小花清風藤莖葉化學成分及其保肝活性研究

李曼姝，柯銀鉛，張紫琴，劉呈雄，鄒 坤

小花清風藤莖葉化學成分及其保肝活性研究

李曼姝，柯銀鉛#，張紫琴，劉呈雄*，鄒 坤*

三峽大學生物與制藥學院，天然產物研究與利用湖北省重點實驗室，湖北 宜昌 443002

研究小花清風藤莖葉的化學成分及其保肝護肝活性。采用正相、反相硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和半制備液相色譜等方法分離純化，通過NMR、MS等技術鑒定化合物的結構。從小花清風藤莖葉中分離得到22個化合物，分別鑒定為-反式-阿魏酰酪胺（1）、油酸（2）、()-1,8-heptadeca diene（3）、-反式-對香豆?；ゼ仔粮ィ?）、()--formyl-nornuciferin（5）、-demethyl--formyldehydronuciferine（6）、--cinnamoyltyramine（7）、油酸酰胺（8）、1,2,4-trimethoxybenzene（9）、2-(3-methoxyphenyl) isoindoline-1,3-dione（10）、景洪哥納香胺酮（11）、squamolone（12）、樺木酸甲酯（13）、白樺脂酸（14）、3-氧代齊墩果酸（15）、牛蒡子苷（16）、2-(3′′,4′′-dimethoxybenzyl)-3-(3′-methoxy- 4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone（17）、matairesinol（18）、lappaol F（19）、山柰酚（20）、lappaol A（21）和lappaol B（22）?；衔?、3、5～8、10～12和16～19為首次從清風藤屬植物中分離得到。其中化合物8、11、13、14、16、20和22有顯著的保肝護肝活性。

小花清風藤；保肝護肝；油酸酰胺；景洪哥納香胺酮；白樺脂酸；牛蒡子苷

小花清風藤Wall. ex Roxb.是清風藤科清風藤屬的雙子葉植物，主要分布于喀斯特地貌區[1]。藥材收錄于《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版，主要功效為清熱利濕、利膽、止血。用于黃疸濕熱癥，外傷出血[2]。胡祚俊等[3]用小花清風藤治療84例病毒性肝炎甲型（甲肝）和病毒性肝炎乙型（乙肝）患者，療效顯著。小花清風藤具有豐富的藥理活性，如保肝護肝[4-9]、抗流感病毒[10]、治療類風濕性關節炎[11-12]、調脂[13]和抗氧化[14]等。近年來，貴州省先后以小花清風藤為主要配方開發了系列治療肝膽疾病的藥物：如龍華清肝沖劑[15]、膽炎康膠囊[16]、小花清風藤膠囊[17]、復方小花清風藤[4]等。胡建忠等[18]制備出小花清風藤金銀花復配花茶，具有抗菌、抗病毒、降糖、調脂、明目清肝等作用。目前已從小花清風藤中分離得到多種化合物，主要為五環三萜類[19-24]、生物堿類[13,22,24-29]、苯丙素類[13,26-28]、黃酮類[27,30-31]等。為了進一步研究藥材的化學成分，探究其保肝護肝活性，對小花清風藤莖葉進行分離，從中分離得到22個化合物，分別鑒定為-反式-阿魏酰酪胺（-- feruloyltyramine，1）、油酸（oleic acid，2）、()-1,8- heptadeca diene（3）、-反式-對香豆?；ゼ仔粮()-1,8-heptadeca diene，4]、()--formyl-nornuciferin（5）、-demethyl--formyldehydronuciferine（6）、--cinnamoyltyramine（7）、油酸酰胺（oleamide，8）、1,2,4-trimethoxybenzene（9）、2-(3-methoxyphenyl) isoindoline-1,3-dione（10）、景洪哥納香胺酮（cheliensisaminone，11）、squamolone（12）、樺木酸甲酯（betulinic acid methyl ester，13）、白樺脂酸（betulinic acid，14）、3-氧代齊墩果酸（3-oxooleanolic acid，15）、牛蒡子苷（arctiin，16）、2-(3′′,4′′-dimethoxy- benzyl)-3-(3′-methoxy-4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone（17）、matairesinol（18）、lappaol F（19）、山柰酚（kaempferol，20）、lappaol A（21）和lappaol B（22）。其中化合物2、3、5～8、10～12和16～19為首次從清風藤屬植物中分離得到。以MTT比色法測試藥物對被CCl4損傷的人正常肝細胞LO2的保護作用，結果化合物8、11、13、14、16、20和22能顯著提高CCl4損傷的LO2細胞的存活率，說明化合物8、11、13、14、16、20和22有顯著的保肝護肝活性。

1 儀器與材料

1.1 材料

小花清風藤莖和葉采自貴州省黔西南布依族苗族自治州興義市冊亨縣，經三峽大學天然產物研究與利用湖北省重點實驗室王玉兵教授鑒定為小花清風藤Wall. ex Roxb.，其標本（201700227）現存于該實驗室。LO2細胞購于北納生物科技有限公司。

1.2 儀器與試劑

Dionex Ultimate 3000高效液相色譜儀（美國戴安公司）；LC-6AD半制備液相色譜儀（日本島津公司）；色譜柱（YMC-Pack ODA-A，250 mm×10 mm，10 μm，半制備型；250 mm×4.6 mm，5 μm，分析型，日本YMC公司）；Bruker AV 400核磁共振波譜儀（瑞士布魯克公司）；Thermo Scientific ISQ LT單四極桿質譜儀（美國賽默飛世爾科技公司）；低溫冷凍干燥機（美國Labconco公司）；AL204-IC電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；3111型CO2培養箱（美國賽默飛世爾Thermo公司）；潔凈工作臺（天津市泰斯特儀器有限公司）；Vortex-Genie 2渦旋振蕩器（美國Scientific Industries）；高壓滅菌鍋（上海申安醫療器械廠）。

正相硅膠（100～200、200～300目，青島海洋所化工廠）；分析純石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇等（天津科密歐化學試劑有限公司）；色譜純甲醇、乙腈（美國TEDIA公司）；1640培養基 [賽默飛世爾（蘇州）儀器有限公司]；青鏈霉素混合液（北京索萊寶科技有限公司）；胎牛血清（蘭州百靈生物技術有限公司）；胰蛋白酶（武漢科瑞生物技術有限公司）；二甲基噻唑二苯基四嘩溴鹽（MTT，Sigma公司）。

2 方法

2.1 提取與分離

取干燥粉碎后的小花清風藤莖葉5.4 kg，用工業甲醇加熱回流（55 ℃）提取4次（15 h/次）。減壓濃縮為浸膏。加水懸浮，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取。得到各部位浸膏，分別為石油醚部位浸膏70 g、氯仿部位浸膏33 g、醋酸乙酯部位浸膏28 g、正丁醇部位浸膏24 g。

取27 g石油醚部位浸膏，正相硅膠以石油醚-醋酸乙酯（100∶0→0∶1），醋酸乙酯-甲醇（100∶0→0∶1）進行梯度洗脫，將餾份合并為23個組分（Fr. 1～23）。Fr. 3析出晶體，經過多次重結晶，得到化合物13（3.2 mg）；Fr. 5通過Sephadex LH-20以石油醚-氯仿-甲醇（1∶1∶1）洗脫，得到化合物14（1.4 mg）、15（2.5 mg）。

取26 g氯仿部位浸膏，通過正相硅膠柱以氯仿- 甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，將餾份合并為14個組分（Fr. 24～38）。將Fr. 32與Fr. 33合并后，通過正相硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到Fr. 32.1～32.12；將Fr. 32.2通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到化合物1（2.0 mg）、2（2.7 mg）、3（2.1 mg）；Fr. 32.3通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到化合物4（6.2 mg）；將Fr. 27通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]分為Fr. 27.1～27.6；Fr. 27.5通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到Fr. 27.5.1～27.5.6；將Fr. 27.5.1通過薄層板制備[二氯甲烷-甲醇（11∶1）]，得到化合物5（3.2 mg）；將Fr. 27.5.3通過薄層板制備[二氯甲烷-甲醇（8∶1）]得到化合物6（1.2 mg）；將Fr. 27.4通過半制備高效液相色譜（乙腈-水30∶70）分為Fr. 27.4.1～27.4.6；將Fr. 27.4.2通過薄層板制備后，用Sephadex LH-20以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，再通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（53∶47）]得到化合物7（3.4 mg）、8（5.7 mg）；將Fr. 27.1用Sephadex LH-20以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物9（2.2 mg）；將Fr. 27.1.12通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到化合物10（1.8 mg）、11（7.5 mg）、12（2.1 mg）。

取粉碎后的小花清風藤莖葉13 kg，用工業甲醇加熱回流（55 ℃）提取2次（4 h/次）。減壓濃縮為浸膏。加水懸浮，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。得到各部位浸膏，分別為石油醚部位浸膏145.8 g、醋酸乙酯部位浸膏140.1 g、正丁醇部位浸膏76.7 g。

取60 g正丁醇浸膏，通過大孔樹脂以乙醇-水（0∶100→100∶0）梯度洗脫，得到81個餾份（z1～z81），通過高效液相色譜分析，將z56～z71合并為Fr.39；將Fr. 39通過反相硅膠柱色譜，以甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，得到Fr. 39.1～39.24；將Fr. 39.13通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（45∶55）]得到化合物16（14.7 mg）；將Fr. 39.17通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（57∶43）]得到化合物17（34.0 mg）；將Fr. 39.15通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（42∶58）]得到化合物18（1.8 mg）；將Fr. 39.18通過半制備高效液相色譜（甲醇-水48∶52）得到化合物19（25.1 mg）；將Fr. 39.20通過Toyopearl HW-40F，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物20（1.3 mg）；將Fr. 39.17.1通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（38∶62）]得到Fr. 39.17.1.1～39.17.1.3；將Fr. 39.17.1.1通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（58∶42）]得到化合物21（12.5 mg）、22（23.8 mg）。

2.2 LO2細胞評價藥物的保護作用

2.2.1 細胞培養與藥物處理 參考文獻方法[32-34]，選用CCl4肝損傷模型。實驗分為調零組、對照組、模型組和給藥組（化合物低、中、高質量濃度分別為25、50、100 μg/mL）。加入10 mL CCl4于100 mL含10% FBS的1640培養基中，制成飽和的CCl4培養基溶液。將待測化合物溶于飽和的CCl4培養基溶液中制成藥品溶液，每個濃度設4個復孔，對照組加入含10% FBS的1640培養基100 μL/孔，模型組加入含CCl4飽和的培養基溶液100 μL/孔，給藥組加入樣品溶液100 μL/孔，將培養板置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養24 h。

2.2.2 LO2細胞存活率測定 采用MTT比色法，測定前4 h，每孔加入20 μL的MTT溶液（5 mg/mL），終止培養，吸出上清液，再加入DMSO 150 μL/孔，待結晶溶解后，測定每孔492 nm的吸光度（）值，計算LO2細胞的存活率。

細胞存活率=(實驗—調零)/(對照—調零)

2.2.3 統計學分析 所有實驗數據通過SPSS13.0軟件分析，以單因素方差分析（one-way ANOVA）進行多組間差異的比較，以Dunnett-檢驗比較兩組間均數的差異；＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 結構鑒定

化合物1：白色粉末。EI-MS/: 313 [M]+；C18H19NO4。1H-NMR (400 MHz, Methanol-4): 2.79 (2H, t,= 7.3 Hz, H-2′′), 3.49 (2H, dd,= 8.0, 6.7 Hz, H-1′′), 3.92 (3H, s, -OCH3), 4.63 (2H, s, -OH), 6.43 (1H, d,= 15.7 Hz, H-2), 6.72 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′′′, 5′′′), 6.75 (1H, d,= 8.5 Hz, H-6′), 6.82 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′), 7.02～7.15 (3H, m, H-2′, 2′′′, 6′′′), 7.46 (1H, d,= 15.7 Hz, H-3), 8.56 (1H, brs, -NH)；13C-NMR (100 MHz, Methanol-4): 34.4 (C-2′′), 41.1 (C-1′′), 55.0 (3′-OMe), 110.2 (C-2′), 114.9 (C-3′′′), 114.9 (C-5′′′), 115.1 (C-5′), 117.4 (C-3), 121.8 (C-6′), 129.3 (C-2′′′), 130.0 (C-6′′′), 140.6 (C-2)。與文獻數據[35]對比，鑒定化合物1為-反式-阿魏酰酪胺。

化合物2：白色粉末。EI-MS/: 254 [M]+；C16H30O2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 0.86 (3H, t,= 6.9 Hz, H-18), 1.30～1.50 (20H, m, H-4～7, 12～17), 1.48 (2H, m, H-3), 2.00 (4H, m, H-8, 11), 5.34 (2H, m, H-9, 10)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 14.4 (C-18), 22.6 (C-17), 25.6 (C-3), 27.0 (C-12), 27.0 (C-13), 29.0 (C-4), 29.2 (C-16), 29.2 (C-15), 29.3 (C-14), 29.4 (C-13), 29.5 (C-5), 29.6 (C-12), 31.8 (C-16), 35.6 (C-2), 130.1 (C-9), 130.1 (C-10), 174.9 (C-1)。與文獻數據[36]對比，鑒定化合物2為油酸。

化合物3：白色粉末。EI-MS/: 236 [M]+；C17H32。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 0.87 (3H, m, H-17), 1.15～1.35 (18H, m, H-4～6, 11～16), 1.95～2.05 (6H, m, H-3, 7, 10), 5.31～5.38 (2H, m, H-1), 5.76～5.85 (1H, m, H-2)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 14.4 (C-17), 22.5 (C-16), 25.6 (C-14), 27.0 (C-13), 29.0 (C-12), 29.1 (C-11), 29.2 (C-4), 29.3 (C-5), 29.4 (C-6), 29.5 (C-15), 29.5 (C-7), 31.7 (C-3), 35.6 (C-10), 115.3 (C-1), 127.6 (C-8), 130.1 (C-9), 138.2 (C-2)。與文獻數據[37]對比，鑒定化合物3為()-1,8-heptadeca diene。

化合物4：白色粉末。EI-MS/: 299 [M]+；C17H17NO4。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.19 (2H, m, H-8′), 4.55 (1H, dd,= 7.9 Hz, 4.6 Hz, H-7′), 6.49 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 6.73 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.78 ( 2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 7.15 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 7.31 (2H, d,= 15.7 Hz, H-7), 7.38 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 8.02 (1H, t,= 5.8 Hz, H-2′, 6′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 47.6 (C-8′), 71.7 (C-7′), 115.2 (C-3′, 5′), 116.3 (C-3, 5), 119.0 (C-8), 125.1 (C-1), 127.6 (C-2, 6), 129.7 (C-2′, 6′), 134.5 (C-1′), 139.2 (C-7), 156.5 (C-4′), 156.9 (C-4), 166.1 (C-9)。與文獻數據[38]對比，鑒定化合物4為-反式-對香豆?；ゼ仔粮?。

化合物5：白色粉末。EI-MS/: 325 [M]+；C19H19NO4。1H-NMR (400 MHz, Methanol-4): 2.64～3.12 (2H, m, H-4ax, 4eq), 3.60 (1H, m, H-5ax), 3.84 (1H, m, H-5eq), 7.22～7.46 (3H, m, H-8～10), 8.28 (1H, s, -CHO), 8.37 (1H, dd,= 8.1, 1.2 Hz, H-11)；13C-NMR (100 MHz, Methanol-4): 30.2 (C-4), 33.8 (C-7), 41.9 (C-5), 49.4 (C-6a), 55.1 (2-OMe), 59.0 (1-OMe), 111.8 (C-3), 126.7 (C-3a), 127.5 (C-9, 10), 128.1 (C-8, 11, 11b, 11c), 129.2 (C-11a), 136.1 (C-7a), 145.8 (C-1), 152.5 (C-2), 163.3 (C-12)。與文獻數據[39]對比，鑒定化合物5為()--formyl-nornuciferin。

化合物6：白色粉末。EI-MS/: 323 [M]+；C19H17NO4。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.28 (2H, t,= 6.1 Hz, H-4), 3.92 (3H, s, H-14), 4.05 (3H, s, H-13), 4.14 (2H, t,= 6.1 Hz, H-5), 7.35 (1H, s, H-3), 7.48 (1H, s, H-7), 7.59 (2H, dt,= 8.2, 4.7 Hz, H-9, 10), 7.88 (1H, m, H-8), 8.95 (1H, s, H-12), 9.58 (1H, m, H-11)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 29.9 (C-4), 38.3 (C-5), 55.6 (C-13), 58.8 (C-14), 112.0 (C-7), 113.0 (C-3), 118.5 (C-11c), 125.2 (C-11b), 125.7 (C-10), 126.9 (C-9), 127.4 (C-8), 127.8 (C-11), 128.1 (C-3a), 128.7 (C-6a), 132.6 (C-7a), 132.8 (C-11a), 145.7 (C-1), 151.9 (C-2), 161.5 (C-12)。與文獻數據[40]對比，鑒定化合物6為-demethyl-- formyldehydronuciferine。

化合物7：白色粉末。EI-MS/: 267 [M]+；C17H17NO2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.67 (2H, m, H-7′), 3.75 (2H, m, H-8′), 6.63 (1H, d,= 15.8 Hz, H-8), 6.70 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 7.03 (3H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 7.41 (3H, m, H-2, 4, 6), 7.57 (2H, d,= 6.5 Hz, H-3, 5), 8.17 (1H, d,= 11.1 Hz, H-7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.8 (C-7′), 41.2 (C-8′), 115.6 (C-3′, 5′), 122.8 (C-8), 127.9 (C-3, 5), 129.4 (C-2, 6), 129.8 (C-4), 129.9 (C-2′, 6′), 135.4 (C-1), 138.9 (C-7), 156.1 (C-4′), 165.3 (C-9)。與文獻數據[41]對比，鑒定化合物7為-- cinnamoyltyramine。

化合物8：白色粉末。EI-MS/: 281 [M]+；C18H35NO。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 0.86 (3H, t,= 6.7 Hz, -CH3), 1.17～1.30 (20H, m), 1.65 (2H, m, CH2CH2CONH2), 2.00 (4H, m, CH2CH= CHCH2), 2.14 (2H, t,= 6.3 Hz, CH2CONH2), 5.33 (2H, m, CH=CH), 5.51 (1H, brs, CONH), 5.83 (1H, brs, CONH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 175.9 (C=O), 130.1 (C=C), 129.7 (C=C), 35.6, 31.7, 29.5, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 29.1, 29.0, 28.0, 27.4, 27.0, 25.6, 22.5, 14.1。與文獻數據[42]對比，鑒定化合物8為油酸酰胺。

化合物9：無色結晶[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 168 [M]+；C9H12O3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.92 (9H, s, -OCH3), 6.86 (1H, d,= 8.0 Hz, H-6), 7.36 (1H, s, H-2), 7.58 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 55.0 (4-OMe), 56.1 (1, 2-OMe), 112.5 (C-2), 114.4 (C-6), 123.7 (C-5), 147.2 (C-4), 147.4 (C-3), 150.9 (C-1)。與文獻數據[43]對比，鑒定化合物9為1,2,4- trimethoxybenzene。

化合物10：白色粉末。EI-MS/: 254 [M]+；C15H12NO3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.38 (3H, s, H-7′), 6.84 (1H, d,= 8.3 Hz, H-4′), 7.35 (1H, s, H-2′), 7.55 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6′), 7.60 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 7.65 (2H, dd,= 5.7, 3.3 Hz, H-5, 6), 7.75 (2H, dd,= 5.7, 3.3 Hz, H-4, 7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 57.7 (C-7′), 106.1 (C-2′), 110.3 (C-6′), 114.9 (C-4′), 123.8 (C-4, 7), 128.3 (C-5, 6), 131.0 (C-3a, 7a), 159.6 (C-3′), 168.9 (C-1, 3)。與文獻數據[44]對比，鑒定化合物10為2-(3-methoxy- phenyl)isoindoline-1,3-dione。

化合物11：無色油狀物。EI-MS/: 155 [M]+；C7H9NO3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 1.53 (1H, m, H-5b), 1.79 (1H, m, H-6b), 1.95 (1H, m, H-6a), 2.13 (1H, m, H-5a), 2.43 (1H, dd,= 16.1, 13.0 Hz, H-3b), 2.57 (1H, dd,= 16.1, 4.2 Hz, H-3a), 3.28 (1H, m, H-7b), 3.32 (1H, m, H-7a), 3.70 (1H, m, H-4)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 23.1 (C-6), 32.8 (C-5), 37.4 (C-3), 44.7 (C-7), 53.1 (C-4), 151.4 (C-1), 171.3 (C-2)。與文獻數據[45]對比，鑒定化合物11為景洪哥納香胺酮。

化合物12：白色粉末。EI-MS/: 128 [M]+；C5H8N2O2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 1.92 (2H, tt,= 7.1, 7.9 Hz, H-4), 2.52 (2H, t,= 7.9 Hz, H-3), 3.67 (2H, t,= 7.1 Hz, H-5), 7.36 (1H, br, NH2), 7.81 (1H, br, NH2)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 16.8 (C-4), 33.3 (C-3), 45.5 (C-5), 153.3 (C-6), 177.4 (C-2)。與文獻數據[46]對比，鑒定化合物12為squamolone。

化合物13：無色針狀結晶 [氯仿-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 470 [M]+；C31H50O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.79 (3H, s, H-23), 0.86 (3H, s, H-24), 0.95 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, s, H-26), 1.64 (3H, s, H-27), 1.72 (3H, s, H-30), 3.04 (1H, td,= 4.5, 11.0 Hz, H-19), 3.22 (1H, td,= 5.5, 11.1 Hz, H-3), 3.71 (3H, s, -OCH3), 4.64 (1H, dd,= 1.4, 2.4 Hz, H-29b), 4.78 (1H, d,= 2.3 Hz, H-29a)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 14.7 (C-27), 15.4 (C-24), 16.0 (C-26), 16.1 (C-25), 18.3 (C-6), 19.4 (C-30), 20.9 (C-11), 25.5 (C-12), 27.4 (C-2), 28.0 (C-23), 29.7 (C-15), 30.6 (C-21), 32.2 (C-16), 34.3 (C-7), 37.0 (C-10), 37.2 (C-22), 38.3 (C-13), 38.7 (C-1), 38.9 (C-4), 40.7 (C-8), 42.4 (C-14), 47.0 (C-19), 49.5 (-OCH3), 50.6 (C-18), 51.3 (C-9), 55.4 (C-5), 56.6 (C-17), 79.0 (C-3), 109.6 (C-29), 150.6 (C-20), 176.7 (C-28)。與文獻數據[47-48]對比，鑒定化合物13為樺木酸甲酯。

化合物14：無色針狀結晶[氯仿-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 456 [M]+；C30H48O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.79, 0.86, 0.98, 1.01, 1.02, 1.73 (18H, s, 3×-CH3), 4.65 (1H, dd,= 2.4, 1.4 Hz, H-30a), 4.78 (1H, d,= 2.2 Hz, H-30b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 14.2 (C-27), 15.4 (C-24), 16.1 (C-25), 16.2 (C-26), 17.4 (C-6), 18.6 (C-30), 20.3 (C-11), 24.9 (C-12), 26.8 (C-2), 27.6 (C-23), 29.0 (C-21), 29.7 (C-15), 31.2 (C-16), 33.5 (C-7), 35.7 (C-22), 36.2 (C-10), 37.5 (C-13), 38.1 (C-4), 38.2 (C-1), 39.8 (C-8), 41.6 (C-14), 45.7 (C-19), 47.9 (C-18), 49.3 (C-9), 54.3 (C-5), 55.1 (C-17), 76.2 (C-3), 109.1 (C-29), 149.7 (C-20), 176.6 (C-28)。以上數據與文獻報道基本一致[49]，故鑒定化合物14為白樺脂酸。

化合物15：白色針狀晶體 [氯仿-甲醇（1∶1）]。EI-MS: 454 [M]+；C30H46O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.85 (3H, s, H-26), 0.95 (3H, s, H-30), 0.97 (3H, s, H-29), 1.07 (3H, s, H-25), 1.09 (3H, s, H-24), 1.12 (3H, s, H-23), 1.18 (3H, s, H-27), 2.40 (1H, ddd,= 15.9, 6.8, 3.6 Hz, H-2α), 2.59 (1H, ddd,= 15.9, 11.1, 7.3 Hz, H-2β), 2.88 (1H, dd,= 13.8, 4.6 Hz, H-18), 5.34 (1H, t,= 3.6 Hz, H-12)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 15.0 (C-25), 17.0 (C-26), 19.6 (C-24), 21.5 (C-10), 22.9 (C-11), 23.5 (C-16), 23.6 (C-30), 25.9 (C-27), 26.5 (C-2), 27.7 (C-15), 30.7 (C-20), 32.2 (C-29), 32.4 (C-23), 33.1 (C-22), 33.8 (C-9), 34.2 (C-21), 36.8 (C-6), 39.1 (C-1), 39.3 (C-8), 41.1 (C-18), 41.8 (C-14), 45.8 (C-19), 46.6 (C-17), 46.9 (C-4), 47.5 (C-7), 55.3 (C-5), 122.4 (C-12), 143.7 (C-13), 183.8 (C-28), 217.8 (C-3)。以上數據與文獻報道基本一致[50]，故鑒定化合物15為3-氧代齊墩果酸。

化合物16：白色粉末。EI-MS/: 534 [M]+；C27H34O11。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.44 (1H, m, H-8a), 2.49 (1H, m, H-7′b), 2.52 (1H, m, H-8b), 2.57 (1H, m, H-7′a), 2.77 (1H, dd,= 9.0, 3.1 Hz, H-7b), 2.83 (1H, dd,= 6.0, 4.1 Hz, H-7a), 3.72 (6H, s, 3, 3′-OCH3), 3.73 (3H, s, 4′-OCH3), 3.90 (1H, t,= 8.5 Hz, H-9′b), 4.11 (1H, dd,= 8.1, 7.2 Hz, H-9′a), 4.86 (1H, d,= 7.0 Hz, Glu-H-1′′), 6.62 (1H, dd,= 8.1, 1.8 Hz, H-6), 6.68 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.70 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.80 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2′), 6.85 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5), 7.00 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.0 (C-7), 37.3 (C-7′), 41.2 (C-8′), 46.0 (C-8), 55.9 (3-OCH3), 55.9 (3′-OCH3), 56.1 (4′-OCH3), 61.1 (C-6′′), 70.1 (C-4′′), 71.2 (C-9′), 73.7 (C-2′′), 77.3 (C-5′′), 77.5 (C-3′′), 100.6 (Glu-C-1′′), 112.3 (C-5), 112.8 (C-2), 114.3 (C-2′), 115.5 (C-5′), 120.9 (C-6′), 121.8 (C-6), 131.7 (C-1), 132.2 (C-1′), 145.7 (C-4), 147.8 (C-4′), 149.1 (C-3, 3′), 178.9 (C-9)。與文獻數據[51]對比，鑒定化合物16為牛蒡子苷。

化合物17：白色粉末。EI-MS/: 372 [M]+；C21H24O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.42 (1H, m, H-3), 2.49～2.44 (1H, m, H-5a), 2.52 (1H, m, H-5b), 2.70～2.64 (1H, m, H-2), 2.73 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-6a), 2.81 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-6b), 3.72 (9H, s, 3×OCH3), 3.86 (1H, t,= 8.1 Hz, H-4a), 4.07 (1H, t,= 8.1 Hz, H-4b), 6.59 (1H, dd,= 7.9, 2.0 Hz, H-6′), 6.60 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.64 (1H, dd,= 8.3, 2.0 Hz, H-6′′), 6.70 (1H, d,= 8.0 Hz, H-2′′), 6.75 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5′′), 6.83 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.2 (C-6), 37.4 (C-5), 41.3 (C-3), 46.1 (C-2), 55.8 (3×CH3), 71.2 (C-4), 112.3 (C-5′′), 112.8 (C-2), 113.9 (C-2′′), 115.8 (C-5′), 120.8 (C-6′), 122.0 (C-6′′), 129.3 (C-l′), 131.7 (C-l′′), 145.6 (C-4′), 147.8 (C-3′), 147.9 (C-4′′), 149.1 (C-3′′), 179.0 (C-1)。與文獻數據[52]對比，鑒定化合物17為2-(3′′,4′′- dimethoxybenzyl)-3-(3′-methoxy-4′-hydroxybenzyl)-- butyrolactone。

化合物18：淡黃色粉末。EI-MS/: 358 [M]+；C20H22O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.49 (4H, m, H-7, 8, 8′), 2.74 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-7′a), 2.81 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-7′b), 3.72 (6H, s, 2×OCH3), 3.86 (1H, dd,= 8.6, 7.1 Hz, H-9a), 4.07 (1H, dd,= 8.6, 7.0 Hz, H-9b), 5.82 (2H, brs, 2×OH), 6.48 (1H, dd,= 7.9, 2.0 Hz, H-6), 6.58 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.61 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.65 (1H, brs, H-2′), 6.67 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5), 6.73 (1H, d,= 1.9 Hz, H-5′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.1 (C-7′), 37.3 (C-7), 41.4 (C-8), 46.1 (C-8′), 56.0 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 71.2 (C-9), 113.1 (C-2), 113.9 (C-2′), 115.7 (C-5), 115.8 (C-5′), 121.2 (C-6), 122.0 (C-6′), 129.4 (C-1′), 130.1 (C-1), 145.3 (C-4), 145.5 (C-4′), 147.8 (C-3), 147.9 (C-3′), 179.1 (C-9′)。與文獻數據[53]對比，鑒定化合物18為matairesinol。

化合物19：淡黃色無定形粉末。EI-MS/: 714 [M]+；C40H42O12。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.47 (1H, m, H-8′), 2.52 (1H, m, H-8), 2.74 (1H, dd,= 16.7, 7.6 Hz, H-7), 2.90 (1H, dd,= 16.7, 4.2 Hz, H-7), 3.72 (2H, dt,= 9.4, 6.3 Hz, H-8′′, 8′′′), 3.91 (1H, dd,= 7.9, 6.3 Hz, H-9′a), 4.15 (1H, dd,= 7.9, 6.3 Hz, H-9′b), 5.42 (1H, d,= 6.3 Hz, H-7′′), 5.43 (1H, d,= 6.3 Hz, H-7′′′), 6.56 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2′), 6.61 (1H, d,= 1.5 Hz, H-6), 6.70 (1H, d,= 1.5 Hz, H-6′), 6.72 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2), 6.74 (2H, d,= 1.5 Hz, H-5′′, 5′′′), 6.75 (2H, dd,= 3.4, 1.5 Hz, H-5′′, 5′′′), 6.90 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′′), 6.92 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2′′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.6 (C-7), 37.7 (C-7′), 41.6 (C-8), 46.2 (C-8), 53.5 (C-8′′′), 53.6 (C-8′′), 56.0 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 56.1 (-OCH3), 63.3 (C-9′′), 63.6 (C-9′′′), 71.2 (C-9′), 87.5 (C-7′′), 87.5 (C-7′′′), 110.6 (C-2′′), 110.7 (C-2′′′), 113.0 (C-2), 113.8 (C-2′), 115.7 (C-6), 115.7 (C-6′), 115.7 (C-5′′), 117.3 (C-5′′′), 118.0 (C- 6′′), 119.1 (C-6′′′), 129.6 (C-1), 129.7 (C-1′), 131.5 (C-1′′), 132.0 (C-1′′′), 132.8 (C-5), 132.9 (C-5′), 143.8 (C-4′′′), 143.9 (C-4′′), 146.5 (C-4), 146.6 (C-4′), 146.8 (C-3′′), 146.8 (C-3′′′), 148.0 (C-3), 148.0 (C-3′), 179.0 (C-9)。與文獻數據[54]對比，鑒定化合物19為lappaol F。

化合物20：黃色針狀結晶[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 286 [M]+；C15H10O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.21 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 6.43 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 6.94 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3′, 5′), 8.12 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2′, 6′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 93.1 (C-8), 97.9 (C-6), 103.1 (C-10), 114.9 (C-3′, 5′), 122.3 (C-1′), 129.3 (C-2′, 6′), 135.8 (C-3), 146.7 (C-2), 156.9 (C-9), 159.2 (C-4′), 161.1 (C-5), 164.2 (C-7), 176.0 (C-4)。與文獻數據[55]對比，鑒定化合物20為山柰酚。

化合物21：黃色無定形粉末。EI-MS/: 536 [M]+；C30H32O9。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.45 (1H, m, H-8′), 2.48 (1H, s, H-7′), 2.72 (1H, m, H-8), 2.80 (1H, m, H-7), 3.73 (1H, m, H-8′′), 3.88 (1H, t,= 8.4 Hz, H-9′a), 4.12 (1H, dd,= 10.5, 5.1 Hz, H-9′b), 5.42 (1H, d,= 6.7 Hz, H-7′′), 6.55 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.57 (1H, d,= 1.6 Hz, H-6′), 6.60 (1H, brs, H-6), 6.66 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, s, H-5), 6.73 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5′′), 6.75 (1H, brs, H-6′′), 6.90 (1H, brs, H-2′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.1 (C-7), 37.6 (C-7′), 41.3 (C-8′), 46.1 (C-8), 53.6 (C-8′′), 56.0, 56.1, 56.1 (3×-OMe), 63.4 (C-9′′), 71.2 (C-9′), 87.4 (C-7′′), 110.7 (C-2′′), 113.1 (C-2), 113.9 (C-2′), 115.7 (C-5), 115.8 (C-5′′), 117.3 (C-6′), 119.0 (C-6′′), 122.1 (C-6), 129.3 (C-1′), 129.7 (C-1), 132.1 (C-1′′), 132.9 (C-5′), 143.9 (C-4), 145.5 (C-4′′), 146.5 (C-4′), 146.8 (C-3), 147.8 (C-3′′), 148.0 (C-3′), 179.0 (C-9)。與文獻數據[56]對比，鑒定化合物21為lappaol A。

化合物22：黃色無定形粉末。EI-MS/: 536 [M]+；C30H32O9。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.73 (1H, m, H-7′), 2.87 (1H, d,= 4.3 Hz, H-7a), 2.90 (1H, d,= 4.6 Hz, H-7), 3.56 (1H, dd,= 10.8, 7.2 Hz, H-8′′), 3.88 (1H, t,= 8.6 Hz, H-9′a), 4.09 (1H, t,= 8.1 Hz, H-9′b), 5.44 (1H, d,= 6.4 Hz, H-7′′), 6.47 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.49 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6), 6.62 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6′), 6.65 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, d,= 6.9 Hz, H-5′), 6.73( 1H, d,= 1.5 Hz, H-5′′), 6.74 (1H, m, H-6′′), 6.89 (1H, d,= 1.6 Hz, H-2′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.6 (C-7), 37.4 (C-7′), 41.7 (C-8′), 46.2 (C-8), 53.7 (C-8′′), 55.8, 55.9, 56.1 (3×-OMe), 63.7 (C-9′′), 71.2 (C-9′), 87.5 (C-7′′), 110.5 (C-2′′), 113.0 (C-2), 113.7 (C-2′), 115.7 (C-5′′), 115.8 (C-5′), 118.1 (C-6), 118.9 (C-6′′), 121.2 (C-6′), 129.5 (C-1), 130.0 (C-1′), 131.5 (C-1′′), 132.9 (C-5), 143.8 (C-4), 145.4 (C-4′′), 146.5 (C-4′), 146.8 (C-3), 147.9 (C-3′′), 148.0 (C-3′), 179.0 (C-9)。與文獻數據[54]對比，鑒定化合物22為lappaol B。

3.2 保肝護肝活性測試結果

活性測試結果（圖1）顯示，化合物8、11、13、14、16、20和22給藥組細胞存活率與模型組相比，有明顯的增高，表明化合物8、11、13、14、16、20和22有顯著的保肝護肝活性。

4 討論

小花清風藤是布依族、苗族民間用藥，用其根莖入藥，可用于醫治急性黃疸型肝炎。在臨床上該藥材也可用于治療病毒性肝炎[34]。近年來，貴州省先后以小花清風藤為主要配方開發了系列治療肝膽疾病的藥物。因此，本實驗研究了小花清風藤莖葉的化學成分及其保肝護肝活性，分離鑒定了22個化合物，主要有五環三萜類、生物堿、黃酮類、木脂素類等化合物。其中五環三萜類化合物有3個，分別為樺木酸甲酯（13）、白樺脂酸（14）和3-氧代齊墩果酸（15），生物堿類化合物有10個，黃酮類有1個，為山柰酚（20）；木脂素類有6個，分別為牛蒡子苷（16）、2-(3′′,4′′-dimethoxybenzyl)-3-(3′- methoxy-4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone（17）、matairesinol（18）、lappaol F（19）、lappaol A（21）和lappaol B（22），其他類化合物有2個，分別為油酸（2）和1,2,4-trimethoxybenzene（9）。其中化合物2、3、5～8、10～12和16～19為首次從清風藤屬植物中分離得到。

與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01

本實驗對化合物4、8、11、13、14和16～22進行了活性測試。模型組的LO2細胞用CCl4損傷，測定藥物對被CCl4損傷的LO2細胞的保護作用。結果化合物8、11、13、14、16、20和22顯著提高了被CCl4損傷的LO2細胞的存活率，表明藥物有顯著的保肝護肝作用。

本實驗進一步研究了小花清風藤的化學成分，為其物質基礎研究提供了依據。此前，小花清風藤藥理研究多限于粗提物，少有學者對其化合物進行活性評價。因此，本實驗豐富了小花清風藤化合物藥理活性的研究，小花清風藤具有開發成保肝護肝藥物的前景。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 唐繼方, 鄧朝義, 盧永成. 黔西南州小花清風藤資源分布及利用狀況調查 [J]. 貴州林業科技, 2002, 30(3): 8-10.

[2] 貴州省藥品監督管理局. 貴州省中藥材、民族藥材質量標準(2003版) [M]. 貴陽: 貴州科技出版社, 2003: 57.

[3] 胡祚俊, 徐少文, 徐耀中. 小花清風藤治療病毒性肝炎84例臨床總結 [J]. 貴州醫藥, 1989, 13(1): 48.

[4] 楊龍飛. 復方小花清風藤浸膏抗急性肝損傷作用及對炎癥干預作用的機制研究 [D]. 北京: 北京中醫藥大學, 2006.

[5] 劉易蓉, 邱曉春, 陳惠. 小花清風藤保肝作用實驗研究 [J]. 中國藥房, 2008, 19(30): 2341-2342.

[6] 李玉玲, 鄒坤, 李建橋, 等. 小花清風藤莖葉自然混合不同溶劑提取物對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用研究 [J]. 巴楚醫學, 2018, 1(1): 23-29.

[7] 李玉玲, 李建橋, 胡建忠, 等. 小花清風藤不同藥用部位及溶劑提取物對四氯化碳致小鼠急性損傷的保護作用 [J]. 三峽大學學報:自然科學版, 2019, 41(3): 102-107.

[8] 李建橋, 李玉玲, 胡建忠, 等. 小花清風藤水提物對乙酰氨基酚致小鼠藥物性肝損傷保護作用 [J]. 中國藥理學與毒理學雜志, 2019, 33(9): 733.

[9] 張學學, 趙東曉, 李建橋, 等. 小花清風藤莖葉提取工藝優化及保肝活性研究 [J]. 華中師范大學學報: 自然科學版, 2020, 54(1): 65-69.

[10] 曲新艷, 張會敏, 張曉娟, 等. 小花清風藤水提物體內抗流感病毒的研究 [J]. 生物技術通訊, 2015, 26(6): 802-804.

[11] 王茂林, 王永萍, 楊奕櫻, 等. 小花清風藤對類風濕關節炎大鼠TNF-α和MMP-9表達的影響 [J]. 湖南中醫雜志, 2018, 34(3): 154-157.

[12] 許歡, 潘書涵, 王永萍, 等. 小花清風藤醇提液對RA大鼠相關蛋白的影響 [J]. 中藥藥理與臨床, 2018, 34(6): 87-92.

[13] Fan D, Wang Q, Wang Y,. New compounds inhibiting lipid accumulation from the stems of[J]., 2018, 128: 218-223.

[14] 王小賢, 田甜, 蘇香萍, 等. 小花清風藤綠茶制備工藝及其抗氧化活性 [J]. 食品工業, 2019, 40(7): 29-33.

[15] 張為卿. 龍華清肝沖劑治療慢性乙型肝炎48例療效觀察 [J]. 貴州醫藥, 2011, 35(8): 742.

[16] 貴州百靈企業集團制藥股份有限公司. 藥品包裝盒(膽炎康膠囊A): 中國, CN200930312621.3 [P]. 2010-06-09.

[17] 楊瑩, 張永萍, 梁光義. HPLC法測定小花清風藤膠囊中齊墩果酸的含量 [J]. 中國民族醫藥雜志, 2012, 18(8): 63-65.

[18] 胡建忠, 蘇香萍, 鄒坤, 等. 一種小花清風藤金銀花復配花茶及作為保健品的應用: 中國, CN 201910543032.9 [P]. 2019-09-06.

[19] 陳艷. 小花清風藤化學成分的研究和道地藥材核磁共振指紋圖譜的研究 [D]. 貴陽: 貴州大學, 2016.

[20] 張雪晴, 李曼姝, 鄒坤，等. 我國清風藤屬藥用植物研究概況[J]. 生物資源, 2018, 40(6): 477-490.

[21] Chen J, Chen B, Tian J,. Two new pentacyclic triterpenes from[J]., 2002, 13(4): 345-348.

[22] 樊東輝, 李志峰, 趙蘭君, 等. 小花清風藤莖葉的化學成分研究 [J]. 中藥材, 2018, 41(6): 1372-1375.

[23] 林材, 曹佩雪, 梁光義. 小花清風藤的化學成分研究 [J]. 天然產物研究與開發, 2006, B06: 42-44.

[24] 陳艷, 黃滔, 苑春茂, 等. 小花清風藤化學成分的研究 [J]. 中草藥, 2015, 46(21): 3146-3150.

[25] 鄧赟, 陳謹, 陳斌, 等. 小花清風藤生物堿成分的研究 [J]. 天然產物研究與開發, 2003, 15(4): 322-323.

[26] 杜偉東, 吳蓓, 李志峰, 等. 小花清風藤化學成分的分離與鑒定 (II) [J]. 中草藥, 2019, 50(18): 4277-4280.

[27] 朱仝飛, 李萍, 孫慶文, 等. 小花清風藤葉的化學成分研究 [J]. 廣西植物, 2019, 39(4): 511-515.

[28] 趙蘭君, 王玉偉, 李志峰, 等. 小花清風藤化學成分的分離與鑒定 [J]. 中草藥, 2018, 49(3): 544-548.

[29] 林材. 清風藤等中藥化學成分的研究 [D]. 貴陽: 貴州大學, 2006.

[30] Sun Q W, Pan G J, Xu W F,. Isolation and structure elucidation of a new flavonol glycoside from[J]., 2021, 35(14): 2408-2413.

[31] 潘國吉, 孫慶文, 徐文芬, 等. 小花清風藤中黃酮類成分的研究 [J]. 中成藥, 2020, 42(3): 662-665.

[32] 李敏, 王羲雯, 李小菲, 等. 基于TLR4-NFκB的柴胡皂苷d-黃芩苷配伍抗CCl4損傷肝細胞的作用研究 [J]. 中醫藥導報, 2017, 23(18): 26-29.

[33] 李曼姝, 李建橋, 胡建忠, 等. 小花清風藤的化學成分及其對肝細胞的保護作用 [J]. 生物資源, 2018, 40(6): 491-494.

[34] 張學學, 趙東曉, 李建橋, 等. 小花清風藤莖葉提取工藝優化及保肝活性研究 [J]. 華中師范大學學報: 自然科學版, 2020, 54(1): 65-69, 73.

[35] Zaugg J, Baburin I, Strommer B,. HPLC-based activity profiling: Discovery of piperine as a positive GABA(A) receptor modulator targeting a benzodiazepine- independent binding site [J]., 2010, 73(2): 185-191.

[36] Abe M, Ito Y, Suzuki A,. Isolation and pharmacological characterization of fatty acids from saw palmetto extract [J]., 2009, 25(4): 553-557.

[37] Fockink D H, Mise K M, Zarbin P H G. Male-produced sex pheromone of the carrion beetles,and its attraction to food sources [J]., 2013, 39(8): 1056-1065.

[38] 魏娜娜, 婁紅祥. 大蒜葉化學成分研究 [J]. 山東大學學報: 理學版, 2012, 47(1): 8-11.

[39] Pachaly P, Adnan A, Will G. Zur NMR-spektroskopie von N-acylaporphin-alkaloiden aus[J]., 1992, 58(2): 184-187.

[40] Nozaka T, Morimoto I, Ishino M,. Mutagenic principles inet. I. The structure of a mutagenic alkaloid,-demethyl--formyldehydro- nuciferine, in the neutral fraction of the methanol extract [J]., 1987, 35(7): 2844-2848.

[41] 高巍, 楊柳, 李慧慧, 等. 杯鞘石斛的化學成分研究 [J]. 中國現代中藥, 2015, 17(4): 311-314.

[42] Chatterjee S, Variyar P S, Sharma A. Bioactive lipid constituents of fenugreek [J]., 2010, 119(1): 349-353.

[43] 盧龍海, 楊明, 林生, 等. 紅波羅花醋酸乙酯部位化學成分研究 [J]. 中國中藥雜志, 2009, 34(14): 1799-1801.

[44] Aliabadi A, Gholamine B, Karimi T. Synthesis and antiseizure evaluation of isoindoline-1, 3-dione derivatives in mice [J]., 2014, 23(6): 2736-2743.

[45] 姜苗苗, 馮毅凡, 張雪, 等. 景洪哥納香根的化學成分研究 [J]. 中草藥, 2011, 42(2): 214-216.

[46] Zhao G X, Rieser M J, Hui Y H,. Biologically active acetogenins from stem bark of[J]., 1993, 33(5): 1065-1073.

[47] 赫軍, 續潔琨, 楊弋帆, 等. 鬼箭羽中的1個新西松烷型二萜 [J]. 中草藥, 2018, 49(18): 4212-4215.

[48] 何小汝, 王雅琪, 徐柳云, 等. 猴子癭袋化學成分研究[J]. 世界中醫藥, 2019, 14(7): 1639-1642.

[49] 羅永明, 劉華, 尹小英, 等. 短梗大參的化學成分研究 [J]. 中國中藥雜志, 2012, 37(13): 1977-1980.

[50] 陶佳頤, 方唯碩. 陸英中化學成分的研究 [J]. 中國中藥雜志, 2012, 37(10): 1399-1401.

[51] 張忠立, 左月明, 李于益, 等. 杜仲葉化學成分Ⅱ [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2014, 20(20): 118-120.

[52] Min B S, Na M K, Oh S R,. New furofuran and butyrolactone lignans with antioxidant activity from the stem bark of[J]., 2004, 67(12): 1980-1984.

[53] Li Z X, Sha Y, Chen L C,. Two lignans from the fine roots of[J]., 2013, 49(2): 229-231.

[54] Umehara K, Sugawa A, Kuroyanagi M,. Studies on differentiation-inducers from[J]., 1993, 41(10): 1774-1779.

[55] 張維庫, 楊國恩, 李茜, 等. 對葉大戟化學成分的研究 [J]. 中國中藥雜志, 2006, 31(20): 1694-1696.

[56] 陳謹, 鄧赟, 唐天君, 等. 小花清風藤三萜成分的研究[J]. 中草藥, 2004, 35(1): 16-17.

Study on chemical constituents from tems and leaves ofand their hepatoprotective activity

LI Man-shu, KE Yin-qian, ZHANG Zi-qin, LIU Cheng-xiong, ZOU Kun

Hubei Key Laboratory of Natural Products Research and Development, College of Biological and Pharmaceutical Sciences, Three Gorges University, Yichang 443002, China

To study the chemical composition from the stems and leaves ofand their liver-protecting activity.Normal phase, reverse phase silica gel column chromatography, gel column chromatography and semi-preparative liquid chromatography were used for separation and purification, and the structures of the isolated compounds were identified by NMR and MS.Twenty-two compounds were isolated from the stems and leaves of, including-trans-feruloyl tyramine (1), oleic acid (2), ()-1, 8-Heptadeca diene (3),---coumaroyl octopamine (4), ()--formyl- nornuciferin() (5),-demethyl--formyldehydronuciferine (6),--cinnamoyltyramine (7), oleamide (8), 1,2,4- trimethoxybenzene (9), 2-(3-methoxyphenyl)isoindoline-1,3-dione (10), cheliensisaminone (11), squamolone (12), betulinic acid methyl ester (13), betulinic acid (14), 3-oxooleanolic acid (15), arctiin (16), 2-(3′′,4′′-dimethoxybenzyl)-3-(3′-methoxy- 4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone (17), matairesinol (18), lappaol F (19), kaempferol (20), lappaol A (21), and lappaol B (22).Compounds 2, 3, 5—8, 10—12, and 16—19 are isolated fromgenus for the first time. Among them, compounds 8, 11, 13, 14, 16, 20, and 22 have showed significant hepatoprotective activities.

Wall. ex Roxb.; liver protection activity; oleamide; cheliensisaminone; betulinic acid; arctiin

R284.1

A

0253 - 2670(2021)23 - 7096 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.23.003

2021-03-10

國家自然科學基金青年科學基金項目（81803383）；水利部水土保持植物開發管理中心合作項目（SDHZ2019030）

李曼姝（1996—），碩士研究生，研究方向為天然藥物化學。E-mail: limanshu168@126.com

劉呈雄（1986—），副教授，博士，研究方向為天然藥物化學。E-mail: liuchengxiong666@126.com

鄒 坤（1962—），教授，博士，研究方向為天然藥物化學。E-mail: kzou@ctgu.edu.cn

#共同第一作者：柯銀鉛（1997—），碩士研究生，研究方向為天然藥物化學。E-mail: 1135070919@qq.com

[責任編輯 王文倩]