液質聯用法同時測定葡萄酒中的3種甜味劑

◎ 肖 丹

（寧夏建投設計研究總院（有限公司），寧夏 銀川 750001）

甜味劑是指能賦予軟飲料甜味的食品添加劑[1]。隨著甜味劑種類不斷更新和應用范圍的擴大，甜味劑使用后各種問題也開始逐漸顯現。甜蜜素，化學名稱為環己基氨基磺酸鈉；安賽蜜，化學名稱為乙酰磺胺酸鉀；糖精鈉，化學名稱為鄰苯甲酰磺酰亞胺鈉，是常用的3種甜味劑。《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）中對每類食品中甜味劑（以環己基氨基磺酸計）的最大使用量有明確規定，而《葡萄酒》（GB 15037—2006）里規定，葡萄酒不得添加甜味劑[2]。

超高效液相色譜-串聯質譜法由于其靈敏度高、選擇性好，定量準確。適用于對葡萄酒中3種合成甜味劑同時進行分析[3]。本方法采用超高效液相色譜-串聯質譜儀，建立一種可同時測定葡萄酒中3種合成甜味劑的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）（美國Waters公司）；METTLETOLEDO ME204電子天平；超純水系統（成都唐氏康寧科技發展有限公司）；KQ5200B臺式超聲波清洗機（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；微型旋渦混合器（上海躍進醫療器械廠）。

試劑：甲醇、甲酸、乙酸銨，色譜純；安賽蜜標準溶液、甜蜜素、糖精鈉，均為1.0 mg·mL-1。

樣品：葡萄酒，寧夏紫尚葡萄釀酒股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；動相：A-10 mmol·L-1乙酸銨，B-甲醇，進樣體積：10 μL；流速：0.15 mL·min-1；柱溫：35 ℃；流梯度洗脫條件如表1所示。

表1 流動相梯度洗脫條件表

1.2.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源，負離子模式（ESI-）；毛細管電壓（IS）：-3.50 kV；脫溶劑氣溫度（TEM）：500 ℃；脫溶劑氣體流速：1 000 L·Hr-1；離子源溫度：150 ℃；掃描模式：多反應監測（MRM）；3種目標化合物的MRM參數見表2。

表2 3種添加劑的MRM參數表

1.2.3 標準曲線的配制

標準儲備液：10.0 μg·mL-1儲備液，于4 ℃冰箱中保存。

混合標準溶液：配制安賽蜜、甜蜜素、糖精鈉1 μg·mL-1混合標準溶液，于4 ℃冰箱中保存。

混合標準工作液：配制成系列混合標準工作液分別為1 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1，現配現用。

1.2.4 樣品處理

移取葡萄酒樣品1.00 mL于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度，混勻，過0.22 μm水相微孔濾膜后，直接上機進樣分析。

2 結果與分析

2.1 儀器條件的優化

2.1.1 質譜條件的優化

通過質譜端口A/B瓶直接進入質譜進行檢測優化，調諧液為廠家規定200～500 μg·L-1[5]，配制3種單化合物調諧液分別為500 μg·L-1，通過手動調諧方式進行條件優化，此方法耗時短，優化精確符合性強，先進行母離子優化確定脫溶劑氣溫度及脫溶劑氣流速、錐孔電壓后所得的3種甜味劑質譜參數見表2，利用儀器的自動優化功能得到其他離子源參數見1.2.2質譜條件。

2.1.2 色譜條件的優化

本試驗通過對液相端進行條件優化，對pH值及溶劑效應進行考慮，分別選取水相0.1%甲酸水溶液、10 mmol·L-1乙酸銨溶液，有機相甲醇、乙腈相。水相0.1%甲酸水溶液對色譜柱極性影響較低，10 mmol·L-1乙酸銨溶液為緩沖鹽溶液，流速過高導致壓力升高，易產生色譜柱堵塞，對實驗結果影響較大，有機相甲醇毒性且極性相對乙腈而言較低，結果表明選取水相0.1%甲酸水溶液、有機相甲醇。

2.2 方法學評價

2.2.1 方法的線性范圍、檢出限和定量限

將配制好的混合標準工作液上機進行測定，得到各自的線性回歸方程和相關系數。分別對各目標化合物線性范圍的最低濃度點進行信噪比分析，以S/N=3時對應的樣品質量濃度為儀器檢出限，以S/N=10時對應的樣品質量濃度為儀器定量限[4]，結果見表3。

表3 3種食品添加劑的線性方程、相關系數、檢出限和定量限表

方法的線性范圍相關系數（r）均大于0.999，檢出限和定量限均能滿足對葡萄酒檢測的要求。安賽蜜、甜蜜素、糖精鈉線性圖見圖1、圖2、圖3。

圖1 安賽蜜標準曲線圖

圖2 甜蜜素標準曲線圖

圖3 糖精鈉標準曲線圖

2.2.2 回收率和精密度

市面上葡萄酒品種繁多，選取葡萄酒進行加標回收試驗。在稱好的葡萄酒樣品中準確加入定量的3種甜味劑混合標準溶液，配成3個不同添加水平，平行測定6次，計算結果見表4。

表4 葡萄酒中3種食品添加劑的加標回收率和精密度表（n=6）

經檢測，所選取的樣品中葡萄酒所測項目均為未檢出，扣除樣品空白值后計算，結果表明，各目標化合物平均加標回收率為85.4%～99.4%，相對標準偏差為0.9%～2.4%，方法的準確度和精密度均符合食品中多殘留分析的要求。

2.3 實際樣品的測定

按所建立的方法對購自本地零售超市和商店的葡萄酒各3份共6份樣品進行檢測，每個樣品重復測定2次。所檢葡萄酒樣品中甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉均為未檢出。

3 結論

本試驗通過LC-MS/MS同時測定葡萄酒中3種合成甜味劑含量的方法，對其試驗條件、環境進行優化。該方法測定時間短、方法便捷、精密高效、成本低，適合葡萄酒中3種合成甜味劑的定性及定量檢測。