薄層色譜技術在中藥檢驗中的運用探討

彭嚴

（貴州神奇藥業有限公司，貴州 貴陽 550000）

薄層色譜技術是將中藥的測試品溶液點于薄層板中，用展開劑展開和分離中藥測試品的成分，并與色譜圖進行比對，得出中藥的成分與含量。其可以用于中成藥的檢測和中藥材的含量測定，薄層色譜技術具有直觀性、靈活性、時效性的特點，因此在中藥的檢驗中運用非常廣泛[1]。研究薄層色譜技術在中藥檢測中的具體運用，可以有效保證中藥檢測的質量，提高中成藥的臨床運用效應。

一、薄層色譜技術的原理以及運用

（一）薄層色譜技術的概念和原理解析

薄層色譜鑒別法最早在20 世紀20 年代起開始運用，其在臨床實踐中，主要用于對中藥成分的分析和中藥品質的鑒定。由于薄層色譜技術具有分離和鑒定的雙重功效，而且操作起來比較簡單，因此可以廣泛應用于各種中藥的臨床測試。隨著薄層色譜技術的發展，中藥的成分檢測可以利用薄層掃描儀進行掃描或鑒定。薄層色譜技術根據固定相的支持物不同，可以分為薄層吸附層析法、薄層分配層析法、薄層離子交換層析法和薄層凝膠層析法，主要通過移動相，也就是溶劑流過固定相的過程中完成吸附和分解，通過吸附和分解吸附達到中藥成分相互分離的目標[2]。在中藥成分的實驗中運用次數較多的方法是薄層吸附層析法，吸附性是薄層色譜技術中最重要的一個性質，無論是哪種形式的中藥都可能發生吸附現象，因此，運用薄層色譜技術，中藥成分的確定和檢測結果是十分準確的。

（二）高效薄層色譜法的應用

高效薄層色譜法是采用顆粒較細的吸附劑，運用噴霧法的方法進行中藥的檢測，由于其具有涂層均勻、重現性良好的特性，因此可以準確地鑒定中藥的成分和中藥的質量。高效薄層色譜法的點樣配備了新的裝備，可以進行自動或者半自動的操作，而且其對傳統的薄層色譜法進行了優化和改進，吸附劑具有疏水和清水兩方面的性能，既可以完成正相色譜分離，也能完成反相薄層色譜分離。色譜的選擇具有多樣化的特征，展開方式也有了新的變化，不僅可以完成圓心式展開，也能實現向心式展開。高效薄層色譜法除可以對藥材進行定性分析，還可以對藥材進行定量分析，對諸如生物堿、黃酮類物質進行檢測。

在中藥藥物的分析和中藥材料的分離時，高效薄層色譜法可以采用更均勻、更細的硅膠和纖維素，將其作為固定相對藥材進行色譜分離和分析，由于吸附劑的疏水和清水性有更改，因此，中藥的色譜分離可以實現正相和反相兩種分離，實現多樣化的色譜選擇。同時采用預制薄層板，展開短距離的分離，將顆粒細小的吸附劑進行涂層，通過噴霧法制備進行重現。目前運用高效薄層色譜法檢測中草藥成分的例子不在少數，檢測的時間短，效率高是該方法最大的特點。而且測定中藥成分具有很多的優勢，例如穩定性良好、重現性良好、分離效率高等，可以廣泛應用于中草藥的質量控制研究中。楊小明等人在研究銀杏的提取物時，運用高效薄層色譜法，對其中的聚戊烯醇同系物進行提取，成功分離出銀杏中的幾種成分[1]。

（三）假相薄層色譜法

假相薄層色譜法主要使用的流動相是低濃度的表面活性劑，還有環糊精水溶液，固定相一般為聚酰胺薄膜，在假相薄層色譜法中，表面活性劑和其他溶劑可以共同組成塑膠溶液，對中藥材進行選擇性的溶解。通過梯度洗脫光學檢測進行流動相的檢測，假相薄層色譜法具有流動簡單、價格低廉、處理方便的優勢，既可以使一些不溶于水的中草藥材進行較好的分離，還可以對中藥材中的微量雜質進行限量檢查，或者對患者體內的中藥成分進行分析和測定。假相薄層色譜法不僅可以用于中草藥的檢查，還可以在臨床實踐中展開測驗。在中草藥的檢測和分離中，戈早川成功通過假相薄層色譜法分離出黃連和制劑的組分，按照九比一的比例配制醋酸乙酯，并采用聚酰胺薄膜建立薄層掃描法，同時測定中草藥中含有的四種成分，這也就說明假相薄層色譜法的檢測效率和檢測質量比較優良[2]。

（四）反相薄層色譜

反相薄層色譜法就是運用化學鍵和相，完成藥物的檢測和分離。在反相薄層色譜法中，流動性一般大于固定相的極性，這種方法具備擴散面積小的特點，但由于制備比較復雜，因此可以運用于復合性的中草藥物的分離，對混合物進行分離測驗[3]。反相薄層色譜法中的化合鍵和相的硅膠一般選擇硅烷程度較高的材料，反相色譜法可以為分離提供更多的可能性和選擇性，根據具體的固定材料，選用水、甲醇等溶劑，或者采用兩種以上的溶劑進行混合制作成展開劑，根據中草藥的性能挑選合適的展開劑進行測定。在中草藥的含量測定和質量控制中，反向薄層色譜法一般可以采用甲醇與水進行比例性的配合，制作成展開劑對中草藥的有效成分進行檢測，分離其中所包括的具體化學成分和植物成分，對每一種成分進行技術鑒定。

（五）微乳薄層色譜法

微乳薄層色譜法是運用有機溶劑作為展開劑的一種方法，其屬于經典的薄層色譜法，主要所用的工具是乳化劑和水性以及油相，這些成分可以幫助中藥材構成光學同性微乳薄層色譜，通過合理搭配不同的穩定體系和展開劑，使穩定體系呈現均勻透明的狀態，或者形成穩定的微呈乳光的體系。這種方法由于需要按照既定量制成微乳，因此，檢測工藝比較復雜，而且容易受多種因素的干擾，但由于對藥材的檢測具有靈敏度，因此也可以對中成藥的成分進行分離測定，大眾熟知的雙黃連口服藥就是通過這種方式進行成分鑒定和分離測定的。

二、薄層色譜新技術的應用發展

（一）薄層色譜技術的儀器與材料支持

薄層色譜技術的儀器與材料主要有三種不同的類型，第一種是支持物與固定相，支持物主要包括玻璃板、塑料板、鋁板等，固定相主要包括硅膠、氧化鋁、聚酰胺等物質。第二種是點樣器與展開容器，點樣器主要包括微升毛細管，點樣器可以是手動的，也可以是半自動或自動；展開容器主要有平底展開缸和雙槽展開缸，根據中草藥檢測的實際情況，在一般情況下會選用雙槽展開缸進行實驗[3]。第三部分是顯色與檢視，一般顯色器具有玻璃噴霧和空氣壓縮機，而檢視器是暗箱和攝影設備。薄層色譜技術可以以直觀的彩色圖像表達中草藥的成分更方便判斷中藥中的中草藥成分和中草藥元素，而且薄層色譜技術各單元的操作相對獨立，互不干涉、互不影響，因此掃描比較可信，可以根據具體的中成藥檢測方式進行靈活的調整。色譜的生成根據選擇技術的不同有不同的時間，但一般來講，同一中草藥成分可以在同時產生18 個左右的樣品色譜。

（二）薄層色譜檢測的操作要點以及常見問題

薄層色譜檢測的主要步驟是標準物質的選擇，中草藥檢測品的制備，薄層板的選擇。在基礎物品到位之后進行點、展開、顯色，而具體來說，標準物質的選擇需要有對照品和對照藥材，由于有一些中草藥的共存植物比較多，沒有專屬性的物質，因此，單純利用對照品進行分離純化的成本比較高。要加入對照藥材，與對照藥材進行分析和鑒定，在選擇供試品時，一般可以采用溶劑提取法，也就是選擇合適的提取溶劑對多種藥材或者處方藥進行提取。有一些成分復雜的藥材有多味中成藥，需要利用多種提取方法聯合。薄層板的選擇中，硅膠的運用范圍最廣，但由于不同中草藥檢測品的酸堿性不同，因此還需要適當考慮氧化鋁和聚酰胺這兩種物質[4]。在點樣時需要注意樣品要根據半自動或自動的點樣機進行定量，在展開時，根據具體中藥成分的鑒定選擇不同樣式的展開缸，針對不同測定成分的性質，在操作時需要選擇適合的顯色方式，諸如某些含有顏色成分的藥材，黃酮類、苯丙素類成分的藥材，或者大青葉、紅花這類顏色成分比較濃烈的藥材在紫外線下有熒光，因此，選擇顯色方式是需要根據測定的成分進行具體的選擇。在測定中藥成分時，需要注意各種影響因素如溫度、濕度、用量等，有效控制外界因素和內生因素，保證色譜檢測的準確性。

結束語：總之，薄層色譜技術本身就是對中藥進行分析的一種方法，隨著高科技產業的興起，薄層色譜新技術的研發力度會逐漸加大，技術要領會更加規范，更具有針對性。因此，在未來，薄層色譜新技術的操作會更加簡單快捷，在未來，隨著中藥檢測技術的不斷成熟，相關設備的不斷改進，薄層掃描法可以廣泛應用于中藥和中藥材的含量鑒定中，根據鑒別的含量測定，對某些中藥材和其同屬近緣的植物進行指紋圖譜的鑒定。