超高效液相色譜-串聯質譜法測定動物源基質中地塞米松的殘留量

楊毅青 王莉佳 馬增輝 王祺

摘 要：目的：建立超高效液相色譜-串聯質譜法測定牛奶和雞蛋不同基質中地塞米松殘留量的分析方法。方法：樣品經乙酸-乙酸鈉和甲醇溶液提取，固相萃取柱凈化后，以甲醇-0.1%甲酸溶液為流動相進行梯度洗脫，采用電噴霧負離子模式電離，多反應監測（MRM）模式進行采集，內標法定量。結果：地塞米松在0～

44.191 4 ng/mL范圍內線性關系良好，相關系數r為0.999 9，平均回收率為70.53%～118.25%，RSD為3.5%～7.0%。結論：該方法快捷、簡便、回收率高，重現性好，可用于不同動物源基質中地塞米松的殘留量分析。

關鍵詞：地塞米松;超高效液相色譜-串聯質譜法;動物源性食品

Determination of Dexamethasone Residues in Animal Matrix by High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

YANG Yiqing， WANG Lijia， MA Zenghui， WANG Qi

（Shanxi Institute for Food and Drug Control， Taiyuan 030001， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of dexamethasone residues in milk and eggs by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）. Methods： The samples were extracted by acetic acid-sodium acetate and methanol solution， purified by spe column， and eluted by gradient elution with methanol-0.1% formic acid solution as mobile phase. The samples were ionized by electrospray ionization in negative ion mode， and collected by multiple reaction monitoring （MRM） mode， and quantified by internal standard method. Results： Dexamethasone had a good linear relationship in the range 0～44.191 4 ng/mL ， the correlation coefficient （r） was 0.999 9. The recoveries were 70.53%～118.25%， and with the relative standard deviations （RSD） of 3.5%～7.0%. Conclusion： This method is rapid， simple， good recovery and good reproducibility， which is suitable for rapid determination of dexamethasone residues in different substrates of animal origin.

Keywords： dexamethasone; ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; animal derived food

地塞米松又名氟美松、氟甲強地松龍、德沙美松，是糖皮質類激素。其衍生物有氫化可的松、潑尼松等，其藥理作用主要是抗炎、抗毒、抗過敏、抗風濕，臨床使用較廣泛[1-2]。而在獸醫治療中被廣泛應用于治療母畜代謝病，是畜禽飼養中普遍的藥物之一[3]。激素的頻繁使用會在畜禽體內殘留，不僅給動物源食品安全帶來隱患，而且對人們的健康及環境危害嚴重[4]。因此，世界各國嚴格禁止地塞米松作為生長激素使用，且限制該藥物用于動物源性食品中，并提出了嚴格的限量要求[5]。

目前，國內外有關地塞米松殘留的檢測方法較多，主要采用酶聯免疫法、液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、超液相色譜-串聯質譜法、氣質聯用法等。本研究參照國家標準GB/T 21981—2008[6]，建立了一種快捷、簡便、回收率好的超高效液相色譜-串聯質譜法快速檢測不同動物源基質中地塞米松殘留量的方法，為快速高效檢測動物源性食品中地塞米松的殘留提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 試驗樣品

新鮮牛奶、雞蛋，均購置于某超市。

1.1.2 主要試劑

地塞米松標準品（中國食品藥品檢定研究院，含量99.8%）;氫化可的松-d3（阿爾塔科技有限公司，含量98.0%）;甲醇、二氯甲烷、甲酸（美國Fisher公司，色譜純）;乙酸、乙酸鈉（NaAC·4H2O）（國藥集團，分析純）;β-葡萄糖醛酸酶4.5 U/mL（德國默克公司）;實驗室一級超純水。ENVI-Carb固相萃取柱（500 mg/6 mL）和氨基固相萃取柱（500 mg/6 mL）（艾杰爾科技公司）。

1.1.3 儀器與設備

LCMS-8050液質聯用儀（日本島津公司）;UB-7pH計（丹佛儀器）;V2S025渦旋混合器（德國ZKA）;HC-3018離心機（安徽中科中佳科學儀器）;氮吹濃縮儀（天津安特塞恩斯）。

1.2 試驗方法

1.2.1 液相條件

色譜柱：YMC C18（100 mm×2.1 mm，3 ?m）;流動相：0.1%甲酸水溶液+甲醇溶液，梯度洗脫，見表1;流速：0.2 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：10 ?L。

1.2.2 質譜條件

離子化模式：ESI-;質譜掃描模式：多反應檢測（MRM）;電噴霧電壓：-3 000 V;離子源溫度：300 ℃;加熱氣流量：10 L/min;干燥氣流量：10 L/min;輔助氣壓力：60 psi;其他質譜參數見表2。

1.2.3 提取與凈化

稱取均質試樣5 g，置于50 mL離心管中，準確加入內標工作液100 ?L和10 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，渦旋混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶100 ?L，于（37±1）℃振蕩酶解12 h。取出冷卻至室溫，加入25 mL甲醇超聲提取30 min，0～4 ℃下，10 000 r/min離心10 min。將上清液轉入潔凈燒杯，加水100 mL，混勻后待凈化。

依次用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液，6 mL甲醇，6 mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱。提取液以2～3 mL/min的速度上樣于活化過的ENVI-Carb固相萃取柱。將小柱減壓抽干。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液活化氨基固相萃取住。將活化好的氨基柱串聯在ENVI-Carb固相萃取柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，取下ENVI-Carb柱，再用2 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗氨基柱，洗脫液在微弱的氮氣流下吹干，用1 mL甲醇-水溶液溶解殘渣，供儀器測定。用空白樣品，不加入內標，按上述步驟制備空白樣品提取液。

1.2.4 標準溶液配制

（1）標準儲備溶液。地塞米松標準品稱量前于105 ℃干燥箱干燥至恒重，經折算相當于11.0479 mg地塞米松的標準品，用甲醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得濃度為110.479 0 ?g/mL的標準儲備液。此儲備液可在-18 ℃以下避光存放12個月。

（2）內標工作液。取適量氫化可的松-d3內標溶液，配制出濃度為100 ng/mL的內標工作液。

（3）標準工作中間液。取適量地塞米松標準儲備溶液配制成濃度為1.1047 9 μg/mL的標準工作中間液。

（4）標準工作液。取適量標準儲備溶液配制得濃度為110.479 0 ng/mL的標準工作液。

1.2.5 系列標準工作溶液配制

分別取標準工作中間液0 mL、0.015 mL、0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL和0.400 mL，用甲醇定容至10 mL，配制成系列標準工作溶液。標準工作液中含內標濃度為10 ng/mL。

2 結果與分析

2.1 線性關系及定量限

以地塞米松的定量離子峰面積與內標峰面積的比值為縱坐標（y），相應的質量濃度為橫坐標（x），繪制標準曲線，得出該樣品在0～44.191 4 ng/mL濃度范圍內的線性方程為y=0.204 1x-0.027 6，相關系數r=0.999 9，線性良好。取空白樣品按照方法定量限（濃度為0.4 ?g/kg）水平進行加標試驗，制備好的試樣溶液上機測定，信噪比大于10，滿足檢測要求。

2.2 回收率和重復性

取空白樣品，添加不同濃度的地塞米松標準溶液進行加標回收試驗，其余操作同上述供試品溶液制備，每個濃度平行測定6次，計算加標回收率和重復性RSD，結果見表3。（牛奶和雞蛋的方法定量限為0.4 ?g/kg;最高殘留限量分別為0.3 ?g/kg和不得檢出）。

3 結論

本研究通過對不同基質中地塞米松殘留量進行質譜分析，建立了超高效液相色譜-質譜聯用檢測方法，能同時快速檢測出牛奶和雞蛋不同基質中添加的地塞米松殘留量，并從線性關系、重復性、回收率、精密度等方面對方法進行了考察，結果表明，該方法測定動物源食品中的地塞米松殘留量，方法穩定，數據可靠，為研究動物源食品地塞米松殘留量的檢測提供了一定的參考依據。

參考文獻

[1]鄭宇瀟.地塞米松在臨床腫瘤治療中的應用進展[J].醫學綜述，2019，25（17）：3491-3496.

[2]GUILLAUME B，KARINE B，VIRGINIE M，et al.Preparation and physicochemical stability of liquid oral dosage forms free of potentially harmful excipient designed for pediatric patients[J].Pharmaceutics，2019，11（4）：190.

[3]王永娟，朱善元，劉博，等.地塞米松促進豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病性[J].江蘇農業科學，2016，44（7）：293-295.

[4]周軍，李紅斌，李睿鴻.濫用抗生素對養豬業的危害及應對措施[J].當代畜禽養殖業，2011（6）：44-47.

[5]林維宣.各國食品中農藥獸藥殘留限量規定[M].大連：大連海事大學出版社，2003.

[6]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，國家質量監督檢驗檢疫總局.動物源食品中激素多殘留檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法：GB/T 21981—2008[S].北京：中國標準出版社，2008.