五丹胃福顆粒對胃癌前病變大鼠組織病理學及VEGF和HIF-1α的影響研究

祁向爭，胡建功，馬志豪，李志強，姬壯壯，徐旭

(1.天津中醫藥大學第二附屬醫院,天津 300150；2.天津藥物研究院有限公司,天津 300193)

胃癌是消化系統常見的惡性腫瘤，臨床預后極差，病死率居各類腫瘤第二位[1]。胃癌前病變(PLGC)指慢性萎縮性胃炎(CAG)伴腸上皮化生、上皮內瘤變的病理狀態，是慢性發病過程[2]。現代研究表明胃癌前病變中的腸上皮化生和瘤變是胃炎向胃癌轉化的關鍵步驟，對其干預治療可顯著降低胃癌的發病率[3]。本次實驗通過五丹胃福顆粒干預胃癌前病變大鼠，觀察VEGF、HIF-1α指標及胃黏膜組織病理學變化，證實五丹胃福顆粒對PLGC的預防和治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康清潔級雄性SD大鼠，80只，鼠齡15 d，體質量(20±5)g，適應性飼養1周。

1.2 藥物與制劑

雷尼替丁(天津太平洋制藥有限公司)；N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍(MNNG，Fluka公司)，每周用雙蒸水配成1 g/L的母液，4 ℃避光儲存，臨用時用雙蒸水配成100 μg/mL(每天配1次)，供大鼠自由飲用，飲水瓶用油漆涂黑避光；五丹胃福顆粒購自天津中醫藥大學第二附屬醫院藥房，大鼠用藥量根據人和動物間按體表面積折算的等效劑量以及高、中、低劑量計算法確定，即高劑量1.44 g/mL，中劑量組0.72 g/mL，低劑量組0.36 g/mL。葉酸購自天津中醫藥大學第二附屬醫院藥房(天津力生制藥股份有限公司)。

1.3 分組與給藥

造模成功大鼠56只，隨機分為模型組(A組)、五丹低劑量組(B組)、五丹中劑量組(C組)、五丹高劑量組(D組)、理氣組(E組)、祛瘀組(F組)、葉酸組(G組)。各中藥組分別給予高中低不同濃度的3組中藥顆粒劑，2 mL/次，2次/日，共12周。祛瘀組與理氣組是五丹胃福顆粒的拆方，分別為丹參飲與五磨飲子為主組成。西藥對照組給予葉酸，劑量根據《藥理實驗方法學》人和動物間按體表面積折算的等效劑量，0.72 g/mL。

1.4 病理組織學檢測標準

治療12周后進行病理組織學檢測，HE染色觀察胃黏膜病理變化，包括炎癥、萎縮、腸化、瘤變的病理情況。參照《慢性萎縮性胃炎中醫診療共識意見》[4]給予量化，主要變量是炎癥、萎縮、腸化、瘤變。無病理組織學改變計為0分。炎癥按“輕、中、重”三個級度分別計1、2、3分。萎縮、腸化按“輕、中、重”三個級度分別記3、6、9分。瘤變按“輕、重”二個程度分別記為3、9分。

1.5 檢測指標

1.5.1 大鼠的一般情況

大鼠整體狀態、精神狀態、皮毛光澤度、反應能力、飲食情況。

1.5.2 VEGF、HIF-1α

干預12周末，停藥2 d后，免疫印跡法檢測大鼠VEGF、HIF-1α水平。

1.5.3 大鼠胃黏膜病理變化

動物處死后，取全胃，沿胃大彎剪開，取胃竇和胃體部。4%多聚甲醛浸潤固定12 h以上，沖水24 h，50%、75%、95%、100%乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟后，石蠟包埋。切片厚5 μm，常規蘇木精-伊紅染色病理學檢查。觀察指標及病情分級標準：腺體炎癥、萎縮病理組織學分級標準、腸上皮化生及上皮內瘤變分度標準。

1.6 統計學處理

統計分析采用SPSS22.0統計軟件。計數資料組間比較使用χ2檢驗，等級資料組間比較使用秩和檢驗，以P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠一般情況

分組干預期間，大鼠經造模后，整體狀態明顯變差。經五丹胃福顆粒低劑量、中劑量、高劑量、理氣組、祛瘀組和葉酸治療后，一般狀態有不同程度好轉。

2.2 采用Western Blot法檢測VEGF、HIF-1α結果

治療12周，與A組比較，其他組胃竇部黏膜VEGF、HIF-1α顯著降低(P<0.05)；B組、C組與D組比較，差異無統計學意義(P>0.05)；E組、F組與D組相比，差異沒有統計學意義(P>0.05)，但VEGF降低趨勢在F組比E組更明顯，HIF-1α降低趨勢在E組比F組更明顯。E組與F組比較，差異沒有統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組大鼠胃竇黏膜VEGF、HIF-1α水平

2.3 胃竇黏膜病理結果

經12周藥物干預后，A組可見胃壁彈性差，黏膜淡白、紅白相間，或紫暗，皺襞低平或粗大，走向紊亂，皺襞減少甚至消失，黏膜表面粗糙，黏液減少，或可見散在糜爛出血點，可見單個或多個小結節。B、C、D、E、F、G組大鼠胃壁彈性尚可，黏膜呈粉紅色，表面光澤，被覆較多黏液，黏膜皺襞平整光滑，走向基本規則，見圖1。

圖1 各組大鼠胃黏膜組織病理變化(HE染色)

各組間炎癥積分比較：B組、C組、D組、G組與A組比較，炎癥積分減低(P<0.05)。B組、C組與D組比較，P>0.05，見表2。

表2 各組大鼠胃黏膜炎癥程度積分比較(分)

各組間萎縮程度積分比較：B組、C組、D組與A組比較，積分減少(P<0.05)。B組、C組與D組比較，P>0.05，見表3。

表3 各組大鼠胃黏膜萎縮程度積分比較(分)

各組間腸化程度，僅模型組可見腸化，余治療組未見腸化表現，各組間沒有差異，見表4。

表4 各組大鼠胃黏膜腸化程度積分比較(分)

各組間瘤變程度積分比較：D組、G組與A組比較，積分減低(P<0.05)，見表5。

3 討論

3.1 PLGC中醫認識

胃癌前病變大多是由胃黏膜慢性炎癥反應發展而來，與人們生活節奏變快、作息不規律、暴飲暴食等相關，患者多有胃脘脹痛等表現，嚴重影響生活質量，此期應該積極防治，以防止發生癌變[5-6]。

PLGC患者臨床癥狀主要有心下痞滿、胃脘脹痛、嘈雜吞酸、嘔惡納呆等，故多屬中醫“胃痞”“胃痛”等范疇，病位以胃為主，與肝脾相關[6]。因脾胃同居中焦，一臟一腑，以膜相連，互為表里，故脾病多及于胃。脾氣升宣水谷精氣，布施五臟為用；胃腑通降陰濁，和調六腑。升降相因，動靜相和，故而以成中焦升降之變化，精微得化，氣血得生[7-8]。肝為剛臟性喜條達而主疏泄，肝的疏泄功能促進和協調脾胃氣機的升降，二者聯系緊密[9]。

然胃為六腑之大主，多血多氣，寒熱痰瘀之邪，無一不先犯胃土，使胃氣逆上，脾胃氣血失和，而生脹痛。所以認為PLGC這一慢性病變過程主要是胃氣郁滯，氣郁日久，久病及血，而使胃絡失和，導致瘀血阻于胃絡。劉宇旻[10]等認為胃絡瘀阻是貫穿PLGC胃黏膜屏障損傷的關鍵病理因素。張強[11]等認為氣滯血瘀病機是PLGC 基本病理過程。現代實驗研究認為PLGC血瘀證患者多存在微循環障礙，多有微循環血管內皮舒張功能和通透性異常，血管內皮受損，血細胞凝聚，血液呈高凝狀態[12]。

3.2 五丹胃福顆粒作用機理

五丹胃福顆粒是天津中醫藥大學第二附屬醫院名老中醫邵祖燕教授自創經驗方，為傳統名方五磨飲子與丹參飲化裁而成。現代研究表明五丹胃福湯可增加胃黏膜血流量，促進大鼠胃運動，使炎癥因子表達降低，從而能有效治療CAG，并延緩PLGC的發生發展[13-16]。方中木香可以促進胃排空，增強胃腸運動[17]；木香藥理成分木香烴內酯(CO)、去氫木香內酯(DE)能抑制炎癥因子腫瘤因子，使胃組織損傷減小[18]。沉香提取液降低氧化因子微量丙二醛(MDA)、及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)、微量還原性谷胱甘肽(GSH)的活性，保護胃黏膜[19]。檳榔藥理成分檳榔堿，可促進胃腸運動[20]。枳實可以促進胃腸動力[21]。丹參可以改善微循環，抑制胃酸分泌，減少胃黏膜損傷的作用[22]。丹參中丹參酮ⅡA有抗氧化、抗炎以及抗腫瘤的作用[23]。檀香加強胃腸蠕動[24]。砂仁具有保護胃黏膜、抗炎等作用[25]。從上可得此方劑主要通過理氣和胃、化瘀通絡的功效，進而改善胃黏膜炎癥、調整胃腸運動、保護胃黏膜，治療胃癌前病變，延緩腸上皮化生或不典型增生繼續向胃癌的演變。

3.3 實驗結果分析

各治療組均能有效降低VEGF及HIF-1α，不同劑量組及拆方組之間，治療效果沒有明顯區別。在VEGF改善方面，祛瘀組略優。在HIF-1α改善方面，理氣組略優。改善病理炎癥方面，各治療組均有療效，改善萎縮方面，中藥各治療組均有療效，改善瘤變方面，中藥高劑量組與葉酸組有治療效果。通過以上實驗結果可得五丹胃福顆粒可顯著HIF-1α和VEGF，其中祛瘀組改善 VEGF方面略優，理氣組在HIF-1α改善方面略優。這個空間架構與中醫的“證”類似，反應為時間橫斷面上的空間變化。中醫認為，氣的運動是人生命的根本，在氣的運動中，生命能量交換，物質代謝，所以氣是維持人體生命活動之動力。正常情況下，人體處于氣血和調的狀態，一旦氣的運動在各種因素干擾下，出現運行緩慢甚至停滯，人體會表現一定的癥狀，久之，則氣滯血瘀，絡脈瘀阻。五丹胃福顆粒通過理氣活血降低PLGC大鼠的VEGF及HIF-1α表達，從而使胃黏膜病理積分顯著降低，延緩了PLGC向胃癌的進展。