多種腫瘤相關自身抗體在非小細胞肺癌中的診斷效果分析

陳美任

嘉應學院醫學院附屬醫院檢驗科，廣東梅州 514000

肺癌是指原發于氣管、 支氣管和肺的惡性腫瘤，該病發病率和死亡率有逐年上升的趨勢，主要包括鱗癌、腺癌、小細胞癌和大細胞癌這幾種主要類型，其中非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）約占80%以上[1]。由于肺癌早期癥狀不明顯，確診時多為中晚期，增加了治療難度和患者死亡率。在腫瘤發病早期，機體免疫系統就可識別腫瘤相關抗原，從而激活機體免疫反應產生抗體，稱為腫瘤相關自身抗體[2]。近年來，多項腫瘤相關抗原自身抗體（tumor associated autoantibodies，TAAB）聯用在肺癌、乳腺癌等腫瘤得到應用。本研究聯用7 項TAAB 包括抑癌基因53（p53 Tumor Suppressor，p53）、神經元胞質蛋白基因產物（protein gene product 9.5，PGP9.5）、性別決定區Y框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2）、G抗原7（G antigen 7，GAGE7）、腫瘤抗原4-5（GBU4-5）、人癌抗原（cancer associated gene，CAGE）和黑色素瘤抗原A1（melanoma antigen 1，MAGE A1）來評估其在NSCLC 臨床診斷中的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年7月于嘉應學院醫學院附屬醫院行肺癌根治術的初治NSCLC 患者57例為研究對象，并設為NSCLC 組。納入標準：①首次確診為非小細胞肺癌，且符合第8 版肺癌TNM 分期標準[3]；②均接受肺癌根治術治療；③配合相關指標檢測及臨床資料完善。排除標準：①復發、轉移癌或合并其它腫瘤病史；②合并自身免疫性疾病者；③診斷為多種腫瘤者；④有化療史及服用過靶向藥物者。NSCLC組中，男31 例，女26 例；年齡58～75 歲，平均（63.54±3.24）歲；腫瘤分類：鱗癌19 例，腺癌25 例，其它13例；臨床分期：Ⅳ期16 例，Ⅲ期9 例，Ⅱ期4 例，Ⅰ期28例；腫瘤直徑：＞3 cm 24 例，≤3 cm 18 例，無法評估15例。排除。選擇同期入院的52 例肺部良性疾病者作為良性組，選擇同期入院的58 名健康人群設置為健康組。良性組中，男28 例，女24 例；年齡55～75 歲，平均（63.43±3.45）歲；肺部疾病包括肺炎41 例，肺氣腫5 例，支氣管炎6 例。健康組中，男31 例，女27 例，年齡54～73歲，平均（63.33±3.49）歲。三組的性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會審批通過。

1.2 方法

①采集所有NSCLC 患者肺部根治術前清晨空腹靜脈血4 ml，良性組患者于入院檢查時采集，健康組患者于體檢時采集。室溫靜置30 min 后取血清，于4℃、1000 r/min 離心10 min 中離心處理，離心半徑13.5 cm，分裝置于-80℃待檢測使用。②使用ELISA檢測7 項腫瘤相關自身抗體，分別為p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1。將血清樣本及試劑置于室溫，選用7 種自身抗體譜檢測試劑盒進行ELISA 檢測，按照試劑盒說明書進行相關操作，使用美國伯樂iMark 酶標儀在450 nm 處讀取吸光度值。做受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curves，ROC） 分析7 種腫瘤相關自身抗體診斷肺癌的價值，根據最大約登指數確定各自診斷臨界值，如果血清腫瘤相關自身抗體的檢測濃度低于診斷臨界值即為陰性，否則為陽性。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較進行LSD-t 檢驗； 采用ROC 曲線分析多種腫瘤相關自身抗體在非小細胞肺癌中的聯合診斷效果，曲線下面積越大，表示其診斷價值越高，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組患者腫瘤相關自身抗體水平比較

NSCLC 組的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 水平均高于良性組和健康組，差異有統計學意義（P＜0.05）。良性組和健康組的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE、MAGE A1 水平比較，差異無統計學意義（P＞0.05）（表1）。

表1 三組患者腫瘤相關自身抗體水平比較（U/ml，±s）

表1 三組患者腫瘤相關自身抗體水平比較（U/ml，±s）

與良性組比較，aP＜0.05；與健康組比較，bP＜0.05

組別 例數 p53 PGP9.5 SOX2 GAGE7 GBU4-5 GAGE MAGE A1 NSCLC 組良性組健康組F 值P 值57 52 58 2.26±0.53ab 1.23±0.33 1.18±0.24 178.909＜0.001 13.51±4.26ab 9.64±2.54 9.33±2.01 27.373＜0.001 13.51±4.26ab 9.64±2.54 9.33±2.01 27.373＜0.001 15.31±5.19ab 13.16±4.31 12.82±4.06 4.996 0.008 8.03±2.84ab 6.27±2.34 6.02±1.87 11.996＜0.001 10.36±3.63ab 8.14±2.65 6.89±2.66 19.363＜0.001 7.64±2.14ab 6.58±2.61 6.31±2.31 5.082 0.007

2.2 多種腫瘤相關自身抗體單獨診斷NSCLC 的ROC 曲線結果

p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 單獨診斷NSCLC 的曲線下面積均＞0.6（P＜0.05），均有一定診斷價值，根據最大約登指數確定診斷臨界值分別為1.57 U/ml、12.92 U/ml、12.67 U/ml、14.64 U/ml、8.45 U/ml、8.23 U/ml、7.68 U/ml，單獨診斷p53 敏感度最高達91.20%，其次為GAGE 達68.40%，GP 9.5 和GAGE7 均為59.60%（表2、圖1，封3）。

表2 多種腫瘤相關自身抗體單獨診斷NSCLC 的ROC 曲線結果

圖1 多種腫瘤相關自身抗體單獨診斷NSCLC 的ROC 曲線圖

3 討論

由于肺癌早期癥狀不明顯，不易被發現，約80%患者確診時已到肺癌中、晚期，不僅治療難度大，而且預后不良，極易出現復發及癌細胞轉移，因而中晚期肺癌患者死亡率極高。早發現、早確診、早治療是控制肺癌的有效手段[4-5]。目前，肺癌的早期篩查手段有限，主要依靠低劑量計算機斷層掃描（low-dose computed tomography，LDCT） 和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、神經元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）、細胞角蛋白19 抗原片段（cytokeratin 19 fragment 21-1，CYFRA21-1）和鱗狀上皮細胞癌抗原等腫瘤標志物抗原聯合診斷進行篩查，雖然LDCT 敏感度高，但假陽性率也相對較高，對篩查良性和惡性肺部腫瘤具有一定局限性，因而臨床應用也受到了一定限制。腫瘤標志物抗原聯合診斷易受非病理因素，敏感度和特異度均無法滿足臨床診斷的需求[6-7]。

相關研究[8]顯示，癌癥發病早期，機體內腫瘤相關抗原發生表達、突變等一系列改變，從而引起機體自身反應性免疫應答，刺激B 細胞產生腫瘤相關自身抗體，少量機體內腫瘤相關抗原即可促使機體產生大量腫瘤相關自身抗體。相比于抗原，抗體具有半衰期長、含量高且穩定等優越性，因而在臨床診斷應用價值更高。有研究[9]表明，腫瘤自身相關抗體可早在癥狀出現數年前于患者血清中檢測出來，這大大提高了肺癌早期診斷的可能。目前，還未發現有單一腫瘤自身相關抗體可滿足肺癌診斷的敏感度和特異度，本研究結果顯示，NSCLC 組的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 水平均高于良性組和健康組，差異有統計學意義（P＜0.05），因而本研究選取7 種與腫瘤相關的自身抗體檢測以提高肺癌診斷的準確性。國外有相關研究[10]表明，聯用p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 這7 項自身抗體在肺癌的診斷中敏感度和特異度可以達到76%和92%，敏感度和特異度均相對較高。研究[11]發現，p53是迄今為止與人類腫瘤相關性最高的基因，可劃分為野生型和突變型，突變型p53 對癌癥的發生和發展有促進作用。在肺癌中，p53 是發生率最高的DNA 序列改變，p53 通過基因突變，半衰期從20 min 延長至幾小時，并造成細胞內蛋白產物堆積，促使機體產生免疫應答[12]；PGP9.5 是一類蛋白水解酶，在癌癥的發生過程中，PGP9.5 誘導細胞周期蛋白泛素化上調，致使細胞生長失控，有研究者通過基因表達系列分析法發現PGP9.5 在肺癌早期高表達，且與肺癌進展關系特殊，因而可作為肺癌早期診斷的標志[13]；SOX2 的主要作用包括參與胚胎早期發育、 維持干細胞全能性、參與神經發育等，近年來，SOX2 被發現在多種腫瘤中高表達，因而SOX2 相關抗體可作為肺癌鑒別診斷中的一項指標[14]；GAGE7 和GBU4-5 在肺癌組織中的作用較為局限，但各種試驗可檢測出其在早期肺癌中的高表達，因而可作為聯合診斷的一項指標；隨著腫瘤免疫治療在腫瘤治療中應用越來越廣泛，GAGE 作為最具免疫原性的腫瘤抗原也受到了極大的關注；MAGE A1 是目前應用前景較好的腫瘤標志物，尤其在鑒別良惡性肺結節方面[15-18]。由于本研究樣本量有限，未對診斷效能尚可的相關聯合診斷效能進行深入分析，相關結論及相關抗體聯合診斷效能有待進一步研究和證實。

綜上所述，7 項腫瘤相關自身抗體對NSCLC 的診斷具有重要的臨床意義和應用價值。