實時熒光人乳頭瘤病毒檢測聯合液基薄層細胞學檢查在宮頸癌篩查中的應用價值

羅軼碩

江西省贛州市章貢區婦幼保健院 (江西贛州 341000)

宮頸癌是臨床常發的婦科惡性腫瘤，一旦發病，將嚴重威脅女性的生命安全。該病發病是一個漸進的過程，從感染人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)到進展為宮頸癌可能需要8～10年甚至更長的時間，因此，采取有效的措施及早篩查宮頸癌及癌前病變對防治宮頸癌具有重要的意義。液基薄層細胞學檢查(thin prep cytologic test，TCT)是利用液基薄層細胞檢測系統對宮頸細胞進行細胞學分類，從而診斷宮頸癌及癌前病變的一項檢查技術，已被應用于宮頸癌的臨床篩查中[1]。但經臨床實踐發現，單一實施TCT篩查宮頸癌仍存在漏診及誤診風險，需聯合其他檢查方法以提升篩查價值。有研究表明，持續感染HPV是引起宮頸病變的重要原因，采取實時熒光HPV檢測可準確檢測HPV感染情況，可輔助診斷宮頸癌[2]。基于此，本研究分析實時熒光HPV檢測與TCT聯合篩查宮頸癌的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2020年12月于我院行宮頸癌篩查的1 600例患者作為研究對象，年齡25～64歲，平均(45.31±4.33)歲；體質量指數(body mass index，BMI)19～28 kg/m2，平均(23.07±0.56)kg/m2；未婚725例，已婚875例。本研究方案通過江西省贛州市章貢區婦幼保健院醫學倫理委員會審核批準。納入標準：有性生活史；有完整子宮；月經干凈5 d后，經影像學檢查明確存在宮頸病變。排除標準：近期有宮頸病變藥物治療史；48 h內有性生活及陰道操作；近1周內有陰道用藥、物理治療史；近3個月內有急性生殖道炎癥、宮頸手術及盆腔治療史；半年內接受過免疫調節劑或免疫抑制劑相關治療。

1.2 方法

所有受檢者均先行TCT操作，即利用一次性宮頸刷采集受檢者宮頸外口、宮頸管處脫落細胞，然后將其置于甲醛保存液中進行多次漂洗操作，將漂洗后的脫落細胞置于全自動制片機中實施人工制片操作，處理后予以人工巴氏染色，并使用光學顯微鏡進行觀察，參考伯塞斯達(The Bethesda System，TBS)分級[3]標準診斷宮頸癌發生情況；在完成TCT后，對受檢者實施實時熒光HPV檢測，即利用一次性宮頸刷采集受檢者宮頸外口、宮頸管處脫落的細胞，將其置于細胞存儲液中，在1.5 ml離心管中置入洗脫液，使用美國貝克曼公司提供的TG16-WS型離心機以3 000 r/min的離心速率、15 cm的離心半徑離心處理10 min，采集沉積的細胞放于裂解液中，使用羅氏Roche公司生產的cobas4800系統自動進行細胞裂解、DNA提取與純化等操作，然后使用美國BioRad伯樂公司提供的實時熒光聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)儀進行基因擴增操作，擴增條件為50 ℃下反應2 min，經94 ℃變性2 min后進入循環，循環溫度及時間分別為93 ℃、15 s，50 ℃、90 s，共進行40個循環，在50 ℃時檢測標本熒光信號，確定HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、HPV73、HPV82感染情況，1種HPV-DNA≥1.0 ng/L即為陽性；最后實施陰道鏡宮頸活檢，并以此檢查結果為診斷金標準。

1.3 評價指標

將陰道鏡宮頸活檢結果作為診斷金標準，對TCT聯合實時熒光HPV檢測篩查宮頸癌的價值進行分析。

1.4 統計學處理

采用SPSS 24.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 陰道鏡宮頸活檢結果

1 600例行宮頸癌篩查的患者，經陰道鏡宮頸活檢明確49例(3.06%)為宮頸癌。

2.2 TCT、實時熒光HPV檢測單一及聯合篩查宮頸癌的價值

以陰道鏡宮頸活檢結果為金標準，TCT聯合實時熒光HPV檢測篩查宮頸癌的準確度、靈敏度、特異度均高于TCT、實時熒光HPV檢測單一篩查，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1～4。

表1 TCT篩查宮頸癌結果(例)

表2 實時熒光HPV檢測篩查宮頸癌結果(例)

表3 TCT聯合實時熒光HPV檢測篩查宮頸癌結果(例)

表4 TCT、實時熒光HPV檢測單獨及聯合篩查宮頸癌的效能比較(%)

3 討論

陰道鏡宮頸活檢是篩查宮頸癌的金標準，雖診斷準確度較高，但其屬于創傷性操作，可引起感染、出血等并發癥，應用于臨床篩查具有一定的局限性，因此，尋求一種準確、無創的檢查方法輔助篩查宮頸癌十分必要。TCT是以脫落細胞制片技術為基礎的檢測方法，是診斷宮頸細胞是否存在病變的重要方法[4]。其只需收集較少的樣本細胞便可呈現較清晰的結構圖像，通過分析細胞核的異型、細胞質的形態或染色情況便可有效評估上皮細胞的病變程度，進而篩查宮頸癌[5]；但在取樣過程中，仍有漏取病變處宮頸上皮細胞的風險，且在對細胞形態特征進行觀察時，檢查者的主觀判斷也會影響TCT診斷宮頸癌的準確度[6]。有研究表明，持續感染高危型HPV是導致宮頸癌的獨立危險因素，定性及定量分析HPV感染情況可輔助篩查宮頸癌[7]。

本研究結果顯示，以陰道鏡宮頸活檢結果為金標準，TCT聯合實時熒光HPV檢測篩查宮頸癌的準確度、靈敏度、特異度均高于TCT、實時熒光HPV檢測單一篩查，差異有統計學意義(P<0.05)。經分析，其原因為，實時熒光HPV檢測是基于PCR技術發展而來的新型核酸檢測技術，可通過計算機控制實時動態檢測PCR擴增產物，并可自動給出結果，且無需對PCR進行后處理，可定性及定量分析HPV感染情況，通過實時熒光HPV檢測可評估宮頸上皮細胞HPV-DNA的擴增情況，直觀反映宮頸上皮細胞病毒種類及病毒載量，輔助篩查宮頸癌[8]，但該檢測方法無法準確提供病毒活動度與整合度的有關信息，且針對一過性HPV感染患者臨床檢測的準確度欠佳；聯合TCT，可優勢互補，進而提高篩查的準確度、靈敏度、特異度。

綜上所述，TCT聯合實時熒光HPV檢測篩查宮頸癌的效能均高于單一診斷，具有較高的診斷價值。