正交試驗優(yōu)選柴胡中黃酮類化合物提取工藝的研究

鄂文君

摘要：[目的] 優(yōu)選柴胡中黃酮提取的最佳工藝。[方法] 采用正交試驗法對柴胡中黃酮的提取工藝進行優(yōu)選，以4個黃酮類活性成分（蘆丁、槲皮素、山奈素和異鼠李素）的總含量為指標，采用液相方法測定。[結(jié)果] 最佳工藝為在50 ℃的60%乙醇（料液比1∶5）中浸漬30 min，超聲功率80 W提取20 min。[結(jié)論] 該工藝合理，有效成分提取效率高。

關(guān)鍵詞：正交試驗;柴胡;黃酮類化合物;HPLC;提取工藝

[Objective] to optimize the extraction process of Flavonoids from Bupleurum[ Methods] the extraction process of Flavonoids from Bupleurum was optimized by orthogonal test. The total contents of four flavonoids（rutin，quercetin，kaempferol and isorhamnetin）were determined by liquid phase method[ Results] the optimum process was to soak in 60% ethanol（solid-liquid ratio 1 ∶ 5）at 50 ℃ for 30 min，ultrasonic power 80 W and extract for 20 min[ Conclusion] the process is reasonable and the extraction efficiency of effective components is high.

Keywords orthogonal test;Bupleurum;Flavonoids;HPLC;extraction process

中藥柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.和狹葉柴胡B.scorzonerifolium Willd.的干燥根，前者習稱北柴胡，后者習稱南柴胡。柴胡能散風退熱、升陽疏肝，用于治療感冒發(fā)熱、寒熱往來、痢疾、肝郁氣滯、胸脅脹痛、子宮脫垂、脫肛、月經(jīng)不調(diào)等癥。北柴胡主產(chǎn)于河北、河南、遼寧、陜西等。柴胡為常用大宗藥材，其重要的藥用價值使需求逐年增加，不僅國內(nèi)需要量大，且大量出口。由于長期依賴采挖，野生資源及其生境破壞嚴重，資源已近枯竭，目前商品柴胡主要依賴栽培。柴胡存在嚴重的種內(nèi)和種間類型混雜的現(xiàn)象，導致柴胡品種優(yōu)劣不等的問題。不同地區(qū)使用的藥用部位也不盡相同，藥典規(guī)定柴胡的藥材為柴胡的根，但市場上的藥材往往是根和5～10 cm莖的混品入藥，有人則以地上部分入藥。

柴胡中的有效成分為柴胡皂苷、甾醇、揮發(fā)油和多糖等，此外，還含有黃酮類成分。黃酮類化合物對人體在抗腫瘤、抗衰老及心血管等疾病的治療和預防有重要意義。如蘆丁具有抗氧化、抗基因突變和降低毛細血管異常通透性及脆性的作用，臨床上用于治療過敏性紫癜及各種因毛細血管脆性增加而引起的出血性疾病，也用于治療高血壓和老年氣管炎等。槲皮素是黃酮類化合物中具有代表性的一種，研究發(fā)現(xiàn)槲皮素具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗糖尿病并發(fā)癥等多種生物活性及藥理作用，對呼吸道疾病，特別是對哮喘病和支氣管疾病有較好的作用。

目前國內(nèi)關(guān)于柴胡提取工藝的文獻報道較多，但多以皂苷類、揮發(fā)油指標進行考察，很少有單獨考察黃酮類化合物的文獻，因此，該研究采用正交試驗考察柴胡中黃酮類化合物的提取及其不同部位的含量，為提高仿生栽培柴胡的質(zhì)量和療效打下基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1儀器島津LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津制作所）;HU312超聲波清洗器（天津奧特賽斯物理光學儀器廠）;賽多利斯BP200S-WEI電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）;電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2試藥仿生栽培樣品采自黑龍江省的明水縣柴胡種植基地，野生柴胡樣品采自黑龍江省的明水縣本地;蘆丁（批號100080-200801）、槲皮素（批號100081-200502）、山柰素（批號 110861-200805）、異鼠李素（批號110860-200504）均購自中國食品藥品檢定研究院，純度均大于98%;乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

1.3方法

1.3.1柴胡中黃酮類化合物含量測定。

1.3.1.1色譜條件。迪馬C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脫，0～15 min（5%～20%A）、15～30 min（20%～35%A）、30～45 min（35%～45%A）、45～55 min（45%～50%A）、55～60 min（50%～5%A）;洗脫時間為60 min;檢測波長360 nm;流量1.0 ml/min;柱溫為35 ℃，進樣量20 μl。

1.3.1.2標準曲線及線性范圍。準確稱取蘆丁、槲皮素、山柰素、異鼠李素對照品各約20 mg，分別置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度?；靹蚝蠓謩e進樣2、5、10、20、30 μl，按“1.3.1.1”色譜條件作HPLC分析。以峰面積對進樣量進行回歸處理，得蘆丁、槲皮素、山柰素、異鼠李素的線性回歸方程和線性范圍（表1）。

1.3.2樣品測定。

精密吸取20 μl樣品溶液，在“1.3.1.1”色譜條件下測定，記錄峰面積，分別計算相應黃酮類化合物的含量，再計算總量。

1.3.3正交試驗。以柴胡中4種黃酮類化合物含量的總量

為指標，設(shè)定pH=7、浸漬時間30 min、提取時間20 min，分別以乙醇溶度、料液比、浸漬溫度和超聲功率等主要因素及不同水平進行L9（34）正交設(shè)計（表2），篩選最佳工藝。

2結(jié)果與分析

2.1正交試驗結(jié)果

由表3可知，浸漬溫度的極差Rj最大，其次是超聲功率，故對黃酮類化合物提取效果的影響大小順序是A>D>B>C，即浸漬溫度>超聲功率>乙醇濃度>料液比。由于料液比影響不顯著，故綜合考慮，選擇最佳方案

2.2最佳方案的驗證試驗

取柴胡的根、莖和葉分別按最佳方案提取，重復2次。結(jié)果顯示，此最佳工藝提取黃酮類化合物其含量較高，且工藝條件穩(wěn)定可靠、重現(xiàn)性好。

3討論

（1）黃酮類化合物穩(wěn)定性差，在較高溫度下易分解氧化，因此提取時注意溫度的控制。

（2）分析葉片和莖中黃酮類化合物的含量高于傳統(tǒng)使用的根，劉秀芳等研究認為小葉黑柴胡莖葉中總黃酮具有很好的抗氧化活性;詹雪晶等研究認為柴胡莖葉中總黃酮對四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝損傷有保護作用。故很有必要對莖、葉進行進一步的研究，擴大柴胡用藥部位。

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