活動性巨細胞病毒感染DNA載量與2型糖尿病患者T淋巴細胞亞群的關系

蔡麗娟 任 妹 劉劍榮 潘 幸

江西省萍鄉市人民醫院檢驗科，江西萍鄉 337000

巨細胞病毒屬于皰疹病毒亞科，是引發人類疾病的常見病原體，可通過密切接觸、輸血、性行為、器官移植及母嬰途徑等方式傳播。而2 型糖尿病（type 2 di abetes mellitus，T2DM）作為一種常見的慢性疾病，多發病于35～40 歲之后，其患者數量占糖尿病患者90%以上[1]。有研究指出，T2DM 患者體內產生胰島素的能力并未完全喪失，部分患者體內胰島素水平過高[2]，但其胰島素作用效果較差，患者表現為胰島素抵抗或胰島素分泌相對不足等情況[3]。目前已有研究指出，巨細胞病毒感染與1 型糖尿病存在一定相關性[4]，但巨細胞病毒感染與T2DM 的相關性還未得到證實。基于此，本研究探究活動性巨細胞病毒感染DNA 載量與T2DM 患者T 淋巴細胞亞群的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年10月至2020年5月萍鄉市人民醫院收治的80 例T2DM 患者的臨床資料，按照活動性巨細胞病毒感染情況將其分為觀察組（巨細胞病毒感染陽性，n=18）和對照組（巨細胞病毒感染陰性，n=62）。觀察組中，男10 例，女8 例；年齡25～83 歲，平均（53.72±18.54）歲；病程7～24 個月，平均（15.63±6.24）個月。對照組中，男35 例，女27 例；年齡26～80歲，平均（45.69±16.33）歲；病程9～24 個月，平均（14.18±6.77）個月。兩組的一般資料比較，差異有統計學意義（P＜0.05），具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：①符合T2DM 診斷標準[5]；②臨床資料完整；③均進行巨細胞病毒DNA、T 淋巴細胞亞群、胰島功能相關檢查。排除標準：①嚴重器質性病變者；②長期服用免疫抑制劑者；③惡性腫瘤者；④免疫功能缺陷者。

1.2 方法

巨細胞病毒DNA 載量檢測[6]：應用熒光定量PCR方法檢測尿HCMV DNA，嚴格按試劑盒說明書操作，PCR 試劑盒為中山大學達安基因股份有限公司產品，PCR 擴增反應在ABI VIIA7 PCR 儀上進行，當其樣本濃度≤500 拷貝數/ml 時判定為巨細胞病毒感染陰性，＞500 拷貝數/ml 時判定為巨細胞病毒感染陽性。

T 淋巴細胞亞群檢測：抽取患者空腹靜脈血5 ml，使用以1500 r/min，離心半徑15 cm，離心10 min，去除上層清液，采用梯度離心法分離淋巴細胞，并制成懸液，使用貝克曼庫爾特商貿有限公司生產的Gallios流式細胞儀檢測CD4+T 淋巴細胞、CD8+T 淋巴細胞含量，并計算CD4+/CD8+比值。

胰島功能檢測：抽取患者空腹靜脈血5 ml，使用以1500 r/min 離心10 min，收集血清，離心半徑15 cm，使用默沙克生物酶聯免疫試劑盒測量空腹C 肽（fasting C-peptide，FCP）、餐后2 小時C 肽（fasting 2 h Cpeptide，F2CP）水平。

1.3 觀察指標

比較兩組T淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、胰島功能（FCP、F2CP）水平，分析活動性巨細胞病毒感染DNA 載量與T 淋巴細胞亞群水平和胰島功能的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（±s）表示，組間比較用t 檢驗；計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Pearson 相關分析模型分析相關性，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組T 淋巴細胞亞群的比較

觀察組的CD4+、CD4+/CD8+低于對照組（P＜0.05），CD8+高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組T 淋巴細胞亞群的比較（±s）

表1 兩組T 淋巴細胞亞群的比較（±s）

觀察組對照組t 值P 值18 62 35.31±2.63 37.26±3.17 2.379 0.019 29.81±5.42 27.14±3.99 2.296 0.024 1.18±0.32 1.37±0.31 2.273 0.025組別 例數 CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+

2.2 兩組胰島功能的比較

觀察組的FCP、F2CP 水平低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）（表2）。

表2 兩組胰島功能的比較（ng/ml，±s）

表2 兩組胰島功能的比較（ng/ml，±s）

觀察組對照組t 值P 值18 62 1.21±1.36 2.05±1.76 5.234＜0.001 2.18±1.47 2.76±2.53 2.336 0.022組別 例數 FCP F2CP

2.3 巨細胞病毒感染DNA 載量與T 淋巴細胞亞群水平和胰島功能的相關性分析

巨細胞病毒感染DNA 載量與CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈負相關，與CD8+水平呈正相關（P＜0.05）（表3）。

表3 巨細胞病毒感染DNA 載量與T 淋巴細胞亞群水平和胰島功能的相關性分析

3 討論

大量研究表明，1 型糖尿病的發生發展與巨細胞病毒感染有極為密切的聯系，病毒感染可直接或間接攻擊胰島細胞，導致胰島細胞分泌胰島素功能下降[7]。但與1 型糖尿病胰島β 細胞嚴重受損不同，T2DM 胰島細胞功能尚存，二者發病機制存在一定差異，病毒感染對T2DM 的作用有待考證。

巨細胞病毒為線性雙鏈DNA 病毒，在人類中普遍易感，能對新生兒及免疫機能低下個體造成較為嚴重的并發癥，且經原發感染后，病毒會長期潛伏于體內[8]。T 淋巴細胞亞群主要為CD4+和CD8+細胞，當病毒侵犯機體時，CD4+、CD8+細胞相互作用，發揮特異性免疫，抵抗病毒感染[9]。本次研究中，巨細胞病毒感染陽性患者CD4+細胞水平、CD4+/CD8+低于陰性患者，CD8+細胞水平高于陰性患者，差異有統計學意義（P＜0.05），提示巨細胞病毒激活狀態會加重T2DM 患者機體免疫功能失衡，這與曹潔等[10]所研究結論相類似，其原因可能是巨細胞病毒基因復制活躍，患者體內發生免疫應答反應，在病毒抗原識別過程中，CD8+細胞大量復制，CD4+細胞大量消耗，從而引起T 淋巴細胞亞群數量發生變化。

巨細胞病毒感染會導致機體免疫失衡，免疫細胞分泌白介素-6、腫瘤壞死因子等因子，誘導機體發生胰島素抵抗作用，降低胰島素敏感性[11]。本研究結果顯示巨細胞病毒感染陽性患者FCP、F2CP 水平低于陰性患者，差異有統計學意義（P＜0.05），提示巨細胞病毒會影響FCP、F2CP 水平，這與王柳明等[12]所研究結論相類似，其原因可能是巨細胞病毒感染胰島β 細胞，并在胰島β 細胞中潛伏、復制和增殖，其合成的蛋白質會引起胰島β 細胞凋亡，同時巨細胞病毒感染胰島β 細胞后通過交叉免疫作用引起特異性T 細胞產生抗體，這種抗體能夠攻擊胰島β 細胞，造成胰島β細胞損傷，并且在巨細胞病毒感染胰島β 細胞后，會引起淋巴B 細胞、粒細胞、單核細胞富集，形成炎癥微環境，釋放出的細胞因子，會引起胰島β 細胞功能失調，從而影響患者胰島功能[13]。

本研究結果顯示，巨細胞病毒感染DNA 載量與CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈負相關，與CD8+水平呈正相關（P＜0.05），提示T2DM 患者巨細胞病毒越活躍，患者免疫功能和胰島功能越受影響，與劉春梅等[14]所研究結論相類似，這說明當T2DM 患者感染巨細胞病毒后，巨細胞病毒能通過直接損傷胰島β 細胞和長期病毒感染導致患者自身免疫失衡，并影響其胰島β 細胞正常功能，造成患者體內胰島素分泌含量減少，加重T2DM 患者病情[15-16]。

綜上所述，活動性巨細胞病毒感染DNA 載量與T2DM 患者CD4+、CD4+/CD8+、FCP、F2CP 呈負相關，與CD8+水平呈正相關，故采取有效措施抑制患者免疫失衡狀態，對治療巨細胞病毒感染有利。