基于AHP分析的處州白蓮蓮房原花青素超聲波輔助提取工藝研究

于金英，王 津，全奕潔，汪 冶

（麗水學院，浙江麗水 323000）

蓮房（蓮蓬）是蓮的成熟花托，是蓮子收獲過程中產生的副產物，一般在蓮子采收過程中被丟棄。蓮房與葡萄籽相似，含有大量原花青素成分，原花青素是由不同數量的兒茶素或兒茶素單體及其聚合體形成的多酚化合物組成的，按照聚合度的不同以及單體的構象或鍵合位置的不同可形成多種化合物，一般分為低聚體OPC（聚合度n=2～4）和高聚體PPC（聚合度n≥5）。聚合體的抗氧化能力隨著聚合度的增大而降低，且低聚體（OPC）較高聚體（PPC）具有良好的生物利用度[1]。為了有效利用蓮房原花青素（Procyanidins Of Lotus Seedpod，LSPC），本研究利用層次分析法（The Analytic Hierarchy Process，簡稱AHP法）開展多指標優選的綜合評價，通過對3個實驗指標：蓮房原花青素（LSPC）提取率、低聚蓮房原花青素（LSOPC）提取率、高聚蓮房原花青素（LSPPC）提取率進行綜合評估，可以更加客觀地反映處州白蓮蓮房中蓮原花青素（LSPC）的提取效率和質量。

1 材料與方法

1.1 材料

處州白蓮蓬購于麗水市蓮都區老竹鎮處州白蓮種植基地，剝除蓮子，將蓮蓬自然陰干。

1.2 儀器與試劑

SG250H超聲波提取器、HX-5FD真空冷凍干燥設備。兒茶素標準品（上海源葉生物科技有限公司）、硫酸、香草醛、甲醇、乙醇。

1.3 實驗方法

1.3.1 蓮房原花青素提取

選用陰干的去除蓮子的干燥蓮房若干，用高速粉碎機粉碎，過24目篩，稱取適量粉末，加入一定量的乙醇，超聲提取，離心過濾得到提取液。提取液經過薄層旋轉蒸發儀回收酒精后，剩余水溶液進行冷凍干燥處理制備蓮房原花青素（LSPC）樣品。

1.3.2 低聚蓮房原花青素（LSOPC）和高聚蓮房原花青素（LSPPC）樣品制備

利用蓮房原花青素中低聚體和高聚體溶解性差異進行分級分離。將上述制備的蓮房原花青素樣品溶于水，首先采用等體積乙酸乙酯萃取3次富集低聚蓮房原花青素，回收溶劑制備低聚蓮房原花青素（LSOPC）樣品，萃取后的水溶液經冷凍干燥制備高聚蓮房原花青素（LSPPC）樣品。

1.3.3 蓮房原花青素含量的測定

（1）兒茶素標準曲線的繪制。準確稱取兒茶素標準品25 mg，用70%乙醇溶解并定容至25 mL，配制兒茶素標準貯備液1 mg/mL。分別移取兒茶素標準貯備液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL至25 mL容量瓶中，加入70%乙醇定容，制備得到 濃 度 為 0.04 mg/mL、0.08 mg/mL、0.12 mg/mL、0.16 mg/mL和0.20 mg/mL的兒茶素標準品溶液。分別移取上述不同濃度的溶液0.5 mL置于10 mL比色管中，然后依次加入2.5 mL的30 g/L香草醛-甲醇溶液和2.5 mL的30%硫酸-甲醇溶液，在30 ℃水浴里避光反應15 min，在波長500 nm處測定吸光值，以兒茶素濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制兒茶素的標準曲線[2]。

（2）蓮房原花青素提取率的計算。取1.3.1和1.3.2項制備的樣品，按照（1）項操作。用70%乙醇作為待測液，在相同條件下，作一組空白對照試驗。利用兒茶素標準曲線的回歸方程計算提取液中原花青素的質量濃度，然后計算蓮房原花青素的提取率。

式中：n為提取液稀釋倍數；c為提取液中原花青素的質量濃度，mg/mL；V為提取液體積，mL；m為蓮房樣品質量，g。

1.3.4 正交試驗設計優化提取工藝

在單因素試驗基礎上，選用乙醇體積分數（A）、料液比（B）、提取時間（C）和提取次數（D）4個因素，以LSPC提取率（X）、LSOPC提取率（Y）、LSPPC提取率（Z）為指標，采用L9（34）正交試驗設計優化提取工藝。

1.3.5 單因素實驗

原花青素結構中含有多個酚羥基，易溶于水、甲醇、乙醇和稀酸等極性溶劑中[3-4]，因此選擇酒精溶液作為蓮房原花青素的提取劑，采用超聲波輔助進行提取，以LSPC提取率（X）、LSOPC提取率（Y）、LSPPC提取率（Z）為考察指標，分別考察乙醇體積分數（40%、50%、60%、70%和80%）、料液比（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30）、提取時間（10 min、15 min、20 min、25 min和30 min）、提取次數（1次、2次、3次、4次和5次）等因素對蓮房原花青素提取效果的影響。按照1.3.1和1.3.2項制備樣品，然后按照（1）項操作，最后按照1.3.3中（2）分別計算提取率。

1.3.6 正交試驗設計優化提取工藝

在單因素試驗基礎上，確定提取工藝影響因素水平。選用乙醇體積分數（A）、料液比（B）、提取時間（C）和提取次數（D）4個因素，以LSPC提取率%（X）、LSOPC提取率%（Y）、LSPPC提取率%（Z）為指標，采用L9（34）正交試驗設計優化提取工藝。按照多指標權重分析進行綜合總評分，并進行直觀分析與方差分析。

1.4 AHP法確定指標權重

1.4.1 建立優先矩陣

為了優化蓮房原花青素的抗氧化活性部位提取工藝，將LSPC提取率（%）、LSOPC提取率（%）、LSPPC提取率（%）作為權重指標予以量化，即將3個指標分為3個層次，并確定各指標的優先順序為：LSOPC提取率%（Y）＞LSPC提取率%（X）＞LSPPC提取率%（Z），構建成對比較的優先判斷矩陣，同時賦予各指標相對評分，見表1。

表1 指標成對比較的優先判斷矩陣

1.4.2 歸一化權重系數

1.4.3 一致性比率

CR=CI/RI，作為衡量所得權重系數是否合理的指標，經計算一致性比例因子CR=0.008 9，CR＜0.10即指標比較的優先判斷矩陣具有滿意的一致性，所得權重系數有效。

2 結果與分析

2.1 兒茶素標準曲線

采用1.3.1的方法，繪制出兒茶素的標準曲線如圖1所示。

圖1 兒茶素標準曲線

2.2 蓮房原花青素提取工藝優化的單因素試驗結果

2.2.1 不同因素對蓮房原花青素（LSPC）提取的影響

以蓮房原花青素（LSPC）的提取率（%）為評價指標，采用單因素實驗方法考察乙醇體積分數（%）、料液比（g/mL）、提取時間（min）、提取次數（次）4個不同因素對評價指標的影響，得到結果如圖2所示。研究結果顯示，乙醇體積分數在60%，料液比1∶20，提取時間25 min時蓮房原花青素（LSPC）的提取率較高，提取次數（3次和4次）差別不明顯，從實際操作角度考慮，選擇采用提取4次作為單因素試驗優化結果。

圖2 不同因素對LSPC提取率的影響

2.2.2 不同因素對蓮房原花青素（LSOPC）提取的影響

以蓮房原花青素（LSOPC）的提取率（%）為評價指標，采用單因素實驗方法考察乙醇體積分數（%）、料液比（g/mL）、提取時間（min）、提取次數（次）4個不同因素對評價指標的影響，得到結果如圖3所示。研究結果顯示，乙醇體積分數在60%，料液比1∶20，提取時間20 min時蓮房原花青素（LSOPC）的提取率較高，提取次數（3次、4次、5次）差別不明顯，從實際操作角度考慮，選擇采用提取4次作為單因素試驗優化結果。

圖3 不同因素對LSOPC提取率的影響

2.2.3 不同因素對蓮房原花青素（LSPPC）提取的影響

以蓮房原花青素（LSPPC）的提取率（%）為評價指標，采用單因素實驗方法考察乙醇體積分數（%）、料液比（g/mL）、提取時間（min）、提取次數/（次）4個不同因素對評價指標的影響，得到結果如圖4所示。研究結果顯示，乙醇體積分數在60%，料液比1∶15，提取時間20 min，提取3次時蓮房原花青素（LSPPC）的提取率較高。

圖4 不同因素對LSPPC 提取率的影響

2.3 正交優化實驗結果

根據2.2項的單因素試驗結果，最終確定提取工藝影響因素水平，見表2。

表2 L9（34）因素水平表

按照正交試驗L9（34）進行試驗，分別計算實驗結果X、Y和Z值，以1.4.2確認的權重分別計算出9組正交試驗綜合評分（M），總得分（M）=0.539 6Y+0.297 0X+ 0.163 4Z，結果見表3。

以綜合評分為標準，對表3中數據直觀分析表明（表4），優化提取工藝為A1B2C3D2，方差分析結果（表5）顯示因素A、B、C、D對實驗結果均無顯著影響，最終確認生產工藝為A1B2C3D2，即加入50%乙醇，料液比1∶15，超聲提取4次，每次30 min。

表3 正交試驗分析

表4 正交試驗直觀分析

表5 正交試驗結果方差分析

2.4 驗證試驗

取蓮房樣品適量，按照優化提取工藝進行驗證試驗，分別測定LSPC、LSOPC和LSPPC提取率，結果見表6。所得工藝簡便、穩定、可行。

表6 優化工藝驗證試驗

3 結論與討論

超聲的機械作用和空化作用可以破壞細胞壁，加強細胞內有效成分的傳遞作用，且不會改變小分子化學成分的結構與性質，可以加快細胞內代謝產物的溶出速度[5]。因此，較一般常規溶劑加熱提取方式提取時間更短，提取效率更高。

層次分析法（The Analytic Hierarchy Process，簡稱AHP法）是一種解決多目標的復雜問題的定性與定量相結合的決策分析方法，判斷和衡量目標能否實現的標準之間的相對重要程度，并合理地給出每個決策方案的各標準的權數，利用權數求出各方案的優劣次序[6-7]。

本實驗綜合考慮蓮房中總原花青素（LSPC）、低聚蓮房原花青素（LSOPC）、高聚蓮房原花青素（LSPPC）提取率，以乙醇體積分數、料液比、提取時間和提取次數為考察因素，采用層次分析法、多指標加權綜合分析法，利用正交設計優選原花青素的提取效率。優化后的工藝具有良好的重現性、穩定性和可操作性。