對奶牛布魯氏桿菌病檢測相關問題的思考

張夢鴿

（山西省運城市畜牧獸醫發展中心 044000）

布魯氏桿菌病又被稱為布氏桿菌病，是一種由布氏桿菌引起的慢性人畜共患傳染病，世界動物衛生組織將其稱作B 類動物疫病，很大程度上阻礙奶牛業的發展[1]。而且需要注意的是，奶牛布魯氏桿菌病同樣可以傳染人類，進而對人類健康造成威脅，同樣需要引起廣泛重視。

1 奶牛布魯氏桿菌病的基本分析

1.1 布魯氏桿菌病病因分析

布魯氏桿菌病（Brucellosis）是由布魯氏桿菌（Brucella）引起的具有傳染性人畜共患病。普通家畜均為其易感動物。在我國流行的菌株中主要以牛種、羊種布魯氏菌為主，其中牛種布魯氏菌病對奶牛業危害最為嚴重。該病具有極高致病性，通常呈現地方流行性。布魯氏桿菌病的傳染源主要在于患病奶牛及其他帶菌動物，敏感性強，但對溫度十分敏感，沸水即可殺死布魯氏桿菌。同時，布魯氏桿菌病轉移性極強。布魯氏桿菌病主要通過消化道進行傳播，當奶牛接觸患病奶牛或被其污染的飼料、乳汁、分泌物甚至地面土壤后均可能會造成一定的程度感染。而人類如果缺乏必要的消毒防護措施，貿然接觸患病奶牛或相關動物源性食品，布魯氏桿菌會透過人類皮膚黏膜侵入呼吸道及結膜等，促使人類感染布魯氏桿菌病[2]。對于奶牛而言，布魯氏桿菌病的主要特征在于母牛流產，產出死胎或脆弱犢牛。

1.2 布魯氏桿菌病臨床表現

布魯氏菌病主要侵害奶牛自身生殖系統，引發一系列繁殖障礙等疾病。懷孕母畜經常以發生流產現象為主，引起關節炎、子宮炎、腹膜炎等炎癥，甚至可能會造成奶牛不孕等情況。對于感染布魯氏桿菌病奶牛所出現流產問題，可能會出現在其中任何環節，孕育奶牛流產前期便會出現無法正常休息、食欲不振等情況；新生犢牛一般可以見到肺炎病灶；公牛也可被感染，公牛感染后會出現睪丸炎等情況，一般不易被發現。人類如果感染上布魯氏桿菌病一般表現為渾身無力、低燒、生殖系統障礙等疾病，嚴重者可終身喪失勞動力甚至死亡，需要引起重視，及時預防。

2 奶牛布魯氏桿菌病的診斷方法

2.1 細菌學診斷

通過分離布魯氏桿菌培養、涂片染色進行診斷的試驗方法。其中標本采集是重中之重。選取適宜的抗生素在合適的部位按照相關試驗要求完成采集工作，采樣結束接種于培養基培養。對比所形成的菌落與布魯氏桿菌的生物特性進行鑒別；涂片染色通常是將血液等組織制作成涂片，采取沙黃、亞甲藍鑒別法進行染色，顯微鏡下觀察染色情況，如果被染成紅色，那么證明檢驗的細菌為布魯氏桿菌，如果呈現藍色，則證明所檢驗細菌為其他細菌。細菌學診斷準確性高，但存在潛在的感染風險，因此，要求相關人員有一定的專業基礎。

2.2 虎紅平板凝聚試驗

虎紅平板凝聚試驗（RBPT）又被稱為班氏孟加拉紅平板凝集試驗，是一種較為簡單便捷的檢測方式，常常應用于陽性牛的初步篩選[3]。檢測布魯氏桿菌病所使用的抗原是經過虎紅染料染色后懸浮于乳酸緩沖液中制備而成，所以呈現粉紅色。通過血清對照進行判斷，如果受檢血清在4min 內出現肉眼可見凝集現象則判為陽性；如果無凝集現象，呈均勻粉紅色則判為陰性。虎紅平板凝聚試驗雖然會出現假陰性等缺點，但有靈敏性高、操作簡單、成本低的優勢，是布魯氏桿菌病常用的監測手段之一。

2.3 試管凝集反應

試管凝集反應主要適用于實驗室操作，是一種較為快速的診斷方法。試管凝集反應經常用于定量試驗。通過將抗原與受稀釋的奶牛待測血清混合放置，觀察凝集現象，以此來確定血清中是否存在該抗體和該抗體的含量。該方法易受外界因素的影響，容易出現假陽性和假陰性的結果。

2.4 奶牛布病快速診斷試紙條

奶牛布病快速診斷試紙條又被稱為膠體金法快速診斷試紙，是當前我國用于檢測布魯氏桿菌病的一種新型診斷方法。經常用于奶牛場隨時初次檢驗，奶牛場防疫工作人員可以通過奶牛布病快速診斷試紙條對牛群布魯氏桿菌病患病情況進行初步檢驗，簡單快速，而且試管凝聚方法的符合率很高，是現階段進行布魯氏桿菌病檢測的常用方法。

2.5 ELISA 反應法

ELISA 反應法通常采用固相載體表面抗原與抗體的特異結合，在酶的作用下底物發生顏色變化。測定對象可以是抗體也可以是抗原。ELISA 反應法包括間接法、雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、競爭法、阻斷法等。ELISA 反應法的優勢在于其準確率高，出錯率低且判定簡單。

2.6 實時熒光定量PCR

實時熒光定量PCR 技術是在分子水平上對病原進行鑒定，具有特異性強、靈敏度高的特點，較細菌學、血清學相比有更高的安全性，可以同時對大批樣品進行檢測。隨著非洲豬瘟的流行，分子病原學檢測技術已普及到縣（市、區）級獸醫實驗室，在未來實驗室監測會成為主流監測手段。

3 奶牛布魯氏桿菌病的防控措施

3.1 確保衛生，定期消毒檢查

需要明確的是，奶牛布魯氏桿菌病病因復雜，近年來，發病率也在逐漸上升，對畜牧業造成極大威脅，而人類一旦患病，嚴重時可危及生命，對畜牧業和公共衛生安全造成不可估量的經濟損失，所以必須引起重視。當前對布魯氏桿菌病缺乏切實有效的藥物，主要以預防為主。衛生是第一大關，保證養殖場環境安全衛生才能保證奶牛健康成長，避免因環境問題加劇布魯氏桿菌病。

對于奶牛養殖場而言，應設立獨立的消毒通道，確定無菌空間。工作人員進出奶牛場需進行消毒；對奶牛場養殖環境定期消毒；應科學合理的喂食奶牛飼料提高奶牛自身免疫力；每天清理奶牛糞便，如果需要積累肥料，也應做好糞便無害化處理，搞好衛生消毒，提供安全的奶牛生活環境。

3.2 管理嚴格，避免交叉感染

在保證奶牛安全的生活環境基礎上，應對奶牛進行定期免疫，同時進行血清學監測監督奶牛抗體水平，抗體不達標時應注意加強免疫等工作。定期進行布魯氏桿菌病檢測工作，避免染病奶牛進入奶牛養殖場。布魯氏桿菌病對奶牛自身傷害極大，而且具有極強污染性，所以應定期進行分子病原學檢測，確保沒有布魯氏桿菌病原。對已感染布魯氏桿菌病的奶牛，由于很容易進行傳染，必須采取撲殺方式，并進行消毒處理，確保凈化可靠，只有保證安全無菌的奶牛生活環境，嚴格管控奶牛養殖場，才能避免患病奶牛發生交叉感染情況，將布魯氏桿菌病進一步擴大。

奶牛養殖場工作人員應確保自身健康，定期進行體檢，布魯氏桿菌病不僅能傳染動物，也能傳染人類，所以在整個奶牛養殖過程必須做好自身防護工作，奶牛養殖場應避免非工作人員進入奶牛養殖場。

3.3 強化根除，科學飼養奶牛

奶牛養殖場工作人員確保衛生消毒，以及奶牛養殖場環境確保定期檢查的基礎上，奶牛養殖場應適當采取科學飼養方式，提高奶牛自身免疫力，同時避免引進外部奶牛，而是采取自繁自養，從源頭處防控布魯氏桿菌病。對奶牛進行科學合理的疫苗接種，一般奶牛在牛犢出生后6 個月就可以采取一次疫苗接種，18 個月可以進行二次接種疫苗，切實確保安全健康。

4 結論

綜上所述，預防奶牛布魯氏桿菌病對保障奶牛健康和人類安全十分重要。對現階段布魯氏桿菌病診斷方法應針對不同情況用以試驗檢測，奶牛養殖場工作人員也應予以重視，做到科學養殖，嚴格消毒，確保環境安全衛生，全方位防控布魯氏桿菌病，提升奶牛布魯氏桿菌病自身防控水平。