超高效液相色譜法在食品四環素類藥物殘留檢測中的應用

李翠萍

（河南護理職業學院，河南安陽 455000）

隨著社會的快速發展，人們生活水平逐漸提高，食品安全問題越來越受到重視。一些養殖戶受利益驅使，非法使用四環素類獸藥，導致四環素類獸藥殘留問題日益嚴重，四環素類獸藥殘留會嚴重傷害人們的健康。

1 四環素類藥物及四環素類藥物殘留概述

四環素類抗生素作為一種抑菌性廣譜抗生素，被廣泛用于防治革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、立克次氏體、支原體和衣原體等所致的疾病，其不良反應主要有消化道反應、肝損害、腎損害、影響骨骼及牙齒的發育、局部刺激、過敏反應、腸道菌群失調及與金屬離子形成絡合物等。

隨著人們生活水平逐漸提高，對動物源食品的質量要求也隨之提高。近年來，動物源食品四環素類抗生素殘留問題逐漸成為人們關注的焦點。有研究表明四環素類抗生素可防治動物疾病，提高生產效率，改善畜產品的質量。然而，由于一些養殖人員缺乏科學知識，一味追求經濟利益，導致畜牧業中四環素類抗生素濫用現象普遍存在。濫用四環素類抗生素造成有害物質在動物源食品中產生殘留，對人體健康造成危害，損害生態環境，影響畜牧業的發展。目前，檢測四環素類抗生素殘留的方法有理化檢測法、免疫檢測法和微生物法等[1]。理化檢測法主要有超高效液相色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法、超高效液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜-串聯質譜法和高效毛細管電泳法等[2-5]。由于超高效液相色譜法具有高分離度、高分析速度、高靈敏度、易與質譜串聯和方法轉換簡便等優勢，廣泛應用于四環素類藥物殘留的分析檢測。

2 超高效液相色譜法概述

超高效液相色譜是一種基于小顆粒填料的液相色譜技術，其原理與高效液相色譜法大致相同，具有以下特點。①高性能、小顆粒微粒固定相。常見高效液相色譜的色譜柱如十八烷基硅膠鍵合柱的粒徑為5 μm，而超高效液相色譜的色譜柱粒徑可達3.5 μm，甚至1.7 μm，更加有利于物質的分離。②超高壓輸液泵。由于超高效液相色譜的色譜柱粒徑減小，使壓力成倍增大。因此，超高效液相色譜的輸液泵也相應改成超高壓輸液泵。③檢測器靈敏度高，并且采樣速度很快。④使用低交叉污染、低擴散自動進樣器，并且配備了壓力輔助進樣技術和針內進樣探頭。⑤優化設計儀器整體系統。色譜工作站安裝有多種平臺軟件，使超高效液相色譜與高效液相色譜分析方法可自動轉換。

與傳統的高效液相色譜法相比，超高效液相色譜法的速度是高效液相色譜法的9倍，靈敏度是高效液相色譜法的3倍，分離度是高效液相色譜法的1.7倍，減少了溶劑使用量，縮短了分析時間，降低了分析成本。目前，超高效液相色譜技術主要應用于藥物分析、食品分析、生化分析、環境分析等領域，尤其是中藥研究領域，超高效液相色譜技術可以解決中藥組分復雜、分離困難等問題。

3 超高效液相色譜法在食品四環素類藥物殘留中的應用

陳艷等[6]利用超高效液相色譜-質譜聯用法對鹵肉制品中的四環素、金霉素、強力霉素、土霉素等四環素類藥物殘留進行檢測并建立了相關方法。結果表明，在濃度0.1～10 μg/mL，四環素、金霉素、強力霉素、土霉均呈現良好的線性關系，線性相關系數大于0.99。在50 μg/kg、100 μg/kg、200 μg/kg3個濃度的添加水平下，四環素、金霉素、強力霉素、土霉素的平均回收率在76.7%～103.7%，相對平均偏差為3.2%～4.6%。采用此方法測定了樂山地區220份市售鹵肉制品中的四環素類藥物殘留量，并對測定結果進行了質量安全性分析，結果顯示四環素類藥物的含量均在國家標準規定范圍內。說明該方法選擇性強、重現性好且靈敏度高，可用于測定市售鹵肉制品中的四環素類藥物殘留。皮璟漁等[7]采用超高效液相色譜-串聯質譜法對鴨蛋中的四環素、二甲胺四環素、鹽酸金霉素、去甲基金霉素、土霉素、甲烯土霉素和多西環素等7種四環素類藥物殘留進行檢測分析。結果表明，在10～100 ng/mL濃度范圍內，7種四環素類藥物殘留具有良好的線性關系，檢出限為0.2～1 μg/kg，平均加樣回收率為84.3%～94.1%，精密度為0.9%～2.7%，相對標準偏差為1.7%～7.7%。表明該方法可用于檢測分析鴨蛋中的四環素類藥物殘留。劉柏林等[8]借用超高效液相色譜-串聯質譜法對禽類食品中的4種四環素與11種喹諾酮獸藥殘留進行了測定分析。結果表明，在0.1～50.0 μg/L濃度范圍內，15種獸藥殘留線性關系良好，線性相關系數均大于0.992 7，相對標準偏差在0.51%～15.3%，平均回收率在60.6%～117.9%，檢出限達到0.05～0.20 μg/kg。表明該方法適合于檢測分析禽類食品中多種四環素與喹諾酮獸藥殘留。采用此方法對安徽省市售的2016—2018年雞蛋和雞肉樣品中四環素與喹諾酮殘留進行了檢測，并對其食品安全指數進行了評估，發現雞蛋和雞肉中四環素類和喹諾酮類國際食品標準均值都小于1，說明其膳食風險較低。方靈等[9]采用超高效液相色譜-串聯質譜法測定分析了牛奶中四環素類、大環內酯類、磺胺類、氯霉素類和喹諾酮類5類38種抗生素藥物殘留。結果表明，在各自的線性濃度范圍內，38種抗生素具有良好的線性關系，相關系數均大于0.99，在3個（1.0 μg/kg、5.0 μg/kg、10.0 μg/kg）加標水平下，平均回收率在70.7%～94.9%，定量下限達到0.10～1.0 μg/kg，相對標準偏差在4.0%～9.4%。說明該方法重現性好、靈敏度高且操作簡單，能滿足牛奶中多種抗生素藥物殘留的檢測需求。石春紅[10]等采用超高效液相色譜-質譜聯用法對動物源性食品中四環素、土霉素等4種四環素類藥物殘留量進行檢測。結果表明，在5～200 μg/L濃度范圍內，4種四環素類藥物均呈現良好的線性關系，相關系數均大于0.995，平均回收率在92.7%～107.2%，相對標準偏差小于8%，檢出限達2.5 μg/kg。說明本方法靈敏度高、重現性好、簡單快速，適合于快速測定動物源性食品中四環素類藥物殘留。

4 結語

超高效液相色譜法具有分離度高、分析速度快、方法轉換簡便、靈敏度高和易與質譜串聯等優勢，促進了食品獸藥殘留研究領域的發展。由于食品種類繁多，成分復雜，所以分離比較困難，而這些問題可以通過超高效液相色譜法得到解決。在同樣的檢測條件下，超高效液相色譜儀的分辨率更高，能檢測到更多色譜峰，并且超高效液相色譜儀能分離的色譜峰比高效液相色譜儀多出一倍，但是檢測過程中由于儀器內部的壓力過大，也導致其產生一些問題，如儀器老化速度加快，泵的使用壽命相對降低等。隨著科學技術的不斷發展，這些問題會逐漸得到解決，未來超高效液相色譜技術會越來越普及，得到質的飛躍和提升。