林芝地區野生青岡蕈菌株篩選及出菇試驗

邵妍麗，張高翔，任軍輝，王 利

（西藏職業技術學院，西藏 拉薩 850000 ）

青岡蕈（Tricholma quercicola）為松口蘑的一個近緣種，分布于西藏、云南、四川等地有高山櫟的原始森林中［1］，生長環境良好。青岡蕈與松口蘑的香氣、口感極為相似，但氨基酸含量更高［2］，價格較低，因此深受當地消費者的喜愛［3，5］。但是野生青岡蕈的生長季節較短，一般在每年的7—9月，且多生長在海拔3000 m 以上的原始森林中［1］，一方面采收極為不便，容易造成植被的破壞，另一方面產量不穩定，難以滿足市場的需求。本文通過初選野生青岡蕈的優良菌株，為后期的人工馴化做準備。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2020年8月，在林芝市5 個采集點采集生長健壯的野生青岡蕈子實體（見表1），帶回實驗室后進行菌絲分離。

表1 供試菌株編號及采集地點

1.2 培養基

1.2.1 菌絲分離培養基 葡萄糖20 g、酵母膏2.0 g、蛋白胨10 g、KH2PO41.0 g、MgSO40.5 g、瓊脂18 g、水1000 mL，pH值自然［4，6-11］。

1.2.2 原種及栽培種培養基 櫟類樹木屑28%、麩皮20%、白糖1%、石膏1%、水適量，pH值自然［12-16］。

1.3 菌絲生長對比試驗

1.3.1 菌絲分離試驗 按照配方配制好培養基并進行滅菌后，將5 個采集地點的菌株分別接入到培養基中，每個采集地點的菌株接10 管，在8 ℃、15 ℃各12 h條件下進行暗培養，觀察生長情況。

1.3.2 原種制作 根據原種培養基配方，將各配料加水拌勻（含水量50%），裝入錐形瓶中進行高壓蒸汽滅菌30 min；待菌絲長滿試管后，將培養出的5 個來源的菌絲等量分別接入到原種培養基中，15 ℃恒溫暗培養，觀察菌絲萌發時間、菌絲長勢、菌絲滿瓶時間、菌絲致密程度、色澤和污染率。

1.4 出菇對比試驗

1.4.1 栽培種制作 根據栽培種培養基配方，將各配料加水拌勻（含水量50%），裝入聚丙烯塑料袋（14 cm×24 cm）后，高壓滅菌2 h，待料溫下降至室溫時再接菌，每瓶原種接5 袋，放置在培養室內進行遮光培養，溫度15 ℃，待菌絲長滿袋后，移入出菇房中。

1.4.2 出菇管理 空氣相對濕度控制在90%以上，出菇房溫度15～20 ℃，晝夜溫差不超過5 ℃，光照強度200～300 Lux，加強通風，觀察出菇時間和原基數量；待子實體形成時增加通風量，濕度控制在85%～90%，當子實體90% 以上成熟時觀察菌蓋大小和顏色。

1.5 數據處理

采用SPSS 22.0 統計分析軟件及Excel 辦公軟件進行數據處理。

2 結果與分析

2.1 菌絲生長情況

在分離培養過程中，約7 d出現菌絲體，顏色潔白，有個別試管中菌絲未萌發或被污染直接舍棄，有菌絲萌發的試管約14 d 菌絲長滿試管。之后將菌絲接入原種培養基，觀察生長狀況如表2 所示。編號為T2 及T3 的菌絲接入到原種培養基后菌絲出現的時間較早，與T4、T5相比，達到顯著性水平，但T1 與T2 和T3 間未達到顯著水平，T1 與T4 和T5間也未達到顯著水平。在后續的生長過程中，T2及T4、T5 菌絲長滿瓶的時間較長，與T1 及T3 相比，達到了顯著水平，但T1 和T3 之間未達到顯著水平。從菌絲長勢上看，T3 來源的菌絲長勢強，T4來源的菌絲生長勢較強，T1、T2、T5 來源的菌絲生長勢較弱。從菌絲的致密程度和色澤來看，T1、T5菌絲呈現致密的生長狀況，但T5 的色澤與T1 相比更潔白，T2、T3 菌絲生長較致密，但T2 菌絲是灰白色，T3菌絲仍呈潔白，T4生長稀疏，但色澤較好，呈潔白；在菌絲生長過程中，有個別菌絲也出現了污染的情況，基本都在生長3～7 d 時出現，出現污染后，雜菌生長迅速抑制了菌絲的生長，但污染率不高，均為10%，出現污染的菌絲編號為T1、T2、T5。

表2 供試菌株菌絲生長狀況

2.2 出菇情況

在出菇的過程中，菌袋中的菌絲會最先形成菇體原基，但試驗發現，只有少數菌袋中出現了原基，具體情況如表3。T3、T4、T5 所接菌絲均未形成原基，只有T1、T2有原基形成，但原基數量很少，兩個來源的原基形成的時間也相似，T1 與T2 的出菇時間未達到顯著水平；原基開始形成時是黃白色，形成過程中逐漸變為紅褐色。T1、T2 形成少量原基后，大多數原基不再生長，只有少數原基形成完整子實體，當90%的子實體成熟時測量菌蓋直徑如表3 所示。T1 的子實體菌蓋直徑為2.32±0.26 cm，T2為2.63±0.39 cm，T1、T2 之間無明顯差異，兩者出菇情況相似。

表3 供試菌株出菇情況

3 討論

各來源的菌株在原種培養基中菌絲體出現的時間是T2、T3 與T4、T5 之間達到顯著水平，在滿瓶時間中，T1 和T3 達到了顯著水平，由此可以看出，T3生長得相對較快，再綜合菌絲長勢和色澤，T3菌絲的生長明顯有優勢，這可能與T3 的采集地點有一定關系；T3 的采集地點雖屬于旅游區，但保護較好且采集具體地點受到外界干擾少，其他幾個采集地點基本都是每年大量采集的地區，有個別地點周圍甚至出現了人為過度采集的痕跡。但確定T3 來源菌株是否是青岡蕈的最優菌株還需多選擇一些采集地點，特別是保護較好的地點，并且還需進行拮抗試驗等進一步的篩選。在出菇試驗中，T3 也未能成功出菇，可能是由于對青岡蕈本身的生物生態學習性了解不夠全面，設置的試驗條件有限。在后續的試驗中應考慮以上因素。

試驗中，各來源的菌株呈現的菌絲長勢與出菇結果顯然與采集地點的海拔沒有相關性，若需確定青岡蕈生長的具體海拔，得到最佳的試驗材料，還需進一步研究。