血清Hcy、CysC、RBP及尿足細胞聯合檢測對2型糖尿病腎病早期診斷的臨床價值

徐晏玲，艾禾，漆丹平

1.成都市雙流區中醫醫院內科，四川 成都 610200；2.成都市中西醫結合醫院科教部，四川 成都 610041；3.成都市雙流區中醫醫院檢驗科，四川 成都 610200

糖尿病是臨床常見疾病，腎損傷是糖尿病患者最重要的合并癥，也是導致患者進展為終末期腎臟病的主要因素之一[1-2]。研究表明，糖尿病患者一旦進展至終末期腎臟病，會由于機體代謝紊亂，在治療上比其他腎臟疾病的治療更加困難，因此2型糖尿病腎病患者早期確診治療對提高患者生存率，延緩疾病進展有著重要意義[3]。目前有研究發現，糖尿病腎病患者疾病的發生與進展與氧化應激、炎癥反應等存在一定聯系，而血清同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(Cys C)、視黃醇結合蛋白(RBP)與機體氧化應激及炎癥反應有關，并且尿足細胞是腎小球濾過屏障的主要組成細胞，因此對Hcy、Cys C、RBP以及尿足細胞的檢測有助于判斷患者病情進展情況，具有重要臨床診斷價值。本文旨在進一步探討Hcy、Cys C、RBP及尿足細胞聯合檢測對2型糖尿病腎病早期診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇成都市雙流區中醫醫院2019年1月至2020年8月間收治的2型糖尿病腎病早期患者58例作為A組，同時選取我院收治的58例單純糖尿病患者作為B組，糖尿病患者均符合1999年WHO指定的2型糖尿病相關診斷標準，排除合并急慢性腎炎、尿路感染、原發性高血壓等疾病者。選取同時期在醫院體檢的健康者58例作為C組。A組中男性31例，女性27例；年齡36～78歲，平均(58.3±9.5)歲；病程3～13年，平均(7.2±1.9)年。B組中男性35例，女性23例；年齡36～79歲，平均(58.5±9.2)歲；病程3～12年，平均(7.4±1.8)年。C組中男性33例，女性25例；年齡36～78歲，平均(58.9±9.4)歲。三組受檢者的性別、年齡比較和A組和B組患者的病程比較差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所有受檢均知情并簽署知情同意書。

1.2 觀察指標與檢測方法

1.2.1 血清Hcy、CysC水平 清晨采集所有受檢者空腹靜脈血5 mL，置于肝素鋰抗凝管中，常溫下采用離心機以3 000 r/min的速度離心分離10 min，取上層清液置于-70℃冰箱內保存，待測。采用酶聯免疫吸附法檢測患者血清Hcy、CysC水平，檢測儀器為貝克曼AU5800全自動生化分析儀，Hcy檢測試劑盒購自北京九強公司，CysC試劑盒購自上海藍怡公司，所有操作均按說明書進行。

1.2.2 尿RBP、尿足細胞 取患者以及健康體檢者新鮮晨尿兩份，離心分離5 min，棄上層清液，沉渣采用PBS清洗3次，加入1 mL PBS重懸，然后加入PE標記鼠抗人足盂蛋白單克隆熒光抗體50μL，于4℃環境下孵育45 min，采用離心機離心分離5 min，分離完成后采用PBS清洗3次，沉渣中加入2 mL PBS重懸后轉移至BD絕對計數管，置于振蕩器上充分混勻后采用美國BD公司生產BD FACS Calibur流式細胞儀進行檢測。絕對細胞數=(熒光標記細胞計數×已知熒光小球總數×稀釋背書)/(熒光小球計數×樣本總體積)。

1.3 統計學方法 應用SPSS18.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較應用q檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，使用受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic，ROC)分析各指標診斷價值，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組受檢者的各項指標比較 A組患者的血清Hcy、CysC、RBP和尿足細胞水平明顯高于B組及C組，而B組患者的上述各項指標又明顯高于C組，差異均有統計學意義(P<0.0.5)，見表1。

表1 三組受檢者的各項指標比較(±s)

表1 三組受檢者的各項指標比較(±s)

注：與A組比較，a P<0.05；與B組比較，b P<0.05。

尿足細胞(個/μL)2.8±0.8 2.3±0.6a 0.7±0.1b 207.31<0.01組別A組B組C組F值P值例數58 58 58 Hcy(μmol/L)21.2±3.5 19.7±2.8a 7.7±1.9b 401.96<0.01 CysC(mg/L)1.8±0.3 1.5±0.2a 0.7±0.1b 401.86<0.01 RBP(mg/L)3.1±0.7 2.6±0.5a 0.8±0.1b 339.49<0.01

2.2 各項指標對2型糖尿病腎病的早期診斷價值 將A組和B組進行研究，以腎小球濾過率<90 mL/min作為2型糖尿病腎病診斷切點，ROC分析顯示血清Hcy、CysC、RBP以及尿足細胞診斷最佳切點分別為20.81μmol/L、1.75 mg/L、2.91 mg/L以及2.73個/μL，各項指標檢測敏感性血清CysC>RBP>尿足細胞>Hcy，并且四者聯合檢測可顯著提高診斷敏感性，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2和圖1。

表2 各項指標對2型糖尿病腎病早期診斷價值(%)

圖1 各項指標診斷2型糖尿病腎病的ROC曲線

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病中最嚴重的慢性并發癥，近年來呈逐年增長趨勢[4-5]。糖尿病腎病可分為早期糖尿病腎病、臨床期糖尿病腎病和晚期糖尿病腎病。部分早期糖尿病腎病患者經治療后可恢復正常，近一半的患者在治療后病情不會進展，會停留在微量蛋白尿階段[6-7]。因此，早期診斷糖尿病腎病并采取積極治療，是提高生存質量，改善預后的重要手段。

Hcy是人體內含硫氨基酸的重要中間代謝產物之一，可損傷患者的血管內皮細胞，促進血管內皮細胞及平滑肌細胞增生，影響到患者腎小球基底膜功能。相關研究表明，早期2型糖尿病腎病患者由于糖脂代謝異常，Hcy生成過多，自由基生成而出現氧化應激損傷。腎功能受損后，腎臟清除Hcy的能力也會下降，Hcy甲基化能力降低以及含硫氨基酸的代謝均為患者體內Hcy水平升高的原因[8-10]。本研究顯示，2型糖尿病腎病患者血清Hcy水平均明顯高于單純糖尿病患者及正常人群。

CysC是有核細胞產生的一種低分子量蛋白，正常情況下會在經腎小球過濾后會被腎小管上皮細胞吸收。CysC對腎小球以及腎小管損傷的評估有重要診斷意義。2型糖尿病腎病患者在正常蛋白尿階段，CysC水平即升高，標志患者出現腎損傷[11-13]。RBP作為一種低分子量蛋白質，正常情況下將視黃醇從肝臟運轉到上皮細胞，隨著人尿液排出的量極少，當患者肝臟出現損傷后，游離的RBP不會被腎小球濾過被近曲小管吸收分解，而是隨尿液排出。足細胞作為腎小球濾過屏障的重要組成部分，在對大分子的濾過的過程中發揮著重要作用，當2型糖尿病早期患者出現微量白蛋白尿階段時，足細胞脫落功能受損，密度降低，因此在尿液中可檢測到大量蛋白質[14-15]。

上述各項指標能夠從不同角度體現糖尿病腎病患者的病情程度，多指標聯合檢測能夠顯著提高糖尿病腎病的診斷準確率，聯合檢測對患者病情確診有著重要意義，可作為糖尿病患者預防以及動態監測的可靠指標。本研究顯示，血清Hcy檢測的陽性率為60.3%，CysC為79.3%，RBP為87.5%，尿足細胞為74.1%，四者聯合檢測的陽性率為94.8%，四者聯合檢測陽性率高于單一指標檢測。這是由于患者尿微量白蛋白的排除量以及血清胱抑素C、尿視黃醇結合蛋白水平均隨著患者糖尿病腎病的進展呈現出明顯增加的趨勢。而尿液中足細胞水平的升高提示患者腎小球發生病變，當患者為微量白蛋白尿時，腎臟足細胞的密度明顯降低，一旦進展為大量蛋白尿時，腎臟足細胞密度降低更為明顯，因此尿足細胞的數量測定對2型糖尿病患者早期腎病的預測具有重要的臨床意義[16-18]。

綜上所述，2型糖尿病患者在出現腎損傷時，血清Hcy、CysC、RBP及尿足細胞水平明顯升高，因此四者聯合檢測對患者早期診斷有著重要意義。