梔子中梔子苷的研究進展

劉 聃，劉鳳英，黃 穎，段艷輝，鄧愛華

（1.湖南文理學院 芙蓉學院，湖南 常德415000；2.湖南文理學院 地理科學與旅游學院，湖南 常德415000）

梔子是茜草科植物山梔子的干燥成熟果實，主要生長在我國長江中下游地域，江西、湖南是梔子分布的大省，浙江、福建、廣東等地區也有少數分布[1]。梔子具有清熱、瀉火、涼血等藥用功效，能夠抗炎鎮痛、保肝利膽，對消化體系、呼吸體系、心血管體系等有關的疾病均有藥理作用。在中國，研究人員發現梔子中含有40余種生理活性物質，其中主要為環烯醚萜類和揮發油類物質，藥典中認為中藥梔子中最有效的成分是環烯醚萜類物質[2-3]，而梔子苷為梔子中活性最高的物質之一。近年來，隨著社會進步和科學技術的不斷發展，醫學設施逐漸完善，現代醫學和藥理研究技術得到了提高，梔子的藥理作用和功效被逐漸發現并運用于臨床治療，對醫學界具有重要意義。

1 梔子的主要化學成分

1.1 環烯醚類

梔子中含量較高是環烯醚萜類化合物，該物質對酸較為敏感，易被酸水解。廖輝等人[1]在梔子中提取出5個環烯醚帖苷，經鑒定發現，這5個是母核相同的閉環環烯醚帖苷，能夠在皮革、絲綢、毛等蛋白質纖維上進行染色。相關研究表明，環烯醚萜類化合物能夠運用在工業生產方面。梔子苷屬環烯醚萜物質，又名京尼平苷，在梔子中的含量較高，杜仲、肉蓯蓉、衛矛、香鱗毛蕨、牛膝和青牛膽等植物中也有發現。

1.2 有機酸酯類

梔子中的有機酸脂類物質較多，其中常見的有綠原酸和熊果酸。He W等人[3]用HPLC-DAD-MS方法從梔子中提取出9種化合物，經過研究發現，其中為6種綠原酸異構體（綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C），其他為藏紅花素與京尼平苷。而綠原酸中的咖啡酰奎尼酸與異綠原酸中的二咖啡酰奎尼酸對自由基的清除起主導作用。

1.3 色素類

梔子苷中含有紅紫藍3種色素，可以用于衣服著色，當作染料；在不同條件下，也可將提取的梔子紅、梔子藍、梔子紫用于食物加工、化妝品的制作等行業。梔子中提取梔子黃色素的提取率較高，梔子黃色素是良好的黃色素，具有較高的應用價值。湯興俊等人[4]發現梔子系列色素具有抑菌功效，可以廣泛用于食品添加領域。抑菌試驗發現梔子黃色素、梔子紅色素和梔子藍色素都具有抑制革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌生長的功能，如枯草芽孢桿菌、變形桿菌。基于該抑菌功能，具備紅、黃、綠3種基色的天然梔子系列色素，可以作為調配任意顏色的食品添加劑，同時對食物也起到抑菌防腐的作用。因此，既可以用于制備抑菌劑，也可以用作防腐劑[5-6]。

2 梔子苷的藥理作用

2.1 抗炎鎮痛

梔子苷具有較強的抗炎鎮痛作用，這是較早發現的梔子苷藥理作用之一。楊宇等人[7]嘗試用小鼠醋酸扭體法、小鼠熱板法研究梔子苷的鎮痛作用，發現梔子苷可以延長熱刺激而致使小鼠疼痛的時間縮短，也可以顯著抑制由醋酸導致的扭轉次數。試驗研究了阿片受體、NO與梔子苷的鎮痛作用是否有關系，發現阿片受體拮抗藥能夠拮抗梔子苷的鎮痛作用，而鎮痛作用與NO的釋放有較密切的關系。

2.2 保護心腦血管

梔子苷可以保護心腦血管。丁嵩濤等人[8]使用H2O2為氧化劑創建HUVEC細胞氧化硬損傷模型，對梔子苷是否具備保護氧化應激損傷的細胞功能進行試驗。經試驗分析發現，梔子苷可以增添細胞內抗氧化體系的活性，調節細胞內NOS活性，促進NO生成恢復正常水平，從而增進細胞內血管增殖的作用。推測可能因為綜合作用，使得梔子苷能夠起到保護心腦血管的作用，而這一潛在的功能為治療肝硬化有關的疾病提供了依據。

2.3 治療脂肪肝

梔子苷具備醫治脂肪肝的作用，梔子苷通過降低血清和肝組織中的TG含量，抑制血清ALT，AST活性的升高，從而實現治療脂肪肝的功效。陳少東等人[9]采用經高脂飲食誘導的脂肪肝金黃地鼠進行試驗，證實了梔子苷所制備的藥物確實具有這一用途，發明了梔子苷在制備治療脂肪肝藥物的應用專利。

2.4 降低血糖

日本學者Kimura發現梔子苷具備治療糖尿病及并發癥的功能。糖尿病是一種因為血糖太高而引發的慢性高血糖代謝病，容易引發并發癥。通過對前脂肪細胞消耗試驗，發現梔子苷可以促進前脂肪細胞對葡萄糖的吸收。小鼠荷瘤試驗、四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的試驗與PPARy進一步探究，發現梔子苷在體內外的降糖活性，且首次發現梔子苷具有激活PPARy受體的活性，但對梔子苷是否能夠對胰島細胞進行保護與分泌作用還需進一步試驗。梔子苷的降血糖及改善糖尿病癥狀的作用，為糖尿病的進一步醫治提供了新思路。

3 梔子苷的提取方法

3.1 浸漬法

浸漬法是利用相似相溶原理提取出相應的功效成分，包括乙醇提取法、乙醚提取法、水提取法等，而水提取法提取出的雜質較多。杜守穎等人[10]為優選梔子藥材的提取工藝采用了直接比較法（水煎煮法、70%乙醇回流提取、70%乙醇滲漉提取）。結果表明，水煎法提取率較高，考慮多方面因素影響，水煎法提取作為進一步純化梔子苷的最佳提取工藝。

3.2 超聲波輔助提取法

超聲波輔助提取技術是利用超聲波的空化作用和機械振動擊碎等效應，使梔子與提取劑充分接觸、混合，迅速擴散以提取其有效成分。由于傳統的提取方法提取率溶劑損耗大、提取時間較長等缺點，歐陽薇等人[11]探究超聲波提取法最佳優化條件，通過采用Box-behnken響應面法進行工藝優化，分析梔子苷提取率的回歸方程，得出最佳提取條件為：超聲功率750.87 W，提取時間46.57 min，溶劑質量分數52.06%溶劑體積（料液比）1∶64.59（g∶mL），梔子苷提取率為36.16 mg/g。該結果具有較高的實用值，對工業生產具有指導意義。

3.3 微波輔助提取法

微波輔助提取法是利用電磁場的作用，使固體或半固體物質中的某些有機物成分與機體有效的分離，并能維持分析對象的原本化合物狀態的一種分離方法。為了探索梔子有效成分提取的最佳條件，秦秀蓉等人[12]采取正交試驗法來篩選提取梔子苷的最佳條件，通過考查藥材的粉碎度、微波加熱時間、提取次數3個因素，得出了最佳條件為粗顆粒，加熱時間20 min，提取次數2次。微波萃取的分離方法與常規的水煮法相比，有效提取了梔子中的梔子苷成分，且提取率高、時間短。

3.4 生物酶法

生物酶法是采用酶反應的專一性，將底物與之對應的苷鍵水解開，從而獲取相應的成分。生物酶法提取梔子相關成分常與浸提法等方法相輔助，將提取之后的成分進行水解獲得單體或其他衍生物，如提取梔子苷（京尼平）等成分。近年來，纖維素酶廣泛運用在各個領域，如化工、食品及天然產物提取等。趙伯濤等人[13]通過色譜法與高效液相色譜法對梔子苷的酶解反應進行檢測，確定了葡萄糖糖苷酶水解梔子苷的最適條件。

4 梔子苷的純化方法

4.1 氧化鋁吸附法

氧化鋁吸附法的基本原理是水合氧化鋁在活化時迅速脫水，活化后又可以可逆吸水，這種吸附是一種物理吸附過程。林璐等人[14]通過比較水煎煮法與乙醇回流法，發現用70%乙醇提取梔子苷提取的含量較大，且雜質較少。通過正交試驗法確定梔子苷的提取工藝，最后用Al2O3純化梔子苷。用中性三氧化二鋁純化的梔子苷達18%，為工業發展提供了依據。丁越等人[15]通過氧化鋁柱層析制備高純度梔子苷，研究發現最佳工藝條件為適量層析用中性氧化鋁（100～200目），徑高比為5∶1，梔子苷粗提物的上樣量為氧化鋁用量的1/30，95%乙醇沖洗氧化鋁柱，洗脫液用量為60倍柱體積，該工藝可用于制備質量分數高于90%的梔子苷。

4.2 大孔樹脂分離法

大孔樹脂分離法是一種用大孔樹脂作為支持劑的分離方法，可分為陽離子大孔樹脂法和陰離子大孔樹脂法。涂盛輝等人[16]用乙酸乙酯提取出梔子苷的粗提取液，通過樹脂靜態吸附試驗來選擇能最佳制出梔子苷的吸附樹脂，再通過樹脂動態吸附試驗來選擇最適宜的吸附流速。經過對比分析后，選用了HPD-100樹脂進行后續的動態試驗，得出用30%乙醇水溶液在吸附流速2.0 mL/min吸附，低流速1.0 mL/min洗脫為最佳條件。使用該方法純化的梔子苷含量高達90%以上，方法穩定可行。彭柳等人[17]用大孔樹脂分離純化梔子提取液中梔子苷，最佳純化條件為樣品質量濃度為20.00 g/L，溫度25℃，pH值5.0，洗脫劑為60%乙醇，動態吸附流速2.0 BV/h，樣品溶液上樣量3.0 BV，動態洗脫流速3.0 BV/h，洗脫劑用量7.5 BV。丁玲等人[18]用SP825型大孔樹脂對梔子苷的吸附性能進行考查，得出最佳吸附條件為上樣液質量濃度83 g/L，pH值2.79，最大吸附量247 mg/g，可以確定梔子苷的吸附過程為自發放熱反應，且低溫有利于吸附，吸附速率主要由液膜擴散控制。

5 梔子苷的檢測方法

5.1 硅膠色譜法

楊小軍等人[19]用RP-HPLC法測定防風通圣丸中梔子苷、芍藥苷、黃芩苷、大黃素的含量，用Zorbax Eclipse XDB-C18鍵合硅膠色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相為乙腈-2%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長為240 nm，梔子苷進樣量在0.056～0.56 g范圍內線性關系良好（R=0.999 7），平均加樣回收率為99.14%，該方法操作簡單、快速、靈敏、精密度高、重現性良好、結果準確。

5.2 高效液相色譜法

何峰等人[20]用HPLC法測定梔子提取物中梔子苷的含量，通過研究試液前處理方法、色譜條件、專屬性試驗和線性關系等，考查檢測方法的精密度、重復性、穩定性、加樣回收率和樣品測定等結果分析，確定色譜柱C18柱（250 mm×4.6 mm×5 μm），柱溫40℃，流動相為甲醇-0.05%磷酸（25∶75），流速為1.0 mL/min，檢測波長238 nm，進樣量10 μL時，梔子苷在24.6～98.4 mg/mL范圍內線性關系良好（R=0.999 7），平均回收率為99.1%（RSD=0.69%）。

5.3 免疫學分析法

高效液相色譜法難以滿足大樣量的研究要求，研究人員建立了梔子苷定量分析的免疫學分析方法，建立該法的第一步要成功合成梔子苷的人工合成抗原。屈會化等人[21]采用高碘酸鈉氧化法制備了梔子苷免疫抗原（GEN-BSA）和包被抗原（GEN-PLL），為下一步梔子苷克隆抗體進行準備。免疫學分析法是在抗原與抗體的特異性與敏感性的基礎上進行的，比較其他方法，具有靈敏度較高、特異性強、對測定結果檢測分析影響小等優點，對梔子苷的定量分析檢測具有較大的意義，且具有廣泛的應用前景。

6 結語

梔子苷具有許多的藥理作用，近年來其相關的研究報道呈上升趨勢，但很多停留在機制的研究階段，應用比較少。目前，市場上的梔子苷產品大部分以中藥復方為主，以梔子苷單體為主要有效成分的成品少見。究其原因可能是梔子苷的油水分配系數較小，全腸吸收較差，需通過復方改善其吸收。不過，可在不改變梔子苷藥效的情況下，采用先進的制劑技術，如將其制成β-環糊精包合物、磷脂復合物等，改善其生物利用度，甚至還可提高藥效。隨著現代醫學和藥理學研究水平的不斷提高，梔子中更多的藥理作用和有效成分將會被開發和利用，為臨床應用和一些新藥的開發提供理論依據。