MicroRNA-146a在膿毒癥并發心肌功能損傷中的表達和意義

金少峰，周奮，毛海燕

（寧波市醫療中心李惠利醫院，浙江 寧波 315041）

膿毒癥患者細胞因子、免疫和內皮細胞相互作用，出現微循環紊亂導致器官功能障礙甚至衰竭[1]。MicroRNAs是一種非編碼的12-23個核苷酸RNA分子，通過與靶信使RNA結合調控轉錄后基因表達。MicroRNA-146a是MicroRNAs家族中的一員，MicroRNA-146a的表達影響許多生物系統，包括哺乳動物的免疫系統和心血管系統[2]。有研究報道[3]，MicroRNA-146a表達的增加可以保護心肌免受菌血癥導致的心功能障礙，減少心肌巨噬細胞和中性粒細胞的浸潤。本研究探討MicroRNA-146a與膿毒癥患者心肌功能損傷的相關性，為治療提供思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年3月-2020年12月本院膿毒癥心肌功能損傷患者50例為心肌功能損傷組，選取同期50例膿毒癥但無心肌功能損傷的患者作為膿毒癥組。納入標準：（1）年齡18-65歲；（2）心功能損傷組心臟左室射血分數≤50%。排除標準：（1）肝腎功能不全；（2）有原發或繼發的心、腦、肺功能不全；（3）臨床資料不全；（4）既往心肌功能有損傷如存在BNP增高等。兩組性別、年齡等一般資料差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。本研究通過本院倫理委員會批準且患者知情同意。

表1 兩組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 采集患者外周血5mL放入抗凝管中，5mL放入離心管中，在4℃條件下3500r/min離心15分鐘，吸取血漿和血清，置于-80℃保存，待用。

1.2.2 提取血漿RNA 采用Ambion RNA試劑盒（Thermo Scientific公司，美國）提取血漿中的RNA，根據試劑盒說明書操作，NanoDrop微量分光光度計（Thermo Scientific公司，美國）測量RNA的濃度檢測。采用逆轉錄RNA試劑（Hifair?Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR）測量miRNA的逆轉錄，根據試劑盒說明書操作，提取cDNA放置在-20℃保存待測。

1.2.3 qRT-PCR檢測 待測樣本的PCR反應體系如表 2， 反應條件設置為 94℃（2 分鐘）、94℃（10 秒）；60℃（15秒）、72℃（30秒），40 個循環，實驗根據試劑盒說明書操作。qRT-PCR檢測反復進行3次。詳見表2。

表2 實時熒光定量PCR反應體系

1.3 觀察指標 兩組血清MicroRNA-146a的表達；心功能指標，包括左心室射血分數（LVEF）、每搏排血量（SV）、心臟指數（CI）；心肌損傷標志物，包括 B 型利鈉肽（BNP）、心肌鈣蛋白 T（CT-nT）；炎性因子（TNF-α、IL-10、CRP）。

1.4 統計學處理 采用SPSS 20.0對數據進行分析統計。計量資料以（±s）表示，采用 t檢驗；MicroRNA-146a與膿毒癥患者各指標的相關性采用χ2相關分析。

2 結果

2.1 MicroRNA-146a表達 心肌功能損傷組MicroRNA-146a 相對表達水平（52.21±10.63）高于膿毒癥組（3.01±1.12），差異有統計學意義（P＜0.01）。

2.2 心功能 心肌功能損傷組LVEF、SV和CI低于膿毒癥組，差異均有統計學意義（P＜0.01）。詳見表3。

表3 兩組心功能比較（±s）

表3 兩組心功能比較（±s）

與膿毒癥組比較**P＜0.01

組別 n LVEF（%） SV（mL） CI（L/min·m2）膿毒癥組 50 58.18±5.13 68.24±7.07 3.78±1.02心肌功能損傷組 50 40.24±4.02** 56.01±4.79** 1.54±0.52**

2.3 心肌損傷標志物 心肌功能損傷組的BNP、CT-nT和CRP均高于膿毒癥組，差異均有統計學意義（P＜0.01）。詳見表 4。

表4 兩組心肌損傷標志物比較（±s）

表4 兩組心肌損傷標志物比較（±s）

與膿毒癥組比較**P＜0.01

組別 n BNP(ng/mL) CT-nT(pg/mL)膿毒癥組 50 38.53±8.51 23.27±8.13心肌功能損傷組 50 245.42±67.16** 532.78±53.72**

2.4 炎性因子 心肌功能損傷組TNF-α、IL-10及CRP高于膿毒癥組，差異均有統計學意義（P＜0.01）。 詳見表 5。

表5 兩組炎性因子水平比較（±s）

表5 兩組炎性因子水平比較（±s）

與膿毒癥組比較**P＜0.01

組別 n TNF-α（pg/mL） IL-10（pg/mL） CRP（mg/mL）膿毒癥組 50 9.07±4.12 10.76±3.09 5.85±2.31心肌功能損傷組 50 189.22±35.32** 98.22±16.72** 90.42±23.16**

2.5 相關性分析 MicroRNA-146a的表達量與BNP、CT-nT和炎性因子TNF-α、CRP呈正相關性（r=0.857、0.822、0.912、0.893；均 P＜0.01）；與 LVEF、SV、CI負相關（r=-0.473、-0.643、-0.783；均 P＜0.01）。MicroRNA-146a的表達量與炎性因子IL-10水平無相關性。

3 討論

心血管系統對miRNAs的水平變化非常敏感，組織中miRNAs表達失調與心血管疾病直接相關[4]。MicroRNA-146a最初被確定為先天免疫和炎癥反應中的負調控因子，由TLRs介導[5]。LPS和細胞因子刺激THP-1細胞可顯著增加成熟MicroRNA-146a的表達[6]，在LPS的作用下心肌細胞和巨噬細胞中MicroRNA-146a的表達增加。膿毒癥心肌功能損傷與心肌缺血及心力衰竭的指標BNP、CT-nT等有關[7]。本文檢測了研究對象的炎性因子水平和心肌功能指標，發現心肌功能損傷組的MicroRNA-146a高于對膿毒癥組，炎性因子、心肌損傷標志物水平也高于膿毒癥組，而心功能指示低于膿毒癥組。相關性分析發現，MicroRNA-146a與心肌功能損傷指標（BNP、CT-nT）以及炎性因子（TNF-α、CRP）呈正相關，與 LVEF、SV、CI呈負相關，說明血清MicroRNA-146a可以作為膿毒癥患者心肌功能損傷的預測指標。其他報道也證實了血清MicroRNA-146a與心肌功能損傷密切相關，促進心肌細胞凋亡、心肌纖維化和冠狀動脈斑塊的形成[8]。膿毒癥是一種由細菌感染引起的全身炎癥綜合征，可導致多器官功能衰竭的疾病，尤其是心臟功能損傷是膿毒癥常見的并發癥，嚴重可引起心律失常和心力衰竭[9]。膿毒癥的主要炎性介質 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10等，它們由巨噬細胞和單核細胞分泌，負責感染性級聯反應的放大，已被證明可引起發燒、低血壓和心肌抑制[10]。在嚴重的膿毒癥中，持續的全身性炎癥可將穩定的動脈粥樣硬化斑塊轉變為不穩定的斑塊，導致斑塊破裂或中風。有研究報道，將心肌細胞暴露于促炎性細胞因子（如TNF-α，IL-1β和IL-6），促炎性細胞因子的急性釋放在心肌細胞抑制中扮演重要角色[11]。心肌損傷后的膿毒癥患者其炎性因子水平升高加劇，影響患者預后。

綜上，MicroRNA-146a可作為膿毒癥伴心肌功能損傷的判斷指標，有利于膿毒癥的臨床研究。