新型冠狀病毒核酸混合樣本檢測的研究進展

梁愛珍

（防城港市第一人民醫院，廣西 防城港，538000）

2019年12月發生發熱、肺部感染和咳嗽為主要癥狀的急性呼吸道傳染病，經證實是由COVID-19所引起。WHO于2020年2月1日將其定為2019年冠狀病毒病，且宣布是突發的公共衛生事件，為應對COVID-19的流行，快速、準確適宜的檢測技術對疾病診斷具有重要意義[1]。針對COVID-19診斷方式有病毒基因組測序、核酸檢測與特異性抗體檢驗，核酸檢測是目前首選的檢測方式，其具有窗口期短，檢測靈敏度高等特點，最為廣泛的是熒光反轉錄聚合酶鏈式反應（rRT-PCR）技術，擴增位點針對病毒基因組中3段保守序列，即、核殼蛋白（N）、即開放讀碼框lab（ORF lab）、包膜蛋白基因（E）[2-3]。在能夠保證樣本治療與檢驗質量的前提下，核酸檢測存在特異性強、敏感度高的特點，常用樣本有、肺泡灌洗液、痰液、咽拭子、鼻拭子[4]。目前，COVID-19核酸檢測需求量大，需要提升其效率，擴大檢測范圍，故推薦混采檢測和稀釋混合檢測，其中，混合檢測相對較優，不但大大提高了檢測效率，還降低了檢測成本。本文現對混合檢測進行綜述。

1 混合樣本的檢測背景

混合樣本主要指將多個不同人的樣本混合采集之后，若結果呈陰性，表示每個人的樣本均是陰性，若為陽性則說明其中有人血樣為陽性，之后分別對該人群樣本進行逐個檢測?；旌蠘颖緯r建立在比較成熟的檢驗方式上，即采集、保存、混合檢測，最大程度避免了非實驗因素變化所帶來的影響[5]。在進行該項操作時要考慮幾個因素，樣品混合后不可相互干擾，以免產生假陽性或是假陰性。比如，不同血型血液混合后出現凝集反應，導致標本性質的改變，再對血細胞檢測，故所得結果將不準確；稀釋混樣后，可使待測物濃度低，導致假陰性結果，其次是需要有足夠靈敏的技術支持[6]。相關研究表示[7]，混合檢測有效提高檢測效率，節省了醫療資源。一項國外研究[8]中證實了該檢測方式，通過對糞便蠕蟲進行檢測，以獨立檢測和混合檢測對比，后者敏感性特異性較高，同時減少耗材。

2 COVID-19核酸的混合樣本檢測

在早期的核酸檢測中，均以單檢方式，該方式比較穩定、可靠、不易出現漏檢等優勢。但缺點也較為明顯，其效率較低，在檢測任務重的情況之下，不能有效滿足大范圍群體快速篩查。為鞏固疫情防控成果，維護群眾的健康混合樣本的實施在其中起到重要作用[9]。一項北京市疾病預控混合檢測中[10]，對北京市民多以這種1:5混合檢測模式。另一項實驗室中取不同樣本混合提取核酸，從而5份樣本中取40ul組成200ul混合提取核酸，但因有一定的稀釋效果，故對地病毒載量樣本具有假陰性的可能。同時考慮到混合檢測是針對地位人群的篩查，因此，對節約資源與加大人群篩查具有顯著優勢。所以，國家衛生健康委員會發布《關于印發新冠病毒核酸 篩查稀釋混樣檢測技術指引的通知》和《關于印發新冠病毒核酸10合1混采檢測技術規范的通知》，由此加快篩查診斷速度，減少傳播與節約社會成本[11]。在我國疫情中后期防控工作中，各地區疫情再次來臨之時，多地使用該項檢測用于全人群進行大范圍的核酸檢測工作。

3 混合檢測質量和應用思考

混合樣本檢測依據混合時機分采樣混合和實驗室內混樣檢測，采樣混合在核酸檢測中已明確使用。國內已有研究或是指南證實使用1:5、1:10、1:48的混合比均可顯示理想的敏感性[12]。但在實際應用中還要考慮到試劑敏感性問題，混合池內樣本量越大，對試劑敏感性要求也較為嚴格，目前我國核酸檢測試劑盒靈敏度能夠達到500～600copy/ml，急性期陽性樣本中病毒拷貝數在104～164copy/ml，能夠滿足稀釋后樣本檢出的要求。另外，從技術層進行分析，感染的初期利用咽拭子樣本行獨立核酸檢測，rRT-PCR閾值為18～22，我國常用的為40循環，若是依據樣本每稀釋2倍Ct值升高1估算，Ct在30左右樣本即使使用1:256混合比依然可保證其敏感性。而最終決定混合樣本量是臨床操作，即，采樣方便、安全和操作等。樣本的質量直接關系到混檢結果，所以要對采集樣本人員標準化培訓，同時，采集樣本前要充分的震蕩樣本管，實驗室檢行混樣檢測的步驟較多，故注意滅活，以免產生院內感染[13]。此外，不可一步法提取，推薦以磁珠法、柱提法，從而獲取較高濃度的核酸，減少對擴增體系的干擾。

4 小結

總而言之，混合檢測與獨立檢測的敏感性方面相當，特異性未受到影響，特別適于群體檢測，對此，該項檢測為新型冠狀病毒核酸篩查提供了快捷有效的方案。