系統軟件自動分析循環閾值（Ct）與標準曲線，計算乳桿菌、雙歧桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的拷貝數，結果用lg CFU/g 濕便表示[5]。

1.3 觀察指標

記錄雙歧桿菌、乳桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的數量；統計放線菌門、變形菌門相對豐度；將觀察組分為輕、中度（50 例）、重度（40 例），分析雙歧桿菌、乳桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌的數量。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件，計量資料以均數±標準差（± s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料以率[n（%）]表示，兩組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 兩組腸道菌群數量比較

觀察組雙歧桿菌、乳桿菌數量均顯著低于對照組，大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌數量顯著高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組腸道菌群數量比較（± s, lg CFU/g）

表1 兩組腸道菌群數量比較（± s, lg CFU/g）

組別 例數雙歧桿菌乳桿菌大腸埃希菌觀察組 908.46±0.928.09±0.858.67±0.79對照組 909.59±0.989.02±0.947.24±0.72 t 3.1063.0723.014 P＜0.05＜0.05＜0.05組別 例數梭桿菌腸球菌觀察組 9010.01±0.927.96±1.14對照組 907.70±0.866.83±1.03 t 4.0133.175 P＜0.05＜0.05

2.2 兩組放線菌門、變形菌門相對豐度比較

觀察組放線菌門相對豐度顯著高于對照組，而變形菌門相對豐度顯著低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組放線菌門、變形菌門相對豐度比較（± s）

表2 兩組放線菌門、變形菌門相對豐度比較（± s）

組別例數放線菌門變形菌門觀察組900.06±0.020.05±0.02對照組900.01±0.000.14±0.05 t 3.0523.418 P＜0.05＜0.05

2.3 觀察組中不同病情嚴重程度的腸道菌群數量比較

輕、中度患者的雙歧桿菌、乳桿菌數量均明顯高于重度患者，大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌數量明顯低于重度患者，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 觀察組中不同病情嚴重程度的腸道菌群數量比較（± s, lg CFU/g）

表3 觀察組中不同病情嚴重程度的腸道菌群數量比較（± s, lg CFU/g）

病情嚴重程度 例數雙歧桿菌乳桿菌大腸埃希菌輕、中度508.67±0.908.22±0.877.76±0.79重度407.78±0.827.49±0.768.82±0.81 t 3.0793.0243.148 P＜0.05＜0.05＜0.05病情嚴重程度 例數梭桿菌腸球菌輕、中度509.89±0.889.80±1.12重度4010.72±0.9310.69±1.24 t 3.0653.073 P＜0.05＜0.05

3.討論

目前，FC 患者腸道微生態情況日益受到臨床關注。臨床發現，FC 不僅與腸道動力、生理功能改變、機體解剖結構等有關，而且與腸道微生態紊亂密切相關。正常情況下，腸道內的有益菌和有害菌能維持平衡，相互制約，維持腸道功能的正常運轉[6]。當腸道功能發生異常，有益菌與有害菌之間的平衡被打破，可明顯減少有益菌數量，增加有害菌數量，導致腸道菌群紊亂。臨床研究證實，腸道菌群失調可破壞腸道動力，而恢復腸道菌群平衡有助于改善腸道動力，減少便秘的發生[7]。這主要是由于部分菌株的代謝產物，如短鏈脂肪酸，二氧化碳、甲烷等氣體，可刺激腸道蠕動，降低腸道內pH 值，增加腸道平滑肌運動幅度，縮短腸道轉運時間。因此，研究FC 與腸道菌群的關系有重要的臨床意義。

雙歧桿菌和乳桿菌是主要的有益菌。雙歧桿菌具有增強人體免疫、促進營養物質吸收、抗感染、抗腫瘤、清除內毒素等作用，可抑制有害菌的生長繁殖及酵解，直接刺激腸道蠕動，加快糞便在腸道內的推進速度。并能促進多種維生素的合成，提高糖類、蛋白質的吸收及代謝能力，改善便秘癥狀。某些雙歧桿菌合成的小分子量親脂性分子還具有抗菌活性，發揮殺滅細菌的作用。乳桿菌的菌群分類十分復雜，與健康關系密切。乳桿菌可直接抑制有害菌的生長繁殖，增加有益菌數量，減少內毒素的產生，促進腸胃蠕動，強化胃腸道功能。同時，乳桿菌在腸道內發酵可產生維生素B 族，增強機體健康。

腸球菌、腸桿菌屬于中性菌，具有雙重作用，正常情況下對機體有益，若增殖失控或轉移到其他部位，可引發諸多問題。這類細菌以糞便為食物，增殖失控可使腸道內有害菌大量聚集，使便質干燥、變硬，最終引發便秘。梭桿菌是一種厭氧芽孢菌，是常見有害菌，可在腸道內分解蛋白質，產生氨、胺類、吲哚等有害物質，可破壞腸道健康。大腸埃希菌是常見致病菌，其數量增加，也表明腸道內有害菌明顯增加，可抑制有益菌的生長繁殖，造成腸道菌群紊亂。

本文結果顯示，觀察組雙歧桿菌、乳桿菌、大腸埃希菌、梭桿菌、腸球菌數量均與對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。進一步證實了FC 患者存在腸道菌群紊亂，而針對性使用微生態制劑治療能促進腸道菌群恢復平衡，改善腸道動力，治療FC。

綜上所述，FC 的腸道菌群紊亂，需要行微生態制劑治療以恢復腸道菌群平衡。