心房顫動患者血清FGF-23、miR-208b的表達水平及臨床意義

張磊，丁輝

西北大學附屬醫(yī)院·西安市第三醫(yī)院心內科，陜西 西安710018

心房顫動是臨床快速性心律失常之一，發(fā)生率和患病率逐年增加[1]。心房顫動的發(fā)生常合并有中風和血栓栓塞事件、心力衰竭、心肌梗塞和認知能力下降，并且慢性腎臟疾病和其他疾病發(fā)生的風險也增加[2]。靈敏度高的血清學標志物有助于房顫早期診斷[3]。成纖維細胞生長因子23(FGF-23)是成纖維細胞生長因子(FGF)超家族的成員，與心血管疾病的發(fā)展密切相關[4]。多數miRNA在患者機體表現(xiàn)出組織特異性，并可以在血清中穩(wěn)定表達，是潛在生物標記物[5]。目前，在急性心肌梗死患者的血漿中發(fā)現(xiàn)了miR-208b的表達，這表明心臟特異性miR-208b可以從受損的心肌細胞釋放到血液循環(huán)中[6]。本文旨在探討血清FGF23、miR-208b在心房顫動患者中的表達水平及其臨床意義，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選取2018年5月至2019年10月在西安市第三醫(yī)院治療的心房顫動患者240例(觀察組)，其中陣發(fā)性房顫患者134例，持續(xù)性房顫患者106例。納入標準：(1)診斷符合2016年ESC房顫管理指南診斷標準；(2)心功能NYHA分級為Ⅰ～Ⅱ級；(3)隨訪1年，臨床隨訪資料保存完整。排除標準：(1)伴有瓣膜性心臟病等心臟疾病；(2)合并有惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他疾病；(3)近1個月內有感染者。同時選取竇性心律健康體檢者150例作為對照組，觀察組和對照組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究獲得西安市第三醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

表1 兩組受檢者的一般資料比較[±s，例(%)]

表1 兩組受檢者的一般資料比較[±s，例(%)]

組別觀察組對照組t/χ2值P值例數240 150男性168(70.00)98(65.33)0.927 0.336年齡(歲)60.50±9.28 59.22±10.11 1.280 0.201體質量指數(kg/m2)23.30±5.44 22.83±6.50 0.769 0.442吸煙103(42.92)56(37.33)1.192 0.275飲酒63(26.25)34(22.67)0.634 0.426

1.2 觀察指標與檢測方法 (1)miR-208b表達水平檢測：所有患者入院后次日清晨取3 mL靜脈血標本，同時取對照組患者空腹靜脈血，將其放入EDTA抗凝管中，以2 000 r/min的速度在4℃下離心20 min，然后取上清液保存在-80℃的冰箱中。實時定量PCR方法(QRT-PCR)用于檢測血清中的miR-208b。總RNA提取：按照試劑盒的說明進行操作，將血清加入無RNA酶的離心管中，加入裂解液，充分混合并裂解，按照分光光度法檢測濃度和純度。逆轉錄合成反應系統(tǒng)：RNA模板2μL，RT引物2μL，5×RT緩沖液5μL，dNTP(2.5 mm)2μL，40 U/μL RNase Inhibitor 0.5μL，20 U/μL RT酶0.5μL，ddH2O 24μL按照逆轉錄試劑盒中的步驟將RNA逆轉為cDNA。qRT-PCR檢測：以β-actin為內部參考基因，以cDNA為模板進行逆轉錄。反應系統(tǒng)：cDNA 2μL，2×SYBR Green qPCR混合物10μL，正向引物1μL，反向引物1μL，焦碳酸二乙酯6μL的二乙氧基碳酸氫鹽(DEPC)水，總反應量20μL，每個靶基因重復3次。反應條件：95℃10 min；95℃15 min；60℃1 min；40循環(huán)，72℃30 s。啟動qRT-PCR儀器進行PCR擴增，并使用2-ΔΔCT方法計算miR-208b的相對表達。(2)血清FGF23濃度檢測：入院后次日清晨收集患者5 mL空腹肘靜脈血，同時取對照組患者空腹靜脈血，靜置20 min后3 000 r/min離心10 min，分離上清通過酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測血清FGF23濃度。(3)心功能和結構指標測定：使用DW-CE540彩色多普勒超聲診斷儀(大為醫(yī)療有限公司)，S5-1探頭，頻率為2～5 MHz。患者左側位，取左心室靠近胸骨的長軸部分，取左心室靠近胸骨的長軸部分，從主動脈遠端后壁取垂直線到左心房后壁內膜進行測量，測量心室收縮末期左心房內徑（LAD）、左心室舒張末期心肌梗死期直徑(LVEDD)、左心室收縮末期的左心室直徑(LVSD)。采取心尖四腔和兩腔心切面，并使用Simpon方法計算左心室射血分數(LVEF)。連續(xù)評估5～7個心動周期并取平均值。(4)比較不同預后患者的血清FGF-23、miR-208b水平：隨訪1年，檢測并比較觀察組不同預后患者的血清FGF-23、miR-208b水平。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS22.0軟件分析數據，計量資料符合正態(tài)分布，以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗；采用Pearson相關法分析血清FGF-23、miR-208b相對表達量與LAD的相關性。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組受檢者的血清FGF-23、miR-208比較 觀察組患者的血清FGF-23、miR-208b相對表達量明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組受檢者的血清FGF-23、miR-208b比較(±s)

表2 兩組受檢者的血清FGF-23、miR-208b比較(±s)

組別觀察組對照組t值P值例數240 150 FGF-23(ng/mL)210.20±89.60 110.04±32.29 13.162 0.001 miR-208b相對表達量5.30±1.22 2.90±0.88 20.926 0.001

2.2 觀察組不同亞組患者血清FGF-23、miR-208b及心臟參數比較 觀察組中的持續(xù)性房顫患者的血清FGF-23、miR-208b相對表達量明顯高于陣發(fā)性房顫患者，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；持續(xù)性房顫患者LAD明顯高于陣發(fā)性房顫患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 觀察組不同亞組患者血清FGF-23、miR-208b及心臟參數比較(±s)

表3 觀察組不同亞組患者血清FGF-23、miR-208b及心臟參數比較(±s)

項目男性[例(%)]年齡(歲)FGF-23(ng/mL)miR-208b相對表達量LAD(mm)LVEDD(mm)LVESD(mm)LVEF(%)陣發(fā)性房顫(n=134)98(73.13)61.02±10.11 191.20±65.59 4.88±1.02 34.03±4.02 50.03±6.03 32.10±5.58 53.30±7.81持續(xù)性房顫(n=106)70(66.04)59.89±9.92 234.22±70.05 5.83±1.00 38.81±5.11 49.81±5.82 32.01±6.02 52.83±8.10 t值1.419 0.867-4.896-7.227-8.112 0.285 0.12 0.455 P值0.234 0.387 0.001 0.001 0.001 0.776 0.905 0.649

2.3 血清FGF-23、miR-208b相對表達量與LAD的相關性 血清FGF-23、miR-208b相對表達量與LAD呈正相關(r=0.411，0.382，P<0.05)。

2.4 不同預后患者的性別、年齡、血清FGF-23、miR-208b水平比較 隨訪1年，根據隨訪期間是否發(fā)生主要心血管事件(MACE)，將患者分為MACE組58例和非MACE組182例。MACE組患者的血清FGF-23和miR-208b明顯高于非MACE組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 MACE組和非MACE組患者的性別、年齡、血清FGF-23和miR-208b比較[±s，例(%)]

表4 MACE組和非MACE組患者的性別、年齡、血清FGF-23和miR-208b比較[±s，例(%)]

組別MACE組非MACE組t值P值例數58 182男性43(74.14)125(68.68)0.624 0.43年齡(歲)61.19±10.54 62.28±9.89-0.719 0.473 FGF-23(ng/mL)243.30±72.29 199.65±71.43 4.041 0.001 miR-208b相對表達量6.12±1.12 5.04±1.07 6.619 0.001

3 討論

心房顫動的發(fā)生和維持機制較為復雜，肺靜脈異位興奮性灶發(fā)出的電脈沖被認為是房顫的重要機制，心房纖維化被認為對于維持和持續(xù)房顫的難度很重要因子[7-9]。尋找具有高度特異性和敏感性的生物標志物具有重要意義。心血管系統(tǒng)疾病通常伴隨著外周循環(huán)血液中miRNA水平的變化，由于冠狀動脈的急性阻塞，心肌細胞局部缺血，導致心力衰竭和血流中斷，早期診斷和有效治療有助于改善患者的預后[10-11]。

先前對FGF23的研究集中在慢性腎臟疾病和心血管疾病之間的關系，而對非慢性腎臟病患者中FGF23水平與房顫之間關系的報道很少。FGF-23生物學作用的發(fā)揮需要與FGF受體結合，這需要α-Klotho蛋白作為共受體發(fā)揮關鍵輔因子作用[12]。α-Klotho蛋白主要分布在腎臟和甲狀旁腺中，可以在組織中特異性表達[13]。FGF-23參與多種心血管疾病的發(fā)生，目前的研究已經證實，F(xiàn)GF-23水平升高與左心室肥大，高血壓，心源性死亡和全因死亡的發(fā)生顯著有關[14]。研究表明，高水平的FGF-23可用作心血管事件的獨立預測因子[15]。然而，很少有關于FGF23水平與心房顫動疾病之間關系的報道。

心血管系統(tǒng)疾病如心力衰竭，心肌梗塞和冠心病患者的外周循環(huán)血液中miRNA水平通常發(fā)生變化。miR-208a和miR-208b都是心臟組織特異性miRNA[16]。本次研究結果顯示，觀察組血清FGF-23和miR-208b的相對表達水平明顯高于對照組，并且MACE患者兩者水平較高，隨著患者病情的惡化，各項指標發(fā)生明顯變化，提示FGF23蛋白在房顫患者中呈現(xiàn)異常表達表達。影響FGF-23和miR-208b水平的因素可能有心房超負荷，心房收縮功能障礙和心功能降低等，兩者可以作為心房顫動發(fā)生的獨立預測因素。FGF23的作用機制可能是激活蛋白激酶C信號轉導途徑，使得心肌細胞之間的鈉電流增加，L型鈣電流和鈣瞬變，導致鈣和鈉失衡。LAD、LVEDD、LVESD和LVEF等可能反映了房顫的嚴重程度[17-18]。本研究結果發(fā)現(xiàn)，房顫患者的LAD升高，并隨心房顫動的發(fā)展而相應增加，與先前的研究和提示相似，表明LAD可能是房顫發(fā)生和嚴重程度的危險因素。原因可能是心房顫動患者機體炎癥介導的心房結構重塑和電學重塑可能是維持和發(fā)展心房顫動的重要因素，左心房擴大程度與房顫的復發(fā)和血栓形成密切相關。研究表明，房顫的發(fā)生和發(fā)展受多種機制和因素的影響，尤其與左心房結構重塑和電生理重塑密切相關[19-20]。本次研究中不僅研究了心臟參數LAD變化，還比較了不同患者血清FGF-23、miR-208b變化，發(fā)現(xiàn)與房顫的嚴重程度有關，有助于房顫患者病情的診斷，評估和預后。

綜上所述，心房顫動患者血清FGF-23，miR-208b升高，與疾病類型、心臟參數及預后有一定相關性。