中藥單體及復(fù)方調(diào)控淋巴瘤相關(guān)信號通路分子的研究進展

馮曉衛(wèi) 胡 琦

淋巴瘤是原發(fā)于淋巴結(jié)、結(jié)外淋巴組織或器官的免疫系統(tǒng)惡性腫瘤，在我國惡性腫瘤病死率中排名第10位[1]。分為霍奇金病(Hodgkin′s disease，HD)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma，NHL)兩類，NHL約占90%，臨床以淋巴結(jié)腫大、淋巴結(jié)外器官受累，或伴發(fā)熱、盜汗、瘙癢、消瘦等全身癥狀為主要表現(xiàn)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要采用化療、放療、手術(shù)、移植、生物免疫和靶向治療等為主的綜合治療方案。約10%～60%患者一線化療無效或治療緩解后復(fù)發(fā)，還有部分患者因高齡或全身合并癥而不適合、不耐受此類治療。中藥復(fù)方辨治淋巴瘤，具有能延長生存時間、提高生存質(zhì)量、不良反應(yīng)少等優(yōu)勢，挖掘中藥復(fù)方治療淋巴瘤的臨床價值意義重大。

淋巴瘤在中醫(yī)對應(yīng)病名有“惡核”、“石疽”等，最主要的病理因素為痰、毒、瘀、虛，主要證型有痰熱蘊結(jié)、氣血兩虛、肝腎陰虛、氣郁痰結(jié)、脾虛痰濕等，治以清熱解毒、化痰散結(jié)、滋補肝腎、健脾益氣，軟堅散結(jié)等法。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，中藥存在多成分多靶點的特性，可能通過多條信號通路達到較好的治療效果，改善預(yù)后情況。本文擬通過整理近十年中藥在調(diào)控淋巴瘤相關(guān)信號通路分子的研究展開綜述，對淋巴瘤細胞增殖、分化、凋亡等相關(guān)的通路及關(guān)鍵分子，如PD-1/PD-L1信號通路、PI3K-Akt-mTOR信號通路、p38-MAPK信號通路、JAK-STAT信號通路、經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路、NF-κB信號通路等6條信號通路，以期為闡明中醫(yī)藥治療淋巴瘤的作用靶點，探索中西藥物協(xié)同機制，提高淋巴瘤的療效提供幫助。

一、PD-1與 PD-L1通路

程序性死亡受體-1(programmed cell death-1，PD-1)為Ⅰ型跨膜糖蛋白，是重要的免疫共抑制受體，PD-L1(programmed cell death ligand 1)是PD-1的配體之一，當PD-1與PD-L1通路激活時，通過PD-L1介導(dǎo)的抗凋亡信號促進腫瘤細胞存活，抑制識別腫瘤抗原的T細胞活化和增殖，最終導(dǎo)致效應(yīng)T細胞和記憶細胞生成減少，進而誘導(dǎo)T細胞耗竭，從而實現(xiàn)腫瘤的免疫耐受[2]。PD-L1在血液系統(tǒng)惡性腫瘤及各種實體瘤中上調(diào)并表達，使用免疫組織化學(xué)(IHC)可以檢測細胞表面上的PD-1和PD-L1表達[3]。PD-1及PD-L1的單克隆抗體可阻斷PD-1及PD-L1在淋巴瘤中的高表達情況，具有抑制腫瘤細胞惡性增殖，改善T淋巴細胞功能等作用，在經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin lymphoma,CHL)、彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)和濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)中表現(xiàn)出較好的療效[4]。

消瘰丸出自《醫(yī)學(xué)心悟》，由玄參、牡蠣、貝母組成，具有軟堅散結(jié)、清潤化痰的功效，其散結(jié)之力較強，在現(xiàn)代藥理學(xué)上對于治療體表腫塊、腫瘤、瘰疬、淋巴結(jié)腫大等病運用較多。劉群英等[5]用消瘰丸與PD-L1阻斷劑對淋巴瘤患者T細胞進行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)消瘰丸聯(lián)合PD-L1阻斷劑組對T細胞的抑制作用高于PD-L1阻斷劑組，表明消瘰丸可以增強CD8+T細胞的活性，促進PD-1陽性表達。

人參皂苷Rg3是人參皂苷中的一種，屬于人參中的活性成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)它可以提高機體免疫力，還具有一定的抗腫瘤作用。郭奕維等[6]用人參皂苷Rg3與PD-1抑制劑合用，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3可促進PD-1抑制劑恢復(fù)T細胞的增殖作用，減少T細胞凋亡，增加細胞因子IL-2和IFN-γ的分泌，增強PD-1抑制劑對彌漫大B細胞淋巴瘤的抗腫瘤作用。

二、PI3K-AKT-mTOR信號通路

磷脂酰肌醇3-激酶 (phosphatidylin-ositol-3-kinase，PI3K)-蛋白激酶 B(protein kinase B，PKB，又稱 AKT)-雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin ，mTOR)，此信號通路通過Ser/Thr蛋白激酶轉(zhuǎn)導(dǎo)，與細胞的增殖、凋亡等過程關(guān)系密切，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色，廣泛存在于淋巴瘤、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤中[7～9]。馬濤等[10]研究發(fā)現(xiàn)，此信號通路與細胞生長、蛋白質(zhì)翻譯、細胞周期及血管生成等密切相關(guān)，與DLBCL、套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的發(fā)病密切相關(guān)。

益氣除痰方以黨參、白術(shù)、云苓補氣健脾，半夏、枳實、瓜蔞皮化痰消積，魚腥草、露蜂房解毒散結(jié)，張江召等[11]用益氣除痰方干預(yù)小鼠，制備含藥血清，用不同分數(shù)的含藥血清處理NK-T淋巴瘤細胞SNK-6后，下調(diào)了p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白的表達，表明益氣除痰方對NK-T細胞淋巴瘤具有抑制生長的機制與PI3K-AKT-mTOR信號通路有關(guān)。

夏枯草有散結(jié)消腫、清熱瀉火、明目之功效，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，其散結(jié)消腫之功在治療淋巴結(jié)腫大、乳腺增生、甲狀腺腫大等時效果較好。劉新奎等[12]研究發(fā)現(xiàn)，夏枯草具有較好的體外抗淋巴瘤增殖和誘導(dǎo)淋巴瘤細胞凋亡的作用，這種抑制作用可能是通過激活JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，抑制AKT通路激活實現(xiàn)的。

白花蛇舌草具有清熱解毒、清利濕熱、消癰等功效，現(xiàn)代在消炎、提高免疫力、抗腫瘤等方面具有良好特性。李華等[13]研究發(fā)現(xiàn)，白花蛇舌草與PI3K通路抑制劑LY294002對人淋巴瘤Raji細胞增殖的抑制效果相似，而聯(lián)合LY294002對人淋巴瘤Raji細胞處理時，比單用LY294002對Raji細胞的增殖抑制效果更顯著，PI3K-AKT信號通路中p-PI3K、p-AKT蛋白含量降低更明顯，提示其作用機制可能與抑制此信號通路活化相關(guān)。

三、p38-MAPK信號通路

絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)是細胞內(nèi)的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與細胞增殖、凋亡及基因表達調(diào)控，在多種受體信號傳遞途徑中起著關(guān)鍵作用。p38-MAPK信號通路為MAPK家族的重要成員, 最早因與氧化應(yīng)激相關(guān)而被關(guān)注，不僅在炎癥、應(yīng)激反應(yīng)中具有重要作用，近年研究發(fā)現(xiàn)它在淋巴瘤、胃癌、白血病等多種腫瘤細胞中，與凋亡的啟動、細胞周期等密切相關(guān)[14～16]。

謝會霞等[17]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤內(nèi)酯醇可以誘導(dǎo)皮膚T細胞淋巴瘤Hut102細胞凋亡，在加入p38MAPK特異性抑制劑SB203580后淋巴瘤細胞的凋亡作用顯著減弱，提示雷公藤內(nèi)酯醇誘導(dǎo)淋巴瘤Hut102細胞凋亡可能與激活p38MAPK信號通路有關(guān)。

傅士龍[18]研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶苷B通過誘導(dǎo)MKK3表達升高來激活p38-MAPK 這條信號通路，進而激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的重要抑瘤基因DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子DDIT3，從而導(dǎo)致淋巴瘤細胞脹亡和凋亡。并且在小鼠體內(nèi)實驗結(jié)果顯示木蝴蝶苷B能有效地抑制淋巴瘤生長，并且其毒性和不良反應(yīng)都相對較小。

四、JAK-STAT信號通路

Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(the janus kinase/signal transducer and activator of transcriptions，JAK/STAT)信號通路是眾多細胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的共同途徑，參與細胞增殖、分化、凋亡以及炎癥等過程，酪氨酸激酶相關(guān)受體、酪氨酸激酶JAK和轉(zhuǎn)錄因子STAT是其通路的主要3個成分，此信號通常產(chǎn)生于細胞膜表面的受體，然后傳輸至細胞核內(nèi)，STAT在細胞核內(nèi)與特異性的DNA啟動子結(jié)合，在多種腫瘤細胞和組織中都有激活，如NHL、乳腺癌和白血病等各種腫瘤中[19～21]。

芪貞歸脾湯為歸脾湯的加減方，張影等[22]通過高通量組學(xué)基因芯片技術(shù)探究芪貞歸脾湯對淋巴瘤細胞的可能作用靶點，研究發(fā)現(xiàn)，芪貞歸脾湯在基因水平上顯著抑制JAK-STAT、PI3K-AKT這兩條信號通路，且實時熒光定量PCR驗證與基因芯片結(jié)果一致，通過這兩條信號通路抑制淋巴瘤細胞的增殖，促進其凋亡，并抑制遷移和侵襲。

夏枯草提取物可以抑制漸變性淋巴瘤Karpas299細胞增殖，并誘導(dǎo)淋巴瘤Karpas299細胞發(fā)生早期凋亡，李偉明[23]采用TMT定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探索夏枯草提取物對淋巴瘤細胞蛋白表達變化，經(jīng)質(zhì)譜鑒定上調(diào)164個蛋白和下調(diào)244個蛋白的表達,并用免疫組化和Western blot法驗證，結(jié)果顯示其作用機制主要是下調(diào)p-JAK3、p-STAT3、p-JAK3、p-AKT、Bcl-2、cyclinD3、mTOR蛋白的表達，上調(diào)TNF-α、Bax、caspase-3蛋白的表達，通過JAK-STAT、PI3K-AKT、JNK-cJun這3條信號通路發(fā)揮抗腫瘤效果。

白藜蘆醇是一種非黃酮類多酚有機化合物，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎等作用。姬穎華等[24]研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇(resveratrol, RES)在伯基特淋巴瘤細胞株中,對IL-6/JAK2/STAT3信號通路的抑制作用可能通過下調(diào)由IL-6引起的p-JAK2、p-STAT3的表達，提高促凋亡因子的表達，降低抗凋亡因子的表達，促進腫瘤細胞的凋亡，發(fā)揮抗腫瘤的作用。

五、經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路

經(jīng)典Wnt (canonical Wnt/β-catenin pathway, Wnt/β-catenin)信號通路在正常成熟細胞中呈關(guān)閉狀態(tài)，其異常持續(xù)性激活與很多腫瘤的發(fā)病有關(guān)。Wnt蛋白與細胞表面受體復(fù)合物跨膜蛋白結(jié)合后，破壞蛋白酶體復(fù)合物形成，使胞質(zhì)中β-catenin逃脫降解，并轉(zhuǎn)位細胞核與T細胞因子(TCF)結(jié)合形成復(fù)合物，再和其他轉(zhuǎn)錄輔助因子如CREB結(jié)合蛋白(CBP)共同啟動下游靶基因的活化包括c-myc、cyclinD1、PPAR、COX2、CD44和MMP7等。張文迪等[25]研究發(fā)現(xiàn)，Wnt/β-catenin信號通路的激活能夠促進MCL細胞的增殖及侵襲性生長。在淋巴瘤的形成和耐藥上，Wnt/β-catenin信號通路在T細胞、B 細胞淋巴瘤上都具有調(diào)節(jié)作用[26]。

Kawahara等[27]研究發(fā)現(xiàn)，含黃酮類中藥化合物具有抑制淋巴瘤細胞增殖、調(diào)控細胞周期，并有效阻斷經(jīng)典Wnt信號通路的作用，經(jīng)典Wnt信號通路可能是導(dǎo)致NHL的分子作用機制之一。

六、NF-κB信號通路

核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)信號通路是一種廣泛存在于真核細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，它參與機體的炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答、腫瘤的發(fā)生及發(fā)展、調(diào)節(jié)細胞凋亡、氧化應(yīng)激反應(yīng)等。NF-κB首先在B淋巴細胞中發(fā)現(xiàn)，是一種能與B淋巴細胞免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強子κB序列特異性相結(jié)合的蛋白，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用。

胡施煒等[28]研究發(fā)現(xiàn)，大黃酸可以抑制彌漫大B細胞OCI-LY8 細胞增殖和誘導(dǎo)其凋亡，其作用機制主要下調(diào)Rip2表達后，減弱IκBα磷酸化和IKK復(fù)合體的形成，使IκBα降解量減少，最終也相應(yīng)的減少了游離入核的p65/p52二聚體數(shù)量，抑制了NF-κB信號通路的持續(xù)性活化。

毛萼乙素能顯著抑制淋巴瘤細胞的增殖，降低增殖蛋白的表達，上調(diào)凋亡蛋白的表達。使磷酸化NF-κB和激活因子IκB激酶表達減少，抑制NF-κB信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)[29]。漢黃芩素是唇形科植物黃芩的主要活性成分之一，在多種疾病和實體瘤中表現(xiàn)出高效低毒的抗腫瘤效果。研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩可以通過下調(diào)NF-κB的表達來抑制淋巴瘤Raji細胞的生長，通過LMP1/NF-κB/miR-155/PU.1途徑誘導(dǎo)淋巴瘤細胞Raji細胞的凋亡[30]。

七、展 望

本文闡述了近年來包括PD-1/PD-L1信號通路、PI3K-AKT-mTOR信號通路、p38-MAPK信號通路、JAK-STAT信號通路、經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路、NF-κB信號通路等6條淋巴瘤信號通路及中藥干預(yù)的相關(guān)研究進展，中藥單體及復(fù)方制劑對于淋巴瘤的作用機制及實驗研究取得了很大的進展。但是，中藥復(fù)方目前還缺乏可靠的RCT支撐，如果能利用網(wǎng)絡(luò)大數(shù)據(jù)(網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué))、系統(tǒng)生物學(xué)基因測序、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)等研究方法對淋巴瘤多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)體系的上下游調(diào)控基因以及靶點蛋白進行更系統(tǒng)深入的研究，探索與開發(fā)針對不同信號通路的有效藥物，更全面揭示中醫(yī)藥治療淋巴瘤的作用機制并優(yōu)化組方、提高臨床療效。與此同時，將中藥復(fù)方的實驗研究與臨床實踐中相融合，可以充分展現(xiàn)中醫(yī)藥的可靠性和科學(xué)性，對推動中醫(yī)藥走向世界具有積極意義，對淋巴瘤的發(fā)病機制有更多的發(fā)現(xiàn)，引導(dǎo)探索與開發(fā)針對不同信號通路淋巴瘤治療的有效藥物。