山東肉鴨主要細(xì)菌病調(diào)查與耐藥性分析

魏中鋒 樊祜卿 王文秀 朱峰亮 姚靜

摘 要：為了解山東肉鴨主要細(xì)菌病流行情況，本試驗(yàn)從山東菏澤、臨沂、濰坊3個(gè)地區(qū)采取86個(gè)肉鴨養(yǎng)殖場發(fā)病病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定和耐藥性進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，大腸桿菌病陽性場68個(gè)，占比79.1%;漿膜炎陽性場78個(gè)，占比90.7%;沙門氏菌陽性場46個(gè)，占比53.5%;從3個(gè)地區(qū)共分離出埃希氏菌64種、里默氏桿菌34種、沙門氏菌53種。耐藥性顯示主要病原菌對20種抗菌藥呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，埃希氏菌、里默氏桿菌呈現(xiàn)14重以上耐藥，細(xì)菌性疾病控制愈發(fā)困難;沙門氏菌耐藥以5～9重耐藥為主。

關(guān)鍵詞：肉鴨;細(xì)菌;耐藥性

中圖分類號：S858.32 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1673-1085（2021）9-0052-05

隨著鴨養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)模化與集約化發(fā)展，鴨細(xì)菌病已成為阻礙養(yǎng)鴨業(yè)發(fā)展的重要因素[1]，山東省作為中國肉鴨養(yǎng)殖大省，尤其是菏澤、臨沂和濰坊地區(qū)是山東肉鴨養(yǎng)殖較大地區(qū)之一。近年來，隨著集約化、高密度化的增加，肉鴨細(xì)菌病呈現(xiàn)高發(fā)和多發(fā)態(tài)勢，并且抗生素治療效果較差，這給養(yǎng)殖場造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。引起養(yǎng)鴨場發(fā)生細(xì)菌性疾病的病原較多，如大腸埃希氏菌、沙門氏菌、葡萄球菌、里默氏桿菌等，但不同地區(qū)分離的病原菌有所不同，山東主要流行的為大腸桿菌、沙門氏菌和鴨傳染性漿膜炎。本研究擬通過對菏澤、臨沂和濰坊地區(qū)肉鴨場主要細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定、耐藥性分析和耐藥基因檢測，以期為肉鴨養(yǎng)殖細(xì)菌病預(yù)防與控制提供科學(xué)的防控方法。

1 材料與方法

1.1 病料來源

病料來自菏澤、臨沂和濰坊地區(qū)臨床具有典型癥狀的肉鴨，解剖有心包炎、肝周炎、腹膜炎、氣囊炎等明顯病變，無菌采取腦、肝臟、脾臟等病變組織。

1.2 主要藥品和試劑

麥康凱瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、MH培養(yǎng)基、LB肉湯培養(yǎng)基、緩沖蛋白胨水（ BPW） 、四硫磺酸鈉煌綠（ TTB） 增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（ SC） 增菌液、亞硒酸鹽煌綠（ SBG） 增菌液、藥敏紙片均購自天津市英博生化試劑有限公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)菌分離鑒定 無菌采集病死鴨的肝臟、脾臟、腎臟、氣囊等樣本，劃線接種于普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基。將普通瓊脂培養(yǎng)基于恒溫培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)24 h;將鮮血瓊脂平板分成兩組，分別置于恒溫培養(yǎng)箱中有氧和厭氧條件下，37 ℃培養(yǎng)48 h，期間觀察細(xì)菌生長情況。然后挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，對純化培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和生理生化鑒定，分析致病菌種類。

1.3.2 病原菌耐藥性分析 將鑒定完的細(xì)菌培養(yǎng)物接種于胰蛋白胨大豆肉湯培樣24 h，取100 μL細(xì)菌液體培養(yǎng)物，均勻涂布于鮮血瓊脂平板，待培養(yǎng)基表面菌液晾干后，將藥敏紙片貼于培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)36 h，測定抑菌圈直徑，分析分離細(xì)菌的耐藥情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 菏澤、臨沂和濰坊地區(qū)肉鴨發(fā)病情況

統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

本次調(diào)查共調(diào)查86個(gè)養(yǎng)殖場，采集了258個(gè)樣品，其中大腸桿菌病陽性場68個(gè)，占比79.1%;漿膜炎陽性場場78個(gè)，占比90.7%;沙門氏菌陽性場46個(gè)，占比53.5%;大腸桿菌和漿膜炎混合感染場81個(gè)，占比94.2%;大腸桿菌和沙門氏菌混合感染44個(gè)，占比51.2%;漿膜炎和沙門氏菌混合感染43個(gè)，占比50%;大腸桿菌、漿膜炎和沙門氏菌3種菌混合感染27個(gè)場，占比31.4% 。

2.2 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

取純培養(yǎng)的細(xì)菌接種細(xì)菌生化管，恒溫箱37 ℃培養(yǎng)48 h，觀察分離細(xì)菌發(fā)酵情況，并根據(jù)培養(yǎng)菌落形態(tài)特點(diǎn)和菌體染色特征，判定分離細(xì)菌種類，結(jié)果如表2所示。

本試驗(yàn)共分離埃希氏菌64種，其中肝臟分離32種，脾臟分離17種，腎臟分離13種，氣囊分離2種。分離里默氏桿菌34種，其中肝臟分離22種，脾臟分離0種，腎臟分離0種，氣囊分離12種.分離沙門菌53種，其中肝臟分離23種，脾臟分離7種，腎臟分離6種，氣囊分離17種。

從表3可知，養(yǎng)鴨場主要病原菌均有不同程度的耐藥現(xiàn)象。埃希氏菌分離株的耐藥率：頭孢吡肟（73.4%）、頭孢噻肟（84.4%）、亞胺培南（81.3%）、氨芐西林（95.3%）、頭孢曲松（92.2%）、慶大霉素（59.4%）、鏈霉素（37.5%）、新霉素（31.3 %）、卡那霉素（56.3 %）、四環(huán)素（96.9%）、強(qiáng)力霉素（84.4%）、紅霉素（76.6%）、氯霉素（71.9 %）、乙酰螺旋霉素（93.8%）、阿奇霉素（67.2%）、環(huán)丙沙星（81.3 %）、氧氟沙星（93.8 %）、磺胺甲基異惡唑（90.6 %）、甲氧芐氨嘧啶（84.4 %）、復(fù)方新諾明（76.6 %）、林可霉素（87.5 %）、氟苯尼考（96.9 %），其中只有鏈霉素、新霉素卡拉霉素對埃希氏菌較為敏感。

里默氏桿菌分離株的耐藥率：頭孢吡肟（79.4%）、頭孢噻肟（88.2%）、亞胺培南（82.4%）、氨芐西林（100.0%）、頭孢曲松（94.1%）、慶大霉素（76.5%）、鏈霉素（67.6%）、新霉素（47.1%）、卡那霉素（55.9%）、四環(huán)素（79.4%）、強(qiáng)力霉素（64.7%）、紅霉素（82.4%）、氯霉素（73.5 %）、乙酰螺旋霉素（88.2%）、阿奇霉素（47.1%）、環(huán)丙沙星（76.5 %）、氧氟沙星（88.2%）、磺胺甲基異惡唑（82.4%）、甲氧芐氨嘧啶（88.2%）、復(fù)方新諾明（76.5%）、林可霉素（88.2%）、氟苯尼考（94.1%），其中新霉素、卡那霉素、阿奇霉素對里默氏桿菌較為敏感。

沙門氏菌的耐藥率：頭孢吡肟（3.8%）、頭孢噻肟（5.7%）、亞胺培南（1.9%）、氨芐西林（9.4%）、頭孢曲松（7.5%）、慶大霉素（15.1%）、鏈霉素（3.8%）、新霉素（5.7%）、卡那霉素（9.4%）、四環(huán)素（39.6%）、強(qiáng)力霉素（30.2%）、紅霉素（34.0%）、氯霉素（41.5%）、乙酰螺旋霉素（45.3%）、阿奇霉素（17.0%）、環(huán)丙沙星（5.7%）、氧氟沙星（3.8%）、磺胺甲基異惡唑（49.1%）、甲氧芐氨嘧啶（50.9%）、復(fù)方新諾明（45.3%）、林可霉素（17.0%）、氟苯尼考（26.4%），大多抗生素對沙門氏菌敏感，其中磺胺甲基異惡唑、甲氧芐氨嘧啶、復(fù)方新諾明為較為敏感。

2.4 肉鴨場病原菌多重耐藥性分析

分析結(jié)果見表4。

由表4 結(jié)果可知，肉鴨場分離的細(xì)菌均存在多重耐藥現(xiàn)象，其中埃希氏菌分離株多重耐藥現(xiàn)象最為嚴(yán)重，呈現(xiàn)14重以上耐藥;里默氏桿菌分離株多重耐藥現(xiàn)象次之，以5～13重常見;沙門菌分離株多重耐藥現(xiàn)象相對較少，以5～9重耐藥為主。

3 討論與小結(jié)

隨著肉鴨養(yǎng)殖越來越向集約化和規(guī)模化發(fā)展，飼養(yǎng)密度越來越大，細(xì)菌病的發(fā)生日益頻繁，而且隨著細(xì)菌耐藥性的增加，細(xì)菌病更加難以控制，常給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。大腸桿菌、鴨疫里默氏桿菌和沙門氏菌是引起鴨群細(xì)菌病的最常見病原，對我國肉鴨養(yǎng)殖的發(fā)展以及人類公共衛(wèi)生安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅[3]，并且這3種病的臨床癥狀很相似，肉鴨感染大多為2種以上混合感染[4]，因此從臨床上難以診斷。本試驗(yàn)從菏澤、臨沂、濰坊3個(gè)地區(qū)86個(gè)肉鴨養(yǎng)殖場病死鴨病料中分離出埃希氏菌64種、里默氏桿菌34種、沙門菌53種，說明在山東這3個(gè)地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場中細(xì)菌性污染較為普遍，并且出現(xiàn)多重感染越來越嚴(yán)重的趨勢。隨著抗菌藥的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌耐藥現(xiàn)象不斷增多[5]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，肉鴨場中埃希氏菌、里默氏桿菌耐藥性越來越普遍，呈現(xiàn)14重以上耐藥，細(xì)菌性疾病控制愈發(fā)困難;沙門菌耐藥以5～9重耐藥為主，形勢也不容樂觀。

大腸桿菌作為一種條件性疾病，與養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)條件有很大的關(guān)系，養(yǎng)殖設(shè)施和條件相對較好的發(fā)病率明顯低于設(shè)施簡陋的養(yǎng)殖場[6]，大腸桿菌的控制從根本上主要是改善養(yǎng)殖條件。鴨傳染性漿膜炎作為常見肉鴨疾病，發(fā)病具有季節(jié)性，需要加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，加強(qiáng)鴨舍的通風(fēng)、環(huán)境干燥、清潔衛(wèi)生、消毒，采用全進(jìn)全出的飼養(yǎng)制度。沙門氏菌作為一種肉禽常見細(xì)菌病，在山東省養(yǎng)殖肉鴨中較為普遍，發(fā)病率也比較高[7]，感染可能與種禽場有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張大丙.當(dāng)前鴨病流行現(xiàn)狀及防控對策[J].中國家禽，2012，34（7） ： 38-40.

[2] 林安，喻元，胡嵐嵐，等.鴨源大腸桿菌和沙門菌混合感染的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志，2012，48（4） ： 45-47.

[3] 陸新浩，陳秋英，劉鴻等.當(dāng)前鴨傳染病的流行特點(diǎn)及防控建議[J].水禽世界，2012（02）：7-12.

[4] Wei B， Cha S Y， Kang M， Park I J， Moon O K， Park C K， Jang H K.Development and application of a multiplex PCR assay for rapid detection of 4 major bacterial pathogens in ducks[J]. Poultry Science， 2013，92（5）：1164-70.

[5] 張濟(jì)培，韋慶蘭，譚華龍，等.廣東水禽源大腸埃希氏菌耐藥性及氨基糖苷類耐藥基因研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，37（ 5） ： 42-46.

[6] 劉英龍.濰坊地區(qū)鴨大腸桿菌病流行病學(xué)調(diào)査及防治措施研究[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[7] 王健丞.山東省部分地區(qū)雞源致病菌耐藥性及中藥防治研宄[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.