miR-377和FNBP1 mRNA在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及臨床意義

王欣如，張麗，肖太武，李強(qiáng)，杜卉，高磊

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤是臨床上常見的一種惡性淋巴瘤，主要臨床表現(xiàn)為淋巴結(jié)腫大。該病常發(fā)生于老年人中，且男性多于女性，具有病情發(fā)展迅速、發(fā)病率高、預(yù)后差等特點[1-2]。據(jù)報道，近年來彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)病率逐年升高，且在發(fā)展中國家的發(fā)病率超過60%，嚴(yán)重影響患者的健康及生活質(zhì)量[3]。然而，由于彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤早期缺乏明顯癥狀，且發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，目前對其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，因此成為研究的熱點之一。微小RNA-377(microRNA-377，miR-377)是一種非編碼小RNA，目前已證實其在多種疾病(如癌癥)中發(fā)揮重要作用[4-5]。形成素結(jié)合蛋白1(formin binding protein 1，F(xiàn)NBP1)為細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白，廣泛存在于人的組織細(xì)胞中[6]。但miR-377和FNBP1對彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤發(fā)病的影響及作用尚不清楚。基于此，本研究擬通過檢測彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-377和FNBP1信使核糖核酸(mRNA)的表達(dá)情況，探究其在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的作用，以期為臨床治療彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤提供有價值的參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年2月—2018年3月聊城市人民醫(yī)院血液科診治彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者130例作為觀察組，男75例，女55例，年齡50～70(60.17±4.24)歲；按照Ann Arbor分期標(biāo)準(zhǔn)[7]進(jìn)行臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期62例，Ⅲ～Ⅳ期68例；按照Hans分型標(biāo)準(zhǔn)[8]進(jìn)行病理分型：生發(fā)中心型57例，非生發(fā)中心型73例；原發(fā)部位：淋巴結(jié)外63例，淋巴結(jié)內(nèi)67例；有全身癥狀50例，無全身癥狀80例。選取同期在醫(yī)院就診的淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者55例為對照組，男30例，女25例，年齡52～75(61.35±4.79)歲。2組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過(倫理批號：2015-01-03)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合“中國彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤診斷與治療指南(2013年版) ”[9]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者及家屬選擇在本院接受治療者；③臨床資料齊全者。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前已接受激素類藥物治療者；②同時患有嚴(yán)重肝病及其他內(nèi)分泌疾病者；③同時患有其他惡性腫瘤的患者。

1.3 觀測指標(biāo)與方法

1.3.1 miR-377和FNBP1 mRNA水平檢測：彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織在患者進(jìn)行手術(shù)時獲得；對照組患者病變組織于取活檢時獲得。組織樣品均置于-70℃冰箱中保存待測。取待測組織，按照RNA提取試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)說明書步驟提取總RNA，然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA(逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Fermentas公司)。以cDNA為模板，進(jìn)行qRT-PCR檢測。PCR反應(yīng)條件為：94℃、5 min，94℃、30 s，60℃、35 s，72℃、10 s，共35個循環(huán)。miR-377(內(nèi)參U6)和FNBP1 mRNA(內(nèi)參GAPDH)引物由北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司合成，序列見表1。采用2-△△CT法計算miR-377和FNBP1 mRNA相對表達(dá)水平。

表1 miR-377和FNBP1 mRNA引物序列

1.3.2 隨訪情況：對彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者出院后進(jìn)行門診復(fù)查或電話隨訪，每月隨訪1次，隨訪時間為3年，隨訪截止日期為2021年3月31日，死亡患者以死亡時間作為隨訪截止日期，并做好記錄，本次隨訪中未出現(xiàn)失訪情況。

2 結(jié) 果

2.1 2組miR-377、FNBP1 mRNA表達(dá)水平比較 觀察組miR-377表達(dá)水平顯著低于對照組，F(xiàn)NBP1 mRNA表達(dá)水平顯著高于對照組(P均<0.01)，見表2。

表2 觀察組及對照組miR-377、FNBP1 mRNA表達(dá)水平比較

2.2 miR-377和FNBP1 mRNA表達(dá)水平在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者不同臨床/病理參數(shù)中比較 以miR-377、FNBP1 mRNA各自表達(dá)水平的平均值(3.91、1.59)分別將彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者分為2亞組，≥平均值為高表達(dá)亞組，<平均值為低表達(dá)亞組。miR-377低表達(dá)亞組臨床Ⅲ～Ⅳ期、病理非生發(fā)中心型、有全身癥狀患者比例明顯高于miR-377高表達(dá)亞組(P<0.05)，F(xiàn)NBP1 mRNA低表達(dá)亞組臨床Ⅲ～Ⅳ期、病理非生發(fā)中心型、有全身癥狀患者比例明顯低于FNBP1 mRNA高表達(dá)亞組(P<0.05)，而2亞組在性別、年齡和原發(fā)部位中比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 miR-377和FNBP1 mRNA表達(dá)水平在不同臨床/病理參數(shù)中比較 [例(%)]

2.3 miR-377與FNBP1 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-377與FNBP1 mRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.355，P=0.000)。

2.4 miR-377和FNBP1 mRNA表達(dá)水平與患者生存關(guān)系 130例彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者隨訪3年，生存94例(72.31%)。繪制彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者治療后0～36個月miR-377和FNBP1 mRNA高、低表達(dá)亞組的生存曲線。miR-377高表達(dá)亞組治療后3年總生存率為82.69%(43/52)，高于miR-377低表達(dá)亞組的65.38%(51/78)(χ2=4.964，P=0.026)。FNBP1 mRNA高表達(dá)亞組治療后3年總生存率為64.52%(40/62)，低于FNBP1 mRNA低表達(dá)亞組的79.41%(54/68)(χ2=4.550，P=0.033)，見圖1。

圖1 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-377、FNBP1 mRNA表達(dá)水平與3年總生存率的關(guān)系

2.5 影響彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的因素分析 將上述有統(tǒng)計學(xué)意義的變量(包括miR-377、FNBP1mRNA、臨床分期、病理分型、全身癥狀)納入Cox回歸模型進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-377低表達(dá)、FNBP1mRNA高表達(dá)、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期是影響彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的獨立危險因素(P均<0.05)，見表4。

表4 影響彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的因素分析

3 討 論

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤屬于大B淋巴細(xì)胞彌漫增生性疾病，該類疾病在臨床特征、免疫表型和分子遺傳學(xué)等方面均具有特異性，是惡性淋巴瘤中發(fā)病率較高的一種疾病[10-11]。引起彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的因素很多，且發(fā)病部位除淋巴結(jié)外，還可處于皮膚、腦、胃腸道等，該病的病情復(fù)雜，發(fā)病率高，且治療后預(yù)后較差[12-14]。流行病學(xué)研究顯示，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患病率逐漸上升，給許多家庭帶來很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，并嚴(yán)重影響患者生命健康安全，而目前臨床治療彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的方法仍不完全有效，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的早期診斷及治療仍是臨床醫(yī)生需要攻克的難題之一[15-18]。因此，對其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入研究，以尋找新的疾病標(biāo)志物具有重要的臨床意義。

miRNA是一類長度為19～25個核苷酸的非編碼微小RNA，能以特定方式調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。許多研究已證實，miRNA參與多種生物學(xué)機(jī)制，并對多種腫瘤及各種疾病的發(fā)生、發(fā)展具有重要作用[19-22]。miR-377是新近發(fā)現(xiàn)的miRNA，廣泛存在于人體中，位于14q32.2染色體上，研究顯示，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[23]。Xu等[24]研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA POU6家族同源框2-AS2可通過調(diào)控miR-377/溴結(jié)構(gòu)域蛋白4促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和耐藥。本研究結(jié)果顯示，觀察組miR-377表達(dá)水平較對照組低，提示miR-377可能參與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)展進(jìn)程。

FNBP1又稱FBP17，屬于細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白中的一員，主要存在于人體胞質(zhì)皮層區(qū)。有研究顯示，F(xiàn)NBP1可參與調(diào)控多種生物學(xué)過程。Suman等[25]研究發(fā)現(xiàn)，侵襲性和低分化的乳腺導(dǎo)管癌組織中FNBP1表達(dá)較高。本研究中觀察組FNBP1 mRNA表達(dá)水平較對照組高，與上述研究相似，提示FNBP1 mRNA可能參與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)展進(jìn)程。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-377和FNBP1 mRNA表達(dá)與患者臨床分期、病理分型及有無全身癥狀密切相關(guān)。生存曲線分析表明，miR-377高表達(dá)亞組及FNBP1 mRNA低表達(dá)亞組具有更高的3年總生存率，提示miR-377和FNBP1 mRNA表達(dá)水平可為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的預(yù)測提供參考。Cox回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，miR-377低表達(dá)、FNBP1 mRNA高表達(dá)、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期是影響彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的獨立危險因素，提示除臨床分期外，升高miR-377表達(dá)及降低FNBP1 mRNA表達(dá)可能有助于緩解彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的病情發(fā)展。本研究Pearson檢驗還發(fā)現(xiàn)，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者miR-377與FNBP1 mRNA表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，提示miR-377與FNBP1可能相互作用參與彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者的病情進(jìn)展，此結(jié)論需進(jìn)一步進(jìn)行驗證。

綜上所述，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤患者瘤組織中miR-377表達(dá)明顯降低，F(xiàn)NBP1 mRNA表達(dá)明顯升高，且其表達(dá)情況與臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)，提示miR-377和FNBP1 mRNA可作為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤病情評估及不良預(yù)后預(yù)測的潛在生物學(xué)指標(biāo)，但其具體的作用機(jī)制還有待深入研究。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

王欣如：設(shè)計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；張麗：提出研究思路，分析試驗數(shù)據(jù)，論文審核；肖太武：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改；李強(qiáng)：進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；杜卉、高磊：課題設(shè)計，論文撰寫