梔子果實性狀、化學成分與其消炎利膽作用的關系研究

吳先昊，鄧紹勇，王小青，趙詩云，李康琴，虞金寶

梔子果實性狀、化學成分與其消炎利膽作用的關系研究

吳先昊1，鄧紹勇2*，王小青1，趙詩云1，李康琴2，虞金寶1

1. 江西省中醫藥研究院，江西 南昌 330046 2. 江西省林業科學院，江西 南昌 330032

比較不同類型梔子外觀性狀、化學成分、消炎利膽作用3者之間的聯系。觀察并測量不同類型梔子的外觀性狀；采用高效液相色譜（HPLC）法檢測不同類型梔子中梔子苷和西紅花苷I含量；考察不同類型梔子對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響；考察不同類型梔子對高脂飼料喂養大鼠膽汁分泌、膽汁中總膽紅素及總膽汁酸含量的影響；比較不同類型梔子的藥效差異及與梔子大小、梔子苷及西紅花苷I含量之間的聯系。西紅花苷I含量與單果質量、果大小指標呈顯著正相關，西紅花苷I含量、單果質量、果大小與小鼠耳廓腫脹抑制率呈顯著負相關，與大鼠膽汁流量、總膽汁酸及總膽紅素含量呈負相關，梔子苷含量的高低與其藥理作用沒有顯著的關聯性。不同類型梔子的大小和質量差異與其藥理作用具有一定的關聯性，梔子“以圓小、皮薄、飽滿者為佳”在現代藥理實驗中得到映證，具有一定的科學意義，可以為優良梔子藥材資源的選擇提供科學依據。

梔子；消炎利膽；藥效；果實性狀；西紅花苷I；梔子苷

梔子Ellis是茜草科梔子屬常綠灌木，其干燥果實是中藥材和天然色素原料，具有保肝、抗炎、鎮痛及改善心腦血管病等藥理作用[1-3]。梔子性味苦、寒，入心、肝、肺、三焦經，有瀉火除煩、清熱利濕、涼血散瘀的功效，廣泛應用于各類中藥處方中。梔子在長期的栽培利用過程中，其果實的形狀、大小等性狀發生了豐富的變異，形成了諸多穩定的變異類型[4-5]。不同類型的梔子除了組織形態的差異之外[6]，其所含化學成分種類及含量也有很大差別，且主要活性成分與外觀形態有關[7-8]，大果型的水梔子果實中含梔子苷、藏紅花素等成分均高出普通梔子很多[9]，梔子主要利膽成分為梔子苷。以經驗積累總結的古代本草著作認為梔子“以圓小、皮薄、飽滿者為佳”，大果型的水梔子“只供染色之需”、“入藥無力”。劉淼琴[7]研究認為圓而小的梔子環烯醚萜類成分高，大而長的梔子色素類成分高，“以圓小、皮薄、飽滿者為佳”具有科學意義。周素文等[10]對水梔子與山梔子的藥理作用進行了比較，發現大果的水梔子在降壓、鎮靜、降溫、抑菌、消炎、抗驚等方面作用與小果的山梔子作用相似，但不具有利膽作用。而付小梅等[9]的研究卻發現水梔子具有顯著地促進大鼠膽汁分泌和抑制二甲苯致炎小鼠耳腫脹的作用，表明其與山梔子一樣具有利膽抗炎作用，且利膽作用較山梔子更強。可見，不同研究者對不同類型梔子藥理作用的研究結論不盡相同，甚至完全相反。為探討梔子化學成分含量及藥理作用與形態大小的相關關系，本研究對不同類型梔子在不同劑量下對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹抑制率以及膽囊炎模型大鼠膽汁流量、總膽紅素和總膽汁酸含量等藥理作用指標進行了分析比較，并對不同類型梔子單果質量、果實大小、果形態與梔子苷、西紅花苷I含量與小鼠耳廓腫脹抑制率、大鼠總膽紅素及總膽汁酸含量和大鼠膽汁流量進行了相關性分析。以期為不同果實類型梔子藥效的比較研究及優良梔子藥材資源的選擇提供科學依據。

1 材料

1.1 動物

SPF級昆明種小鼠，6周齡，體質量（20±2）g，雌雄各半；SPF級SD大鼠，體質量（200±20）g，雌雄各半。以上動物均購自江西中醫藥大學實驗動物中心，動物許可證號SCXK（贛）2018-0003。動物飼養于江西中醫藥大學SPF級動物房，使用許可證號SYXK（贛）2017-0004，人工控制光照（光照時間9: 00～21: 00），溫度（23±2）℃，濕度40%～70%。動物實驗經江西省中醫藥研究院實驗動物倫理委員會批準（批準號2019306）。

1.2 藥品與試劑

不同類型梔子（I～VII）均來源于江西省林業科學院中藥資源圃人工培育，由該院鄧紹勇副研究員鑒定為梔子Ellis的不同類型；地塞米松磷酸鈉注射液（國藥準字H41020330，批號1903151）購自河南潤弘制藥股份有限公司；二甲苯（批號0902092）購自汕頭西隴化工廠有限公司；0.9%氯化鈉溶液（批號D19091506）購自四川科倫藥業股份有限公司；總膽紅素檢測試劑盒（批號20200319）總膽汁酸檢測試劑盒（批號20200409）購自南京建成生物工程研究所有限公司；梔子苷對照品（質量分數≥97.5%，批號QUVP-7MYM）購自中國食品藥品檢定研究院；西紅花苷I對照品（質量分數≥98%，批號P26J10F91588）購自上海源葉生物科技有限公司；色譜級甲醇、色譜級乙腈、分析級甲酸購自津大茂化學試劑廠；分析級乙醇購自天津恒興化學試劑制造有限公司。

1.3 儀器

AG-135型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；EPOCH型酶標儀[寶特（北京）科技有限公司]；ST16型離心機（美國Thermo Fisher Scientific公司）；2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；HH-S6型電熱恒溫水浴鍋（金壇市恒豐儀器廠）；PS-20A型超聲波清洗儀（潔康有限公司）。

2 方法

2.1 不同類型梔子樣品外觀性狀的測定

隨機抽取成熟并干燥的10個完整果實作為不同類型梔子樣品外觀性狀的測量材料，使用游標卡尺測量果實果身部分的長和最寬處寬，最終取10次觀測結果的平均數。用電子天平稱定不同類型梔子樣品百粒質量并計算出平均單果質量。

2.2 梔子水提取物的制備

稱取不同類型梔子各500 g，分別置于煎鍋內，加入3.5 L水，浸泡1 h，加熱進行頭煎，保持微沸30 min，趁熱倒出藥液；再次加入1.5 L水，加熱進行二煎，保持微沸20 min，趁熱倒出藥液；合并2次煎液，加熱濃縮至500 mL。

2.3 不同類型梔子對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的抑制作用

2.3.1 分組及給藥 取昆明種小鼠160只，適應性喂養1周后，根據體質量和性別隨機分為模型組、地塞米松（5 mg/kg）組及梔子I高、低劑量組及梔子II高、低劑量組及梔子III高、低劑量組及梔子IV高、低劑量組及梔子V高、低劑量組，梔子VI高、低劑量組和梔子VII高、低劑量組（其中高劑量組為12 g生藥/kg，低劑量組為6 g生藥/kg），每組10只。不同類型梔子組ig相應藥物（20 mL/kg），模型組ig飲用水，1次/d，連續7 d；地塞米松組ig飲用水，第7天ip地塞米松磷酸鈉注射液（10 mL/kg）。

2.3.2 二甲苯致小鼠耳廓腫脹炎癥模型建立及抗炎指標的測定 末次給藥30 min后，各組小鼠右耳兩側涂抹二甲苯，50 μL/只，建立小鼠耳廓腫脹炎癥模型，左耳不作任何處理為非致炎耳。造模30 min后將動物處死，用直徑8 mm的打孔器在相同部位分別鑿出相同大小的耳片，用電子天平分別稱定質量，記錄耳片質量，并計算腫脹度和腫脹抑制率[11]。

腫脹度＝右耳質量－左耳質量

腫脹抑制率＝(模型組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度

2.4 不同類型梔子對大鼠膽汁排泄、膽汁中總膽紅素及總膽汁酸含量的影響

2.4.1 分組及給藥 取SD大鼠136只，適應性喂養1周后，對照組喂以普通飼料，高脂飼料組連續喂以高脂飼料8周，喂養至第5周時，將高脂飼料組隨機分為模型組、消炎利膽片（0.45 g/kg）組及梔子I高、低劑量組及梔子II高、低劑量組及梔子III高、低劑量組及梔子IV高、低劑量組及梔子V高、低劑量組及梔子VI高、低劑量組和梔子VII高、低劑量組（其中高劑量組為6 g生藥/kg，低劑量組為3 g生藥/kg），每組8只，雌雄各半。利膽消炎片組和不同類型梔子組ig相應藥物（20 mL/kg），對照組和模型組ig等體積0.9%氯化鈉溶液，1次/d，連續4周[12]。

2.4.2 大鼠膽汁排泄及膽汁中總膽紅素和總膽汁酸含量的測定 實驗第8周，大鼠禁食不禁水12 h，ip烏來糖麻醉，仰位固定于固定板上，沿腹正中線切開約2 cm開腹，找到胃幽門部，翻轉十二指腸，在十二指腸降部腸系膜中找到黃色有韌性的膽管，在其下穿兩根絲線，結扎乳頭部，向肝臟方向作“V”形切口，插入引流管，見有淡黃綠色膽汁流出，結扎固定引流管。手術后用止血鉗夾閉腹壁，以浸0.9%氯化鈉溶液的紗布覆蓋，待穩定30 min后，收集30 min膽汁，然后各組大鼠分別自十二指腸進行末次給藥，此后每隔1 h自十二指腸給予5%葡萄糖鹽水（5 mL/kg）1次，每隔30 min收集膽汁1次，共3 h，記錄膽汁流量。將3 h內收集到的膽汁按試劑盒說明書測定總膽紅素及總膽汁酸含量（根據預實驗結果，總膽汁酸的測定需將膽汁稀釋100倍后檢測）。

2.5 不同類型梔子中梔子苷和西紅花苷I的含量測定

梔子苷和西紅花苷I對照品溶液的配制方法、供試品溶液的配制方法、高效液相色譜法測定梔子中梔子苷和西紅花苷I的色譜條件、對照品標準曲線的繪制等均參照鄧紹勇等[13]的方法。

2.6 數據分析

3 結果

3.1 不同類型梔子干果單果質量、果實大小及化學成分含量

對不同類型梔子干果單果質量、果實長、果實寬、長寬比及化學成分含量等指標進行檢測，結果見表1。梔子類型I為水梔子類型，果實最大；類型VI、VII果實中等大小，類型II、III、IV、V則為小果類型；梔子苷質量分數最高的為類型V，最低的為類型III，但均高于《中國藥典》2020年版標準；西紅花苷I質量分數最高的為類型I，最低的為類型III。

表1 不同類型梔子干果單果質量、果實大小及化學成分含量

3.2 不同類型梔子對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

如表2所示，與模型組比較，地塞米松組小鼠耳廓腫脹度明顯降低（＜0.01）；梔子II高劑量組，梔子III高、低劑量組，梔子IV高劑量組、梔子V高劑量組、梔子VII高劑量組小鼠耳廓腫脹度明顯降低（＜0.05、0.01）。

3.3 不同類型梔子對大鼠膽汁排泄的影響

如表3所示，與對照組比較，模型組大鼠膽汁流量在各時間段均明顯增多（＜0.05、0.01），其中在30、60、120 min時間段膽汁流量增加更明顯；與模型組比較，利膽消炎片組大鼠各時間段的膽汁流量均明顯增加（＜0.01）；梔子III高劑量組、梔子IV高劑量組、梔子V高劑量組大鼠膽汁流量在各時間段均明顯增多（＜0.01）；梔子III低劑量組在150、180 min時間段，膽汁分泌量明顯增多（＜0.01）；梔子V低劑量組在30、60 min時間段膽汁分泌量明顯增多（＜0.01）；梔子II高劑量組在120 min時間段膽汁流量明顯增多（＜0.05）；梔子VII低劑量組在90、120 min時間段膽汁分泌量明顯減少（＜0.05）。

表2 不同類型梔子對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(, n = 10)

與模型組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01model group

表3 不同類型梔子對高脂喂養的大鼠膽汁流量的影響(, n = 8)

與對照組比較：*＜0.05**＜0.01；與模型組比較：#＜0.05##＜0.01，表4同

*< 0.05**< 0.01control group;#< 0.05##< 0.01model group, same as table 4

3.4 不同類型梔子對大鼠膽汁中總膽紅素和總膽汁酸含量的影響

如表4所示，與對照組比較，模型組大鼠膽汁中總膽紅素及總膽汁酸含量明顯升高（＜0.01）；與模型組比較，消炎利膽片組大鼠膽汁中總膽紅素及總膽汁酸含量明顯升高（＜0.01）；梔子II高、低劑量組，梔子IV高劑量組，梔子V高、低劑量組以及梔子VII高劑量組大鼠膽汁中總膽紅素含量明顯升高（＜0.05、0.01）；梔子III高劑量組、梔子V高劑量組和梔子VII高劑量組大鼠膽汁中總膽汁酸含量明顯升高（＜0.05、0.01）。

3.5 梔子果實大小、化學成分含量與藥效的相關性分析

對不同類型梔子干果單果質量、果實大小、果形態與梔子苷、西紅花苷I含量，并與腫脹抑制率、總膽紅素及總膽汁酸含量、大鼠膽汁流量進行相關性分析，結果見表5。梔子苷含量除了與西紅花苷I含量呈顯著正相關之外，與其他各項指標相關性均不顯著；西紅花苷I含量與單果質量、果大小指標呈顯著正相關，與總膽紅素及總膽汁酸含量、大鼠膽汁流量呈負相關，與腫脹抑制率呈顯著負相關；腫脹抑制率與梔子果實長、果寬及單果質量均呈顯著負相關，與果實長寬比呈負相關；總膽紅素與梔子果實長、果寬及單果質量均呈負相關，與果實長寬比呈顯著負相關；總膽汁酸與梔子果實長、果寬、果實長寬比及單果質量均呈負相關，但相關性均不顯著；大鼠膽汁在30、60、90、120、150、180 min膽汁流量與梔子果實長、果寬、果實長寬比及單果質量均呈負相關，其中30、90、150 min膽汁流量與單果重、果寬呈顯著負相關，180 min膽汁流量與果寬呈顯著負相關。

表4 不同類型梔子對高脂喂養的大鼠膽汁中總膽紅素、總膽汁酸含量的影響(, n = 8)

表5 梔子果實大小、化學成分含量與藥效的相關性分析

Table 5 Relationship among gardenia size, content of chemical components and pharmaceutical effect of different types of

指標相關性分析干果單果質量長寬長寬比梔子苷含量西紅花苷I含量 梔子苷含量Pearson相關性0.3010.2840.372?0.0491.0000.643* 顯著性（雙側）0.2950.3250.1910.869—0.013 西紅花苷I含量Pearson相關性0.824**0.791**0.816**0.4630.643*1.000 顯著性（雙側）0.0000.0010.0000.0950.013— 腫脹抑制率Pearson相關性?0.608*?0.597*?0.649*?0.311?0.459?0.628* 顯著性（雙側）0.0210.0240.0120.2780.0990.016 總膽紅素Pearson相關性?0.275?0.392?0.271?0.591*0.258?0.067 顯著性（雙側）0.3410.1660.3490.0260.3740.821 總膽汁酸Pearson相關性?0.276?0.308?0.270?0.2890.021?0.373 顯著性（雙側）0.3400.2830.3510.3170.9430.189 30 min膽汁流量Pearson相關性?0.546*?0.526?0.587*?0.3160.085?0.206 顯著性（雙側）0.0430.0530.0270.2710.7730.480 60 min膽汁流量Pearson相關性?0.468?0.453?0.507?0.2830.220?0.098 顯著性（雙側）0.0920.1040.0640.3260.4510.739 90 min膽汁流量Pearson相關性?0.550*?0.479?0.601*?0.116?0.250?0.378 顯著性（雙側）0.0420.0830.0230.6940.3880.183 120 min膽汁流量Pearson相關性?0.481?0.450?0.520?0.223?0.099?0.230 顯著性（雙側）0.0820.1070.0560.4430.7360.428 150 min膽汁流量Pearson相關性?0.534*?0.451?0.589*?0.064?0.207?0.341 顯著性（雙側）0.0490.1060.0270.8290.4770.233 180 min膽汁流量Pearson相關性?0.526?0.459?0.584*?0.089?0.268?0.389 顯著性（雙側）0.0530.0990.0280.7630.3530.169

**在0.01水平（雙側）上顯著相關，*在0.05水平（雙側）上顯著相關

**significantly correlated at 0.01 level (two-sided),*significantly correlated at 0.05 level (two-sided)

4 討論

本研究結果表明，梔子II、III、IV、V、VII具有明顯的抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的作用；梔子III、IV、V在各時間段均具有明顯促進膽汁分泌的作用，梔子II在部分時間段膽汁流量明顯增多，而梔子VII低劑量組在部分時間段使膽汁排泄量減少；梔子II、IV、V、VII能夠明顯升高膽汁中總膽紅素的含量，促進膽紅素的排泄；梔子III、V、VII能夠明顯升高膽汁中總膽汁酸的含量。不同類型梔子抗炎作用強弱與梔子果實長、果寬及單果質量均呈顯著負相關，總膽汁酸、總膽紅素的代謝與梔子果實長、果寬及單果質量均呈負相關，大鼠膽汁在30、60、90、120、150、180 min時間段的流量與梔子果實長、果寬、果實長寬比及單果質量均呈負相關，其中30、90、150 min膽汁流量與單果質量、果寬呈顯著負相關，180 min膽汁流量與果寬呈顯著負相關。另外，西紅花苷I含量與單果質量、果大小指標呈顯著正相關，與總膽紅素、總膽汁酸含量、大鼠膽汁流量呈負相關，與腫脹抑制率呈顯著負相關。小果型梔子也有梔子苷含量高的類型，但梔子苷含量的高低和其藥理作用沒有顯著的關聯，且不同類型梔子果實越大，其抗炎利膽藥理作用越差。

梔子是江西的道地藥材，主要分布在撫州、九江、吉安、宜春等地，但現在市面上純正的江西梔子不多，主要是福建梔子或福建梔子與江西梔子雜交改良的品種。改良梔子的產量、抗性等雖有很大提升，但與傳統道地藥材的藥效是否有差異關系到中藥材的品質和人民的身體健康，因此，對不同類型梔子的藥效進行研究是目前亟待解決的問題。中醫認為，肝膽疾病的發生與飲食不節、精神抑郁等多種因素相互作用有關，膽汁理化狀態的改變、膽汁瘀滯、感染等均可引起肝膽疾病[14]，因此本研究從飲食不節的角度采用高脂飼料飼養大鼠[15]，觀察梔子對大鼠膽汁分泌的影響。膽紅素由衰老的紅細胞釋放的血色素經肝臟轉化而成，隨膽汁的分泌進入膽囊。膽汁酸由膽固醇轉變而來，膽汁是膽紅素和膽固醇排泄的重要途徑之一[16-17]。肝細胞分泌膽汁進入膽囊暫時存儲（大鼠無膽囊，膽汁直接排入膽總管），膽汁一方面可以促進脂類的消化和吸收，另一方面作為排泄液，將體內某些代謝產物（如膽紅素）排入腸腔，隨糞便排出體外。本研究通過研究不同類型梔子的性狀大小、梔子苷及西紅花苷I含量、抗炎作用和促進膽汁分泌作用，比較不同類型梔子的藥效、梔子外觀性狀、化學成分之間的聯系。研究結論與劉淼琴[7]、周素文等[10]認為歷代本草上記載梔子“以圓小、皮薄、飽滿者為佳”類似，并首次在“辨狀論質”的基礎上結合現代藥理學，對梔子的藥效進行研究，研究其消炎利膽作用與梔子的外觀性狀、主要化學成分之間的聯系，從臨床療效的角度對梔子的優劣進行比較，是對劉淼琴[7]、周素文等[10]研究的深入和拓展，為梔子的合理應用奠定理論基礎，本研究結果可以為優良梔子藥材資源的選擇提供科學依據。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on relationship among fruit characters, chemical constituents, anti-inflammatory and cholagogic effects of

WU Xian-hao1, DENG Shao-yong2, WANG Xiao-qing1, ZHAO Shi-yun1, LI Kang-qin2, YU Jin-bao1

1. Jiangxi Institution of Tradional Chinese Medical and Pharmaceutical Sciences, Nanchang 330046, China 2. Forest Academy of Jiangxi Province, Nanchang 330032, China

To compare the relationship among appearance, chemical composition, anti-inflammatory and cholagogic effects of different types of Zhizi ().The appearance traits of different types of gardenias were observed and measured. HPLC method was used to detect the content of geniposide and crocin I in. Effect ofon auricle swelling induced by xylene in mice was investigated. Effects ofon bile secretion, total bilirubin and total bile acid content in bile of rats fed with high fat diet were investigated. The relationship among gardenia size, content of chemical components and pharmaceutical effect of different types ofwere evaluated.The content of crocin I was positively correlated with fruit weight and size. The content of crocin I, single fruit weight and fruit size was significantly correlated with the inhibition rate of auricle swelling in mice, and negatively correlated with bile flow, total bile acid and total bilirubin content in rats. There was no significant correlation between the content of geniposide and its pharmacological action.The differences of size and weight of different types ofare related to their pharmacological effects. Traditionalselection experience that “small round, thin skin, plump is better” has been proved in modern pharmacological experiments, which has certain scientific significance and can provide a scientific basis for the selection of excellent.

; anti-inflammatory and cholagogic; phamacognosy; fruit traits; crocin I; geniposide

R285.5

A

0253 - 2670(2021)23 - 7229 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.23.017

2021-05-31

國家自然科學基金資助項目（32060356）；國家自然科學基金資助項目（31760220）；現代農業產業技術體系建設專項資金資助項目（CARS-21）；江西省重點研發計劃項目（20203BBF63024）；江西省林業科技創新專項（201706）

吳先昊（1991—），男，主管中藥師，碩士，主要從事中藥藥理研究。

鄧紹勇（1982—），男，博士，副研究員，主要研究方向為藥用植物資源開發與利用。Tel: (0791)83833641 E-mail: jxforestry@163.com

[責任編輯 李亞楠]