甲鈷胺膠囊評價性抽驗的含量分析與比較研究

劉飛，孫強，巴然然，孫濤

(1.山東省食品藥品審評認證中心，山東 濟南 250014；2.泰安市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 泰安 271000)

甲鈷胺為周圍神經(jīng)病變的治療藥物，屬于維生素B12類，它通過促進神經(jīng)細胞內(nèi)核酸和蛋白質(zhì)以及神經(jīng)髓鞘的合成，從而修復受損傷的周圍神經(jīng)，目前已廣泛應用于臨床。從1948年Spies等人把維生素B12作為藥物研究以來，維生素B12的研究取得飛速的發(fā)展，到目前為止，作為藥物的維生素B12主要有：氰鈷胺、羥鈷胺、腺苷鈷胺和甲鈷胺。前兩種維生素B12在人體內(nèi)沒有生物活性；后兩種輔酶型維生素B12已經(jīng)實現(xiàn)人工合成，這為周圍神經(jīng)病變患者的治療提供了有力武器。在修復受損的神經(jīng)組織方面，腺苷鈷胺必須先轉(zhuǎn)化為甲鈷胺才能作為輔酶參與一碳單位循環(huán)，從而促進核酸、蛋白質(zhì)和卵磷脂的合成[1-2]。

甲鈷胺見光容易分解，性質(zhì)不穩(wěn)定，近幾年，省外抽檢的甲鈷胺膠囊出現(xiàn)多次質(zhì)量不合格，不符合規(guī)定項多為有關物質(zhì)，而對甲鈷胺相關研究較少[3-8]，為了進一步探索各個企業(yè)之間、同企業(yè)不同批次間、同批次間的質(zhì)量差異以及受儲存環(huán)境的影響，本文將甲鈷胺膠囊列為本次試驗的研究對象。試驗按照現(xiàn)行標準開展檢驗，對試驗數(shù)據(jù)進行總結(jié)，并進行了探索性研究，以期進一步防范風險、完善其生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標準提供參考。

1 試驗材料

1.1 檢品情況 現(xiàn)在全國共有12家藥企生產(chǎn)甲鈷胺膠囊，涉及12個批準文號，本次試驗在全省范圍內(nèi)進行甲鈷胺膠囊的評價性抽樣，共抽取了全省藥品流通和生產(chǎn)環(huán)節(jié)的檢品47批，涉及批準文號7個，占總批準文號數(shù)的58.3%，涉及生產(chǎn)企業(yè)7家，占全部生產(chǎn)企業(yè)數(shù)的58.3%。企業(yè)A共18批、企業(yè)B共16批、企業(yè)C共5批、企業(yè)D、E各3批、企業(yè)F、G各1批，其中企業(yè)A和企業(yè)B市場占有率較高。

1.2 試劑試藥 乙腈(賽默飛世爾科技中國有限公司，色譜純)；磷酸二氫鉀(國藥集團化學試劑有限公司，分析純)；磷酸(國藥集團化學試劑有限公司，分析純)；氫氧化鈉(國藥集團化學試劑有限公司，分析純)；超純水(自制)；甲鈷胺(中國食品藥品檢定研究院，批號：100692-201805，含量：92.8%)。

1.3 試驗儀器 高效液相色譜儀(日本島津LC-2030，SPD-20A紫外-可見分光檢測器以及LC Solution色譜工作站)；電子分析天平(梅特勒 XS205DU型，梅特勒XE104型)；pH計(梅特勒 PE20型)。

2 試驗方法

2.1 試驗標準 按照《中國藥典》2015年版(二部)甲鈷胺膠囊檢驗標準，進行含量測定和含量均勻度檢驗項目的試驗。試驗在避光(小于5 Lx)條件下完成。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗 Waters Sunfire C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以0.03 mol·L-1磷酸二氫鉀(用0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液或磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5)：乙腈(84∶16)為流動相；檢測波長：342 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

取甲鈷胺對照品10.08 mg，置20 mL量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，在自然光下放置10 min，過濾，進樣20 μL，調(diào)節(jié)流速使甲鈷胺峰保留時間約為12 min，甲鈷胺峰與羥鈷胺峰(相對保留時間約為0.2)的分離度大于20[3]。

2.3 溶液的制備 對照品溶液的制備：精密稱取甲鈷胺對照品10.52、10.38 mg，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

含量測定的供試品溶液制備：取供試品25粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于甲鈷胺5 mg)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相70 mL，超聲使甲鈷胺溶解，放冷，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

含量均勻度的供試品溶液制備：取供試品1粒，將內(nèi)容物傾入 10 mL量瓶中，囊殼用流動相分3次洗滌，洗液并入量瓶中，加流動相7 mL，超聲使甲鈷胺溶解，放冷，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3 試驗結(jié)果

3.1 含量測定 經(jīng)檢驗47批次甲鈷胺膠囊均符合規(guī)定。含量測定結(jié)果在92.4%～108.1%之間，平均值為99.8%。

其中，企業(yè)A 共18批，其含量測定結(jié)果在92.4%～107.5%之間，平均值為99.1%，最高值和最低值相差15.5%；企業(yè)B 共16批，其含量測定結(jié)果在96.4%～108.1%之間，平均值為100.6%，最高值和最低值相差11.7%；企業(yè)C 共5批，其含量測定結(jié)果在93.8%～101.6%之間，平均值為96.7%；企業(yè)D 共3批，其含量測定結(jié)果平均值為100.2%；企業(yè)E共3批，其含量測定結(jié)果平均值為103.0%；企業(yè)F 1批，其含量測定結(jié)果為100.2%；企業(yè)G 1批，其含量測定結(jié)果為102.0%。

3.2 含量均勻度 經(jīng)檢驗47批次甲鈷胺膠囊均符合規(guī)定。A+2.20S的范圍為4.4～14.0，平均數(shù)據(jù)8.2。

其中，企業(yè)A 共18批，其含量均勻度測定結(jié)果在4.4～14.0之間，平均值為7.3；企業(yè)B 共16批，其含量均勻度測定結(jié)果在5.4～11.2之間，平均值為8.5；企業(yè)C 共5批，其含量均勻度測定結(jié)果在7.3～11.2之間，平均值為9.0；企業(yè)D 共3批，其含量均勻度測定結(jié)果平均值為9.4；企業(yè)E共3批，其含量均勻度測定結(jié)果平均值為10.1；企業(yè)F 1批，其含量均勻度測定結(jié)果為9.2；企業(yè)G 1批，其含量均勻度測定結(jié)果為5.4。

4 結(jié)果分析及討論

按標準進行檢驗，合格率為100%，質(zhì)量狀況較好?？疾焱粡S家多批次含量結(jié)果,通過比較批次間的差別可以分析出該企業(yè)的工藝成熟程度,需要完善的工藝程序。考察含量均勻度主要是對該工藝所生產(chǎn)出的產(chǎn)品驗證其均勻度，使含量能達到良好的均一性。企業(yè)A共18批，其含量測定結(jié)果在92.4%～107.5%之間，平均值為99.1%，最高值和最低值相差15.5%，最低92.4%(含量均勻度12.5)、最高107.5%(含量均勻度12.0)、次高105.1%(含量均勻度14.0)，含量結(jié)果的極值相對其含量均勻度數(shù)據(jù)也是高值，說明其工藝中混勻效果及填充質(zhì)量有待進一步考察研究；企業(yè)B共16批，其含量測定結(jié)果在96.4%～108.1%之間，平均值為100.6%，最低96.4%(含量均勻度10.5)、最高108.1%(含量均勻度11.2)，該企業(yè)除去這2批次，其余批次均在100%左右，說明其工藝中混勻效果較好，但應注意個別批次的數(shù)據(jù)；企業(yè)C 共5批，其含量測定結(jié)果在93.8%～101.6%之間，平均值為96.7%，該企業(yè)平均含量較低，企業(yè)應注意在生產(chǎn)工藝中原料投料環(huán)節(jié)；由于企業(yè)D、E、F、G檢品批次較少，不能做很好地歸納分析。由于該品種的含量均勻度普遍較高，除去該品種是小規(guī)格的因素外，應格外注意該品種生產(chǎn)工藝中膠囊填充環(huán)節(jié)的填充效果。試驗結(jié)果表明，各廠家結(jié)果有一定差異，且同一廠家不同批次的結(jié)果也存在較大差異。在保證現(xiàn)有質(zhì)量的前提下，需要進一步防范風險、完善該品種的生產(chǎn)工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量。