探究不同處理方法清除軟式內(nèi)鏡生物膜的效果

彭顯茜

（鄭州人民醫(yī)院南部院，河南 鄭州450000）

0 引言

軟式內(nèi)鏡，通常指的是消化內(nèi)鏡或是呼吸內(nèi)鏡，近年來(lái)廣泛應(yīng)用于臨床，且數(shù)量持續(xù)走高。但在進(jìn)行軟式內(nèi)鏡檢查的過(guò)程中，也可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)交叉污染而引發(fā)醫(yī)院感染，造成這一現(xiàn)象的原因，主要是由于內(nèi)鏡早使用的過(guò)程中可能接觸到消化道的細(xì)菌，以及胃道之中分泌的黏液[1]。且軟式內(nèi)鏡結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜、材質(zhì)較為特殊，大部分無(wú)法耐受高溫消毒的操作，因而其使用后進(jìn)行清洗消毒工作的難度也有顯著提升。本次研究主要探究重復(fù)使用的軟式內(nèi)鏡生物膜應(yīng)用不同處理方法的清除效果。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2020年5月至2021年4月期間內(nèi)鏡中心使用的內(nèi)鏡胃鏡以及腸鏡，共660件，其中包含390件胃鏡、270件腸鏡。將其隨機(jī)均分為2組，分別應(yīng)用常規(guī)過(guò)氧乙酸處理以及戊二醛消毒劑處理，配套使用的內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)器為全自動(dòng)消化內(nèi)鏡消毒機(jī)，人工生物膜顯示細(xì)菌為細(xì)菌銅綠假單胞菌，所用培養(yǎng)基及其試劑均為國(guó)內(nèi)市售產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 軟式內(nèi)鏡污染生物膜

依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 15982-2012），對(duì)進(jìn)行消毒或是滅菌處理后的內(nèi)鏡進(jìn)行檢測(cè)，采用無(wú)菌注射液抽取含有中和劑的采樣液約40-60mL，并經(jīng)內(nèi)鏡活檢管道進(jìn)行諸如，同時(shí)采用100mL的無(wú)菌藍(lán)蓋試劑瓶對(duì)采樣液進(jìn)行收集，對(duì)其中菌落計(jì)數(shù)進(jìn)行記錄，記為α；另采用一次性無(wú)菌內(nèi)鏡刷對(duì)內(nèi)鏡腔面反復(fù)刷洗，隨后將刷頭放置于無(wú)菌藍(lán)蓋試劑瓶之中，另抽取含有中和劑的采樣液約40-60mL，對(duì)其中菌落計(jì)數(shù)進(jìn)行記錄，記為β。如若α值為0，未檢出細(xì)菌，則表示消毒檢測(cè)合格，如若α合格但β值相較于α值有顯著提升，則說(shuō)明內(nèi)鏡腔體之中有生物膜形成。

1.2.2 清除軟式內(nèi)鏡生物膜效果

將1.2.1檢驗(yàn)結(jié)果之中感染生物膜的內(nèi)鏡進(jìn)行分組，分別應(yīng)用一元過(guò)氧乙酸以及戊二醛消毒劑進(jìn)行清洗消毒，并探究其清除效果。其中參照組應(yīng)用多酶清洗液聯(lián)合戊二醛消毒劑對(duì)軟式內(nèi)鏡生物膜進(jìn)行清除，研究組則使用多酶清洗液聯(lián)合一元過(guò)氧乙酸對(duì)其進(jìn)行清除。兩組均經(jīng)《軟式內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)規(guī)范》（WS 507-2016）之中的要求進(jìn)行軟式生物內(nèi)鏡生物膜處理，連續(xù)使用14d后，經(jīng)1.2.1的方法進(jìn)行采樣，檢測(cè)內(nèi)鏡是否污染生物膜，評(píng)價(jià)兩種方法對(duì)生物膜的預(yù)防控制效果。

1.3 觀察指標(biāo)

不同清洗消毒方法清除生物膜的效果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)值變量、無(wú)序分類資料以（±s）、%表示，t、檢驗(yàn)；組間對(duì)比以P=0.05為界值，P＜0.05則表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 軟式內(nèi)鏡生物膜感染情況

消毒水平：所有內(nèi)鏡均經(jīng)常規(guī)高水平消毒后，對(duì)其進(jìn)行消毒效果檢測(cè)，結(jié)果顯示，消毒合格率為100%。

生物膜檢測(cè)：采用一次性無(wú)菌刷對(duì)軟式內(nèi)鏡進(jìn)行反復(fù)刷洗10次后，將刷頭進(jìn)行保留并通過(guò)隨機(jī)取樣法進(jìn)行采樣，共抽取198件進(jìn)行監(jiān)測(cè)（包含117件胃鏡以及81件腸鏡），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌落指標(biāo)超出常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)的有63件，占比27.27%。。

去除內(nèi)鏡生物膜試驗(yàn)：參照組31件存在生物膜的樣本，采用多酶清洗液聯(lián)合戊二醛消毒劑清除方式，研究組32件存在生物膜的樣本則使用多酶清洗液聯(lián)合一元過(guò)氧乙酸方式，2種方式均經(jīng)指導(dǎo)下進(jìn)行6個(gè)循環(huán)，確保去除污染的生物膜，并對(duì)其進(jìn)行2次鑒定后，將其菌落計(jì)數(shù)記為β1。由此可以得出生物膜效果可以通過(guò)清除率進(jìn)行表示，清除率為（β-β1）/β*100%，其中（β-β1）代表的含義為生物膜中細(xì)菌清除數(shù)量，經(jīng)對(duì)比分析后發(fā)現(xiàn)，研究組清除率為96.88%，相較于參照組80.65%具有顯著優(yōu)勢(shì)（4.119，P=0.040＜0.05），差顯著具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明一元過(guò)氧乙酸可以有效去除內(nèi)鏡管腔生物膜，效果相較于戊二醛有顯著優(yōu)勢(shì)。

2.2 長(zhǎng)期使用的抑制作用

經(jīng)高水平消毒后，將菌落計(jì)數(shù)記為α，另采用采用一次性無(wú)菌刷對(duì)軟式內(nèi)鏡進(jìn)行反復(fù)刷洗10次后，將刷頭進(jìn)行采樣后得到的菌落計(jì)數(shù)記為β，2種數(shù)據(jù)之間呈現(xiàn)偏態(tài)分布的情況，因而本次研究之中另采用獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)對(duì)2組的α值、β值進(jìn)行檢驗(yàn)。研究組與參照組分別使用一元過(guò)氧乙酸以及戊二醛進(jìn)行連續(xù)消毒14d后，菌落計(jì)數(shù)均有顯著下降。但通過(guò)秩和檢驗(yàn)，對(duì)2組內(nèi)鏡消毒后的菌落計(jì)數(shù)進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)差異具備較為顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，該結(jié)果充分說(shuō)明一元過(guò)氧乙酸對(duì)內(nèi)鏡的消毒效果優(yōu)于戊二醛且經(jīng)過(guò)生物膜檢測(cè)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)一元過(guò)氧乙酸組內(nèi)鏡β值均＜20CFU/件，而戊二醛組的均值則高達(dá)89CFU/件，通過(guò)秩和檢驗(yàn)對(duì)一元過(guò)氧乙酸和戊二醛兩組的菌落計(jì)數(shù)β值進(jìn)行對(duì)比，充分證明了一元過(guò)氧乙酸可有效去除內(nèi)鏡管腔形成的生物膜，相較于戊二醛有顯著優(yōu)勢(shì)，差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

隨著內(nèi)鏡診療應(yīng)用逐漸廣泛，內(nèi)鏡消毒質(zhì)量問(wèn)題也逐漸受到臨床重視。軟式內(nèi)鏡管腔較為狹小，清洗效果并不十分良好，該材質(zhì)往往不耐高溫或是高壓，因而大部分軟式內(nèi)鏡無(wú)法接受高溫高壓消毒。在此情況下，可能導(dǎo)致很多消化道之中的細(xì)菌、黏液、組織、血液甚至是糞便等殘留于管腔之中。在對(duì)其進(jìn)行清理的過(guò)程中，往往需要通過(guò)毛刷，對(duì)內(nèi)鏡管腔進(jìn)行反復(fù)刷洗，但僅通過(guò)流動(dòng)水或是常規(guī)清潔劑、消毒劑進(jìn)行沖洗，并不足以將內(nèi)鏡管腔沉積的物質(zhì)進(jìn)行清除[2]。以往研究之中發(fā)現(xiàn)，即便是通過(guò)無(wú)菌毛刷對(duì)內(nèi)腔鏡進(jìn)行反復(fù)沖洗后，仍舊可能存在腔鏡生物膜污染風(fēng)險(xiǎn)，本次研究之中的結(jié)果也充分證實(shí)了這一結(jié)果，同時(shí)該結(jié)果可能導(dǎo)致高水平消毒后，監(jiān)測(cè)采樣的結(jié)果成纖維假陰性，不利于后續(xù)研究的開(kāi)展。

內(nèi)鏡生物膜的形成主要受到多種因素的影響，包括未及時(shí)進(jìn)行內(nèi)鏡預(yù)處理或是內(nèi)鏡手工清洗不到位，如若內(nèi)鏡使用后并未30min內(nèi)進(jìn)行預(yù)處理，則可能導(dǎo)致生物膜的形成，需要進(jìn)行強(qiáng)化手工清洗。如若內(nèi)鏡存留的污染物大小較大，則可能導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)消毒劑的消毒情況產(chǎn)生一定抵御效果，導(dǎo)致消毒效果并不十分強(qiáng)。如若一旦形成生物膜，則可能導(dǎo)致消毒劑的作用減小至1/1000左右，由此可見(jiàn)，生物膜是導(dǎo)致軟式內(nèi)鏡消毒滅菌失敗最為重要的原因，因而臨床之中尋找一種較為高效的生物膜去除方式，是當(dāng)前內(nèi)鏡診療、消毒工作較為重視的工作。近年來(lái)，如何清除軟式內(nèi)鏡生物膜已經(jīng)逐漸成為內(nèi)鏡診療之中需要直面的問(wèn)題，臨床既往的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)乙酰半胱氨酸能夠起到較好的抗菌且對(duì)生物膜造成破壞的效果，因而如若在臨床之中在軟式內(nèi)鏡進(jìn)行清洗前，使用乙酰R半胱氨酸進(jìn)行浸泡，能夠更好地降低細(xì)菌含量，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)菌落數(shù)目有顯著降低。當(dāng)前條件下生產(chǎn)的生物膜清洗劑，能夠保障生物膜與水進(jìn)行較為緊密的結(jié)合，充分保障水流動(dòng)或是生物膜清洗劑流動(dòng)的情況下，將生物膜帶動(dòng)，并將其中的菌落以及有機(jī)物急性較為全面的分解，充分保障殺菌效果的提升[3]。而在銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、分枝桿菌形成的生物膜時(shí)，臨床研究之中發(fā)現(xiàn)，鄰苯二甲醛以及過(guò)氧乙酸的清除效果相較于戊二醛更為顯著。同時(shí)如若構(gòu)建3中內(nèi)鏡生物膜模型，分別使用上述消毒劑進(jìn)行殺菌、消毒，能夠得出與上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同的結(jié)論，且如若對(duì)溫度條件進(jìn)行控制，還能夠發(fā)現(xiàn)，溫度越高，則清洗劑對(duì)生物膜的清除率越高，如若溫度超過(guò)40℃，則各類清洗劑的生物膜清除率均超過(guò)95%。

本次研究主要對(duì)比內(nèi)鏡專用過(guò)氧乙酸與戊二醛清除生物膜的效果，研究結(jié)果說(shuō)明研究組一元過(guò)氧乙酸的清除生物膜的效果較好，且內(nèi)鏡消毒效果也較為突出，并無(wú)細(xì)菌檢出，在6循環(huán)后生物膜清除率達(dá)到95%以上，相較于參照組戊二醛的生物膜清除效果與消毒效果，具備顯著優(yōu)勢(shì)（P＜0.05）。分析其原因，主要是由于過(guò)氧乙酸能夠更好地殺滅多種微生物，主要包括真菌、細(xì)菌、病毒和芽孢等，其應(yīng)用效果較好。生物膜主要指的是依附于內(nèi)鏡管腔之中的表面被細(xì)菌胞外大分子包裹的有組織的細(xì)菌群體，隨著臨床醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，導(dǎo)尿管、動(dòng)靜脈導(dǎo)管甚至是人工支架等表面均有生物膜形成的可能，該情況會(huì)導(dǎo)致醫(yī)院感染率有顯著提升。且如若生物膜形成，會(huì)使得細(xì)菌的耐藥性大幅提升，在生物膜存在的前提下，抗菌藥物往往無(wú)法更好地滲透，導(dǎo)致滲透不全或是滲透緩慢等情況發(fā)生。生物膜之中的細(xì)菌微環(huán)境發(fā)生改變，對(duì)抗菌藥物的敏感性逐漸減弱，同時(shí)如若部分基因，誘導(dǎo)生物膜逐漸變厚，可能導(dǎo)致其更加適應(yīng)環(huán)境、更為難以進(jìn)行治療。當(dāng)前臨床之中主要通過(guò)超聲、機(jī)械摩擦、點(diǎn)擊等方式對(duì)生物膜進(jìn)行去除，也可利用噬菌體穿透細(xì)菌細(xì)胞膜繁殖的特性控制生物膜，部分細(xì)菌真菌等微生物可以分QS酰基高絲氨酸內(nèi)酯、蔗糖脂肪酸、多糖解聚酶、酯酶抑制生物膜的形成，或者使用金屬離子、光敏劑、抗菌生物材料、藥物等防治生物膜。本次研究之中還發(fā)現(xiàn)，且經(jīng)連續(xù)14d的使用后，研究組的所有內(nèi)鏡均未二次形成生物膜，對(duì)其菌落計(jì)數(shù)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果相較于參照組同樣具備顯著優(yōu)勢(shì)，差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。該結(jié)果充分證明了一元過(guò)氧乙酸的應(yīng)用效果，同時(shí)臨床之中對(duì)于生物耐藥機(jī)制以及對(duì)其進(jìn)行預(yù)防控制方式的研究不斷深入，日后研究之中能夠取得更為良好的進(jìn)展。

總而言之，內(nèi)鏡應(yīng)經(jīng)過(guò)徹底的清洗才能夠接受有效的消毒，如若長(zhǎng)期未得到及時(shí)有效的清洗會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌滋生，逐漸對(duì)消毒劑的殺菌作用產(chǎn)生抵抗。因而在進(jìn)行內(nèi)鏡消毒前應(yīng)對(duì)其進(jìn)行徹底的清洗，并使用一元過(guò)氧乙酸進(jìn)行消毒。該消毒方式能夠更好地保障軟式內(nèi)鏡生物膜的清除效果，同時(shí)在實(shí)際應(yīng)用中進(jìn)行長(zhǎng)期使用，能夠充分抑制內(nèi)鏡生物膜的形成，保障患者檢查過(guò)程中的安全性，應(yīng)用效果良好，值得進(jìn)行臨床推廣應(yīng)用。連續(xù)使用一元過(guò)氧乙酸14天后，并未再次形成生物膜，更好地保障了一元過(guò)氧乙酸消毒液的應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)如若想要徹底消除軟式內(nèi)鏡管道內(nèi)的生物膜，盡可能選擇一元過(guò)氧乙酸并采取手工刷洗的方式，充分保障消毒效果，利于患者檢查過(guò)后院內(nèi)感染率的降低。